microRNA-486對低氧導(dǎo)致的原代大鼠心肌細(xì)胞損傷和凋亡的改善作用

張海濤，韋薇，齊弘煒，袁彪，湯楚中

（1.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心臟外科，河北 承德 067000；2.承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院血液檢驗(yàn)室，河北 承德 067000；3.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京同仁醫(yī)院心臟外科，北京 100730；4.中國人民解放軍總醫(yī)院第六醫(yī)學(xué)中心心臟外科，北京 100048）

缺血性心臟病是最嚴(yán)重的心血管疾病之一，其病理生理機(jī)制以及心肌細(xì)胞缺血適應(yīng)機(jī)制尚未完全闡明。有證據(jù)表明，微小RNA （microRNA，miRNA）可能在缺血性心臟病中發(fā)揮關(guān)鍵作用［1-2］。miRNA是一類在轉(zhuǎn)錄后基因調(diào)控中發(fā)揮功能的非編碼小RNA，miRNA在缺血性心臟病發(fā)病機(jī)制和進(jìn)展的過程中起關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用［3-4］。miR-486是心臟高豐度表達(dá)的重要miRNA之一，有研究［5］表明，miR-486在攜帶MRTF-A重組腺病毒轉(zhuǎn)染的新生大鼠心肌細(xì)胞表達(dá)的多種miRNA中最為突出。而MRTF-A在心肌缺血期間，是調(diào)控心肌細(xì)胞纖維化的重要轉(zhuǎn)錄因子。因此，miR-486的表達(dá)調(diào)控與心肌缺血和預(yù)后有明顯相關(guān)性，但是miR-486在心肌細(xì)胞中的作用目前尚不清楚。因此，本研究擬利用腺病毒介導(dǎo)的基因高表達(dá)和沉默技術(shù)，初步研究miR-486在心肌細(xì)胞缺氧損傷中的作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物

1～2日齡的清潔級SD大鼠乳鼠15只，購于北京科宇動物養(yǎng)殖中心。

1.2 主要試劑和儀器

miRNA提取試劑盒、miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒、miRNA-486熒光探針、實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀 （美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司），腺病毒ad-miR-486、腺病毒admiR-486-antago （上海漢恒生物公司），乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH） 試劑盒 （南京建成生物工程研究所有限公司），CCK-8試劑盒 （中國東仁化學(xué)科技有限公司），AnnexinⅤ/PI試劑盒 （武漢博士德生物工程有限公司），細(xì)胞培養(yǎng)箱、紫外分光光度計(jì)（美國賽默飛世爾科技有限公司），低氧培養(yǎng)箱 （英國Ruskinn公司），酶標(biāo)儀 （美國分子儀器公司），流式細(xì)胞儀 （美國BD公司）。……