復方氨酚烷胺膠囊（片）膽紅素的含量考察

（菏澤市食品藥品檢驗檢測研究院，山東 菏澤 274000）

復方氨酚烷胺制劑適用于緩解普通感冒及流行性感冒引起的發熱、頭痛、四肢酸痛、打噴嚏、流鼻涕、鼻塞、咽痛等癥狀。本品為復方制劑，膠囊劑和片劑處方為每粒（片）含對乙酰氨基酚250 mg，鹽酸金剛烷胺100 mg，人工牛黃10 mg，咖啡因15 mg，馬來酸氯苯那敏2 mg。本品有解熱、鎮痛效果，能解除或改善感冒引起的各種癥狀。目前，國內共130家復方氨酚烷胺片生產企業，涉及130個批準文號；121家復方氨酚烷胺膠囊生產企業，涉及120多個批準文號。復方氨酚烷胺膠囊、片劑的現行質量標準[1-3]均未對人工牛黃中主要成分膽紅素進行質量控制。在該制劑質量控制方面，對復方氨酚烷胺膠囊劑和片劑中的對乙酰氨基酚、鹽酸金剛烷胺、咖啡因和馬來酸氯苯那敏進行控制的研究較多[4-10]，對人工牛黃成分含量分析的不多[11]。復方氨酚烷胺類制劑是我省風險監測探索研究品種，我們對28個廠家生產的61批次樣品中人工牛黃膽紅素進行了考察。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司），DAD檢測器，安捷倫色譜工作站；FRQ-1010T型超聲波清洗器（杭州法蘭特公司），輸出功率 600 W，工作頻率42 kHz；Mettler XS 105十萬分之一天平（Mettler Toledo）。

1.2 試藥

膽紅素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：100077-201808，含量98.9 %）；復方氨酚烷胺膠囊（來自12個廠家，共22個批次）；復方氨酚烷胺片（來自17個廠家，共38個批次）；其他試劑均為色譜純。

2 方法與結果

2.1 對照品與供試品溶液制備

2.1.1 對照品溶液制備 取膽紅素對照品適量，精密稱定，加三氯甲烷制成每1 ml含8 μg的溶液，即得。

2.1.2 供試品溶液制備 分別取裝量差異檢測合格的膠囊內容物或重量差異檢測合格的片劑供試品，研細，精密稱取細粉適量（約相當于人工牛黃30 mg），置25 ml量瓶中，加三氯甲烷-甲醇-水-鹽酸（900:100:3:0.3）適量，振搖，超聲15 min溶解，迅速冷卻至室溫，加上述溶液稀釋至刻度，搖勻，過濾，取續濾液，即得。

2.2 色譜條件與系統適用性試驗

色譜柱：Agilent C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；以甲醇-三氯甲烷-1 %磷酸溶液（81:13:6）為流動相；流速1.0 ml/min；檢測波長449 nm；柱溫30 ℃；進樣體積10 μl。理論板數按膽紅素峰計算應不低于3000，分離度應符合規定。色譜圖見圖1。色譜峰面積大，峰型好，沒有拖尾現象，主峰前后沒有肩峰，各項系統適用性實驗參數均達到藥典要求。

圖1 對照品溶液、供試品溶液及空白溶液HPLC圖譜

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系考察 取膽紅素對照品適量（約 16 mg），精密稱定，置100 ml 量瓶中，加三氯甲烷溶液適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液；分別精密量取貯備液3，2，1，0.5，0.2 ml，分別置10 ml量瓶中，并用三氯甲烷稀釋至刻度，搖勻，進樣分析，記錄色譜圖，以濃度（μg/ml）為橫坐標（X），峰面積（A）為縱坐標，繪制標準曲線。得回歸方程：A=53.39X-40.15（r=0.9996，n=5，膽紅素線性范圍為 3.17～47.56 μg/ml 。

2.3.2 精密度試驗

2.3.2.1 重復性 取同廠家同批號樣品（批號：20190301），按2.1.2項下方法制備供試品溶液，測定含量6次，平均含量為0.1670 mg/粒，RSD=0.60 %，表明本方法精密度良好。

2.3.2.2 中間精密度 在不同日期，取同廠家同批號樣品（批號：20190301），按2.1.2項下方法制備供試品溶液，按2.2項色譜條件進樣測定，平均含量為0.1659 mg/粒，RSD=1.1 %；不同實驗人員，取同廠家同批號樣品（批號：20190301），按2.1.2項下方法制備供試品溶液，按2.2項色譜條件進樣測定，平均含量為0.1732 mg/粒，RSD=1.4 %；使用不同品牌的十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱[Agilent（4.6 mm×250 mm，5 μm）；Phenomenex（4.6 mm×250 mm，5 μm）；Kromasil 100-5（4.6 mm×250 mm，5μm）]，取同廠家同批號樣品（批號：20190301），按2.1.2項下方法制備供試品溶液，按2.2項色譜條件進樣測定，平均含量為0.1632 mg/粒，RSD=1.0 %。

2.3.3 加樣回收率測定 分別取重量差異檢測合格的6批供試品（批號：20190301，20190302，20190303，20190304，20190210，20190810），研細，精密稱取細粉適量（約相當于人工牛黃30 mg），置25 ml量瓶中，加入一定量的膽紅素對照品，按2.1.2項下方法制備供試品溶液，按2.2項下色譜條件進樣測定，計算回收率，結果見表1。

表1 膽紅素加樣回收率試驗結果

2.3.4 定量限與檢測限 取2.1.1項下的膽紅素對照品溶液，以三氯甲烷為溶劑，進行系列稀釋，進樣測定，測得定量限（S/N≈10）為0.751 μg/ml（7.51 ng）；檢測限（S/N≈3）為0.250 μg/ml（2.50 ng）。

2.3.5 耐用性試驗 采用不同品牌的高效液相色譜儀和色譜柱進行含量測定，并適當調整流動相的比例、pH值與流速，或在適當范圍內調整柱溫箱溫度，均可得到滿意的實驗數據，表明該含量測定方法有良好的耐用性。

2.4 含量測定結果

取28個廠家的61批次復方氨酚烷胺制劑，按2.1.2項方法制備供試品溶液，分別精密量取供試品溶液與對照品溶液各10 μl，注入液相色譜儀，測定，計算樣品中膽紅素的含量與轉移率。結果見表2。

表2 復方氨酚烷胺膠囊（片）人工牛黃中膽紅素含量測定結果

注：*轉移率低于85 %

3 討論

《中國藥典》2015年版一部[12]規定：藥材人工牛黃中，按干燥品計算，含膽紅素不得少于0.63 %。由表2可見，61批次樣品中，人工牛黃中膽紅素含量為0.43 %～0.65 %，平均含量為0.58 %，人工牛黃中膽紅素投料轉移率為68.3 %～103.2 %，平均轉移率為92.4 %。有3個廠家的8批次膽紅素轉移率低于85 %，最低轉移率為廠家代碼21的68.3 %，值得引起我們的重視。61批次復方氨酚烷胺制劑膽紅素含量整體偏低，含量均值、轉移率均值都低于藥材人工牛黃膽紅素含量的低限，原因值得進一步研究。

由于現行的質量標準僅對人工牛黃中膽酸進行化學鑒別，質量標準存在明顯的漏洞，部分企業為降低成本，牟取更大利益，有可能鉆質量標準的空子，使用劣質人工牛黃，導致膽紅素含量偏低。生產環境條件不佳，特別是生產過程不注意避光，也有可能導致膽紅素含量偏低。

建議對膽紅素含量偏低的企業進行風險提示，督促其改進生產工藝，并規范倉儲條件，必要時對涉嫌企業進行現場檢查。藥品監督管理部門應完善并提高質量標準，嚴格控制該制劑質量，有效防范可能出現的質量風險。