血小板輸注對晚期肺癌患者血清中MMP-9、MMP-2及VEGF水平的影響

韓麗娜，孫 楠，王 珊，趙 莎，周欣亮，趙學濤*

(1.河北醫科大學第四醫院輸血科，河北 石家莊 050011；2.河北醫科大學第四醫院檢驗科，河北 石家莊 050011；3.河北醫科大學第四醫院化療科，河北 石家莊 050011)

輸血作為有效的救治手段已被臨床廣泛應用，然而，輸血是一把雙刃劍，合理有效地輸血能挽救生命，不合理的運用則會影響生存質量，甚至危及生命。研究表明，輸血能改變患者的免疫狀態，但對惡性腫瘤患者的免疫調節產生負面影響，促進腫瘤細胞的生長、復發及轉移[1-2]。肺癌是我國目前發病率和病死率最高的腫瘤[3]，由于放療和化療導致的骨髓抑制或腫瘤晚期侵犯骨髓，晚期肺癌患者常出現血小板極度減低的情況，而血小板輸注是目前用于預防血小板明顯減少引起出血的重要治療手段。本研究回顧性分析晚期肺癌患者在輸注血小板后血清金屬基質蛋白酶9 (metallomatrix protease9,MMP-9)、金屬基質蛋白酶2(metallomatrix protease2，MMP-2)及血管內皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)水平，探討輸注血小板是否促進晚期肺癌的轉移。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2017年1月—2018年12月在我院化療科就診且資料完善的肺癌患者89例，所有患者均無免疫系統疾病，無細菌和病毒感染，未用皮質激素等影響免疫功能的藥物，血小板<20×109/L，且無出血。所有患者均為本次住院第一次輸血，之前未輸注任何血液成分。

本研究經醫院倫理委員會批準，患者治療前均知情并簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1血小板增加指數(corrected count increment，CCI)的計算 患者于19：00-21:00輸注血小板，在輸血當日清晨和輸血后的次日清晨分別采集血液，進行血小板的計數。 CCI= (輸注后血小板計數-輸注前血小板計數)×體表面積/輸入血小板總數，其中血小板計數單位為109/L,體表面積(m2)=0.006 1×身高(cm)+0.012 8×體重(kg)-0.015 29[4]。輸后CCI>7.5定義為臨床輸注有效，反之則無效。

1.2.2MMP-2、MMP-9及VEGF水平的檢測 所有患者均在輸注血小板的當日清晨空腹采靜脈血5 mL，輸注1或者2治療量血小板，次日清晨再次空腹采集靜脈血5 mL。分離血清，提取分離的血清置于EP管中-80 ℃冰箱凍存，標本集齊后，應用ELISA試劑盒檢測血清中MMP-2、MMP-9及VEGF的水平，檢測試劑盒均購自eBiosciences公司，操作按說明書進行。

1.3統計學方法 應用SPSS 19.0軟件進行統計分析，計量資料采用獨立樣本的t檢驗和配對t檢驗，計數資料比較采用χ2檢驗，相關性分析采用Pearson直線相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1血小板輸注有效率與患者年齡、性別、體表面積的關系 經計算，血小板輸入有效率為80.90%(72/89)。根據血小板輸注是否有效分為有效組72例和無效組17例，2組性別、年齡和體表面積差異均無統計學意義(P>0.05)。見表1。血小板輸注有效率與年齡、性別、體表面積無相關性(r=-0.069、-0.077、0.017，P=0.516、0.467、0.871)。

表1 血小板輸注有效率與患者年齡、性別、體表面積的關系Table 1 Relationship between the effectiveness of platelet infusion and patients age, gender and body surface area

2.22組血清中MMP-9、MMP-2和VEGF水平的比較 在血小板輸注前，2組血清中MMP-9、MMP-2及VEGF水平差異無統計學意義(P>0.05)。在血小板輸注后，有效組血清中MMP-9、MMP-2及VEGF水平明顯高于無效組，差異均有統計學意義(P<0.01)；有效組血清中MMP-9、MMP-2及VEGF水平高于血小板輸注前，差異均有統計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 2組血清中MMP-9、MMP-2和VEGF水平的比較Table 2 Comparison of serum MMP-9,MMP-2 and VEGF levels between two groups

*P值<0.05與輸血小板前比較(配對t檢驗)

3 討 論

血小板由骨髓中成熟的巨核細胞裂解、胞質脫落而成，除了血栓和止血外，還參與諸多病理生理過程，如先天適應性免疫應答、血管生成、腫瘤轉移、動脈粥樣硬化等。研究顯示，血小板在腫瘤的侵襲和轉移過程中起到關鍵作用[5]。當腫瘤細胞自原發灶脫落進入血管，然后血小板黏附在癌細胞表面，形成物理屏障，避免血流撞擊力對癌細胞的損傷，使腫瘤細胞存活概率上升；血小板表面的標志物及MHCⅠ類分子轉移到腫瘤細胞表面，幫助其逃避自然殺傷細胞的殺害；血小板與腫瘤細胞形成聚集體，分泌大量細胞因子促進腫瘤的轉移[6]。對于大部分實體瘤而言，腫瘤快速生長急需營養供給，網狀血管結構大量生成，流經該處血管的血小板被激活后，成為腫瘤微環境的一部分從而促進腫瘤發生發展。研究表明，血小板數量增多與腫瘤轉移具有正相關，其中非小細胞肺癌患者兼有血小板增多癥的比例為17%～53%[7-11]。在腫瘤細胞受到阻滯2 h內即可形成由血小板誘導的轉移灶，從而促進后續的轉移[12]。那么晚期肺癌患者輸注血小板是否也具有與自身血小板一樣的效果，是否促進肺癌的侵襲和轉移呢，本研究就此作了研究。

惡性腫瘤的主要生物學特性是侵襲和轉移,VEGF和金屬基質蛋白酶 (matrix metal proteinases，MMPs)是與肺癌的發展和轉移密切相關的物質。腫瘤血管新生是惡性腫瘤生長和轉移的前提，VEGF可作用于血管內皮細胞，增加血管通透性，使血漿蛋白和纖維蛋白滲出，為腫瘤細胞移動侵入提供暫時的基質成分，還可通過上調血漿活化因子的活性，促進血管構建，生成新的毛細血管，促進肺癌的發生發展和轉移[13]。有文獻報道非小細胞肺癌血漿VEGF水平增高，提示VEGF對非小細胞肺癌患者有很好的診斷價值[14]。MMPs參與多種病理生理過程，通過酶解其膠原底物，發揮“鉆頭”樣作用，為腫瘤的轉移打開通路[15]。楊燕君等[16]研究表明，非小細胞肺癌患者血清MMP-2及MMP-9的水平明顯高于健康對照組和良性腫瘤組，并且有淋巴結轉移的患者血清MMP-2和MMP-9的水平明顯高于無淋巴結轉移的患者。因此，MMP-2、MMP-9及VEGF是很好的研究腫瘤侵襲和轉移的指標，本研究通過對血清中這三種細胞因子的變化觀察輸注的血小板是否促進晚期肺癌的轉移。

本研究結果顯示，在血小板輸注前，2組血清中MMP-9、MMP-2及VEGF水平差異無統計學意義(P>0.05)；在血小板輸注后，有效組血清中MMP-9、MMP-2及VEGF水平明顯高于無效組，差異均有統計學意義(P<0.01)。說明輸注的活化血小板可能參與腫瘤的某些生物學行為，導致此3項指標發生變化。有效組血清中MMP-9、MMP-2及VEGF水平高于血小板輸注前，差異均有統計學意義(P<0.05)，證明輸注有效的血小板與自身的血小板均能促進腫瘤的發展、侵襲和轉移。輸注無效組此3項指標沒有變化，其原因可能是：①血小板輸注后很快在內皮系統遭到破壞，血小板碎片不能黏附在腫瘤細胞的表面，使腫瘤細胞受到血流剪切力的損傷，不利于其血行轉移；②由于血小板破碎，其表面標志物不能轉移到腫瘤細胞，從而使腫瘤細胞遭到自然殺傷細胞的攻擊；③血小板不能通過外泌體等分泌促進腫瘤轉移的相關細胞因子。綜上所述，本研究發現輸注的血小板也能促進肺癌患者的發展和轉移，因此應該盡量避免給肺癌患者輸注血小板，必要時聯合應用促血小板生長因子，或在化療時預防性使用重組人血小板生成素等措施，以減少異體血小板輸注量[17]。對于異體血小板促進肺癌患者腫瘤發展和轉移的具體機制有待進一步研究。