復方黃柏液涂劑體外抑菌效果研究

孫緒丁，劉振勛，樊 苗，閆 斌

（1.山東漢方制藥有限公司，山東 濟南 250101；2.山東漢方生物科技有限公司，山東 濟南 250101；3.山東中醫藥大學，山東 濟南 250355）

金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌等是引起醫院內感染的常見致病菌[1，2]。然而，抗生素的不合理使用加劇了細菌耐藥性的產生，使常用抗生素對致病菌的作用不斷減弱，引起多種藥源性疾病，給人類健康造成潛在威脅[3]。開發新型具有抗菌活性的化合物周期長、難度大；我國中藥資源豐富，研究發現，傳統中藥具有顯著的抗菌作用，毒副作用小，且不易產生耐藥性[4]。因此，中藥抑菌作用的藥理學研究受到越來越多研究者的關注。

復方黃柏液涂劑由連翹、黃柏、金銀花、蒲公英和蜈蚣五味藥組成。具有清熱解毒，消腫祛腐等功效，用于治療潰瘍性結腸炎、瘡瘍潰后、外傷感染等。臨床上在皮膚疾病[5]、外科感染[6]、肛腸疾病[7]、婦科疾病[8]、泌尿系統疾病[9]等相關疾病的治療中，均取得了滿意的療效，并成功進入2018版國家基本藥物目錄。本研究選用常見的5種致病菌作為實驗菌，進行體外抑菌實驗，觀察復方黃柏液涂劑及各組方提取物的抑菌作用，為其在感染性疾病中的應用提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1 中藥材

復方黃柏液涂劑（山東漢方制藥有限公司，批號：16010811）；連翹提取物（山東漢方制藥有限公司，批號：150730）；黃柏提取物（山東漢方制藥有限公司，批號：150919）；金銀花提取物（山東漢方制藥有限公司，批號：150828）；蒲公英提取物（山東漢方制藥有限公司，批號：151116）；蜈蚣提取物（山東漢方制藥有限公司，批號：151118）。

1.1.2 菌種與培養基

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）[CMCC(B)26003]，銅綠假單胞菌（Pseudomonasaeruginosa）[CMCC(B)10104]，大腸埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B)44102]，肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）[CMCC(B)46117]，變形桿菌（Proteus sp）[CMCC(B)49027]，以上菌種均由山東中醫藥大學微生物教研室提供。MH(B)肉湯培養基購于北京奧博星生物技術有限公司，按說明配制后，于121℃高壓滅菌20 min備用。

1.2 方法

1.2.1 菌液的制備

將菌種接種至滅菌M H（B）肉湯培養基中培養18～24小時，用無菌生理鹽水溶液以比濁管調整菌液濃度為1×106CFU/mL。

1.2.2 復方黃柏液涂劑及各組方提取物MIC測定

采用微量稀釋法測定MIC，參照NCCLS標準進行。在96孔板中每孔加入培養基100 μL，然后在第1行中加入100 μL藥液，從第1行中吸取100 μL混合液加入第2行，依次類推至第6行，得到2、4、8、16、32、64倍稀釋藥物梯度。第7行每孔加入慶大霉素10μl為陽性對照，第8行直接加入菌液作為陰性對照。同時設立藥物稀釋梯度和培養基空白作為對照，每個藥物重復三次。分別加入各菌液10 μL，37℃孵育24 h，觀察結果。

2 結 果

復方黃柏液涂劑及各組方提取物對5種CMCC標準菌株均有良好的抑制作用。結果見表1。

表1 復方黃柏液涂劑及各組方提取物抗菌試驗結果

3 討 論

試驗結果證實復方黃柏液對多種細菌具有良好的抑制作用。在3.16 mg/mL濃度下，對銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、變形桿菌表現出較強的抑制效果，對大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌幾乎無效。復方黃柏液組方之一黃柏藥材提取物對上述五種菌種的抑制強度較弱，連翹藥材提取物對上述五種菌種的抑制強度中等，蒲公英及金銀花藥材提取物對變形桿有較強的抑制活性（6.25 mg/mL），對大腸埃希菌抑制活性中等（50 mg/mL），對其他三種細菌抑制活性較弱。蜈蚣藥材提取物對銅綠假單胞菌（0.75 mg/mL）、金黃色葡萄球菌（0.75 mg/mL）、變形桿菌（0.75 mg/mL）、肺炎克雷伯菌（0.75 mg/mL）抑制活性較強。

復方黃柏液涂劑對多種細菌有確切的抑制效果，其中各組方藥材不同目標細菌的抑制活性有所不同。如蒲公英對變形桿菌有較強的抑制活性，而蜈蚣對銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、變形桿菌和肺炎克雷伯菌均有顯著的抑制活性。由此證明復方黃柏液涂劑有良好的抑菌作用。復方黃柏液涂劑改變了傳統的中藥外用劑型，克服了傳統中藥外用膏劑、散劑等劑型中含汞和砷等劇毒品的缺陷。集中西醫外用藥之長，避其所短，顆粒微細，易于吸收，引流通暢，抗菌生肌值得在臨床上推廣使用。