EGFR 基因突變與血清腫瘤標志物的關系

朱曉紅

（蘇州市吳中人民醫院呼吸內科 江蘇 蘇州 215100）

肺癌是世界范圍內最常見、致死人數最多的惡性腫瘤之一，其發病率及增長速度高居各惡性腫瘤之首，晚期肺癌的5 年存活率不超過15%[1]。近年來，以表皮生長因子受體為靶標的分子靶向治療受到國內外腫瘤界的普遍關注。EGFR 絡氨酸激酶抑制劑吉非替尼和厄洛替尼已被美國食品藥品管理局(FDA)批準用于治療晚期非小細胞肺癌（NSCLC）[2]。大量的回顧性研究表明，對EGFR-TKI 治療有效的NSCLC 患者的EGFR 突變率為77%[3]，提示EGFR 突變對吉非替尼療效是一個必不可少的因素。但EGFR 突變基因檢測需要手術標本，文獻報道[4]，非小細胞肺癌患者，尤其是老年非小細胞肺癌患者中有33%為I 或Ⅱ期，而僅6%得到手術治療。標本量的不足及非原發灶腫瘤標本獲取困難有時無法進行EGFR 的檢測，如大型的IPASS 研究中不到40%的病人才能提供合適的腫瘤組織進行檢測。故在無法進行EGFR 測序時，我們希望有其他指標間接判斷是否存在EGFR 突變。國內外研究[5]均發現EGFR-TKI 的疾病控制率及生存期與治療前血清CEA 的水平及治療后是否降低相關，且肺腺癌患者CEA 水平和EGFR 是否突變亦相關。本研究中，我們通過化學發光酶免方法檢測肺癌患者的血清腫瘤標記物癌胚抗原(CEA)、糖類抗原(CA125、CA19-9)，同時手術標本進行EGFR 突變檢查。選取具有腺癌相對特異性的腫瘤標記物和EGFR 進行相關性分析，以期發現更多的能預測患者有無EGFR 突變的指標。

1.資料與方法

1.1 一般資料

收集我院及蘇州大學附屬第一醫院2011 年6 月—2012 年12 月肺腺癌住院患者61 人，均經病理學確診，年齡55 ～81 歲，平均年齡63.2±12.6 歲，其中男32 例，女29 例。組間性別、年齡均無統計學差異（P ＞0.05）。

1.2 腫瘤標志物的檢測

抽取空腹靜脈血2ml，不加抗凝劑，標本靜置1 小時，離心(2000rpm×5min)后吸出血清，待測。溶血和黃疸標本不宜檢測；脂血標本先離心(20000rpm×3min)，去除上層油脂后，取下層血清檢測。應用湖州數康生物科技有限公司提供的試劑盒檢測CEA 、CA125、CA19-9。

1.3 EGFR 基因突變的測定

新鮮腫瘤組織經包埋、切片、染色，選擇典型腫瘤細胞巢部位，用PCR 直接擴增EGFR 基因第19、2l 外顯子的基因片段。2%瓊脂糖凝膠電泳鑒定擴增片段，通過Alpha Innotech凝膠成像系統觀察PCR 產物電泳結果。采用Chromas 軟件分析測序圖譜，分析判斷EGFR 基因第19、2l 外顯子突變區域。

1.4 判定標準

正常參考值由數康生物科技有限公司蛋白芯片檢測試劑盒提供：陽性判定標準為：CEA ＞5ng/ml，CA125＞35KU/L，CAl9-9 ＞35KU/L。

1.5 統計學處理

采用SPSS13.0 軟件，計量資料以均數和標準差表示，組間比較采用t 檢驗；計數資料的比較用卡方檢驗，以P ＜0.05為差異有統計學意義。

2.結果

2.1 61 例標本中存在EGFR 基因突變的例數為30 例，總突變率為49.18%（30/61）；第19 號外顯子突變的例數為20例，其中746-750 位連續5 個密碼子的缺失(DelE746-A750)的突變的病例數為16 例，其他罕見類型突變有4 例；另外第2l 號外顯子突變的例數為10 例，21 位點的突變都是點替換突變，第858 位上的亮氨酸被精氨酸代替(L858R)。全部突變通過PCR 產物正反向測序確證。

2.2 EGFR 基因突變陽性的30 例NSCLC 中， CEA 陽性20例（66.67%），EGFR 基因突變陰性的31 例NSCLC 中，CEA 陽性12 例（38.71%），見表。

表 61 例測定EGFR 突變與CEA、CA125、CA199 的相關性[n(%)]

3.結論

EGFR 基因突變與靶向治療藥物臨床效果的關系已經得到肯定[6]。大部分晚期肺癌病人能獲得組織的方法是肺穿刺活檢和纖支鏡檢查活檢，但這兩者的活檢組織的樣本小，通常僅含數萬個細胞，而組織DNA 經PCR 擴增后進行基因測序，DNA 需要量至少在100ng 以上，因此，檢測準確度時而受到影響。其次，腫瘤穿刺活檢術僅適用于部分病人，標本采集有難度，作為一種損傷性操作，存在一定的醫療風險，并且相當一部分病人由于病灶的特殊解剖部位（病灶鄰近心臟及大血管、腦轉移）等而不適合進行這種操作。最后，該方法技術要求較高，難以普及?；驕y序雖然是最直接、準確的檢測方法，但由于95%以上的突變屬于雜合性突變（即同時存在突變型和野生型擴增產物），準確診斷突變類型難度較大，尤其是外顯子19 的基因突變譜比較復雜，不少標本需要通過基因克隆后才能確定其突變類型[7]。因而該方法適合少數技術裝備精良的實驗室開展，在各級醫院想要獨立開展這項診斷比較困難。

日本學者SHOJI 等[8]研究了NSCLC 不同時期血清CEA表達水平與E G F R 基因突變之間的關系，發現肺癌E G F R 基因突變與血清C E A 表達相關。國內也有學者[9]在組織病理學水平研究了NSCLC 手術標本的CEA 表達水平與EGFR 基因突變之間的關系，發現C E A 蛋白表達陽性的N S C L C 易發生E G F R 基因突變，兩者的相關性有統計學意義。本研究61 例肺癌患者，EGFR 基因突變陽性的30 例NSCLC 中，CEA 陽性20 例（66.67%），E G F R 基因突變陰性的31 例N S C L C 中，CEA 陽性12 例（38.71%）。因此，CEA 表達水平與EGFR 基因突變有一定關系，CEA 高表達的NSCLC 易發生EGFR 基因突變。從而對于肺腺癌患者，血清腫瘤標志物CEA 陽性時， EGFR 基因靶向治療可能有效。