豬唾液檢測應用研究進展

楊曉培 趙靜 于菲菲

[摘 要] 唾液是一種重要的外分泌液體，是由多種來源的蛋白質和其他分子組成的復雜混合物，可從中挖掘大量生物信息。唾液檢測以其無創、便捷的優勢，成為比較熱門的人類醫學檢查方法，但在豬只飼養、運輸、屠宰過程中的應用還不普遍。本文總結唾液檢測在豬只病毒性、細菌性疾病診斷以及養殖過程中動物福利的研究進展，為進一步研究提供思路。

[關鍵詞] 豬唾液檢測;疾病診斷;動物福利

[中圖分類號] S858.28 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-7909（2020）12-111-2

1 唾液概述

唾液是由超過99%的水組成的稀溶液構成，內含多種電解質、蛋白質、酶、黏液和含氮化合物[1]。Bandhakavi等發現，人唾液中約20%蛋白質存在于血漿中，且唾液在一定程度上能反映血清或口腔中的激素、藥物、抗體、病毒及其他成分的濃度，表明唾液作為一種生物液體的重要性和潛力[2]。

2 唾液檢測優勢

目前，使用唾液作為診斷介質已可以用來監測部分人類疾病，監測豬的全身健康和評估系統性疾病的體系還未形成，多數仍停留在實驗室研究階段。

豬的唾液檢測方法是利用其好奇心理和嗜好咀嚼的特性，采用紗布球采集唾液，在動物常用檢測方式中優勢明顯。由于豬只皮下脂肪組織豐富，樣本采集有技術要求，唾液樣本可以由非技術人員操作獲取，減少人力成本;無創采集的方式減少豬只應激反應，真實反映豬只平息狀態下的生理情況，也使得重復試驗操作便捷、高效;能減少有創采樣過程中可能造成的感染，監測方式更加安全。

3 唾液檢測在豬疾病診斷中的研究進展

豬唾液中富含的生物信息使得唾液檢測可用于免疫后抗體檢測、疾病早期診斷、治療效果判斷等。同血清檢測方式相比，除了有采集便捷的優勢外，唾液中分泌性抗體產生速度快、穩定性高，而且有對抗原的主動捕捉能力[3]，應用前景好。

3.1 細菌性疾病

唾液中可以檢測到葡萄球菌、幽門螺旋桿菌、枯草芽孢桿菌、胸膜肺炎放線桿菌、乳球菌和乳酸菌等細菌、豬鏈球菌和副鏈球菌等[4-6]，以唾液樣本檢測為手段，通過PCR、ELISA手段或者檢測特異性抗體來評估細菌感染和定植情況。例如，Sakura等通過采集4個養殖場不同生長階段的84頭健康豬的唾液、糞便和陰道拭子樣本，了解養豬場豬鏈球菌和副鏈球菌的定殖情況，確定感染源[5]。Bosi則通過檢測血樣和唾液樣本中大腸桿菌鞭毛特異性的IgA，發現喂食噴霧干燥血漿可以改善豬只生長性能，并減弱大腸桿菌誘導的炎癥反應[6]。

3.2 病毒性疾病

唾液中可直接檢測到的病毒包括非洲豬瘟病毒（ASFV）、豬瘟病毒（CSFV）、豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PPRSV）、豬口蹄疫病毒（FMDV）、偽狂犬病毒（PRV）、豬副流感病毒、豬圓環病毒和星狀病毒等，也可通過檢測抗體判斷豬是否被病毒感染[3，4，7，8]。

在非洲豬瘟的檢測和防控中，唾液檢測成為最普遍的檢測方式。除采樣優勢外，唾液中的病毒出現較血液早2～5 d，更利于ASFV的早期診斷[7]。在血清和唾液中的抗體水平比較試驗中，侯亞琴等選取種公豬、母豬、育肥豬成年豬，通過正向間接血凝試驗檢測CSFV、FMDV抗體，結果表明豬血清和唾液中抗體水平有高度相關性[3]。而位玉玲則建立了唾液中豬PRV的qRT-PCR方法和唾液中豬PRV抗體間接ELISA的方法，得知血清和唾液中抗體消長規律基本一致，但由于疾病發展第一階段是在口腔、鼻黏膜增殖，因此在第一階段唾液與血清中的PRV量稍有偏差[8]。

4 唾液檢測在動物福利評估中的應用

近年來，我國開始逐漸重視動物福利問題，不僅是因為肉類制品品質問題遭到出口國家抵制，更是因為動物福利影響動物生產性能、內分泌、免疫功能、肉類品質。

Damian等在豬唾液蛋白組學研究中檢測到353個蛋白，通過給予刺激后發現，有44個蛋白發生顯著性改變，無論是受到長期的跛行困擾還是在捕捉時受到短期刺激，均影響唾液中蛋白質的表達[9]。近年來，相關學者在不斷探索新的蛋白標志物評估豬的應激狀況。例如，Escribano等通過檢測唾液睪酮濃度發現豬只批內、批間變異系數低，而且不同采樣時間、不同年齡無顯著差異;通過鼻套圈和短途運輸應激分析生長豬唾液睪酮量，結果表明唾液睪酮量顯著上升，唾液睪酮水平可以作為豬急性應激的一個可能的標記物[10]。Muneta等首次證明了IgA在豬唾液中的表達與應激相關，通過免疫組化染色證實IgA在豬唾液腺漿細胞中表達，通過ELISA檢測到豬唾液中的IgA，并且抑制應激將使唾液中的IgA水平升高[11]。此外，Camila等發現血液樣本檢測動物應激狀態的方法也可通過唾液檢測實現，母豬泌乳期唾液檢測總抗氧化能力、當量抗氧化能力、銅還原抗氧化能力、鐵還原能力、血漿、尿酸以及氧化蛋白產物和過氧化氫的含量有效可靠[12]。

5 討論

唾液中存在2種分泌型抗體，其中IgG滴度總體較血液中偏低，但總體趨勢一致，IgA還可用于檢測非全身性感染性疾病，檢測范圍廣;該方法采樣容易，符合大批量檢測要求。但唾液采集易受到環境因素如養殖環境中存在的細菌等影響，同時檢測靈敏度較血液檢測偏低，需不斷優化檢測標記物、指標值，繼續挖掘靈敏度高的標記物，才能充分發揮唾液樣品的潛在診斷價值。

參考文獻

[1]Humphrey S P，Williamson R T. A review of saliva：Normal composition，flow，and function[J].Journal of Prosthetic Dentistry，2001（2）：162-169.

[2]Bandhakavi S，Stone M D，Onsongo G，et al. A dynamic range compression and three-dimensional peptide fractionation analysis platform expands proteome coverage and the diagnostic potential of whole saliva[J].Journal of Proteome Research，2009（12）：5590-5600.

[3]侯亞琴，張建明，李慧，等.豬唾液與血清中免疫抗體相關性研究[J].畜禽業，2014（3）：18-19.

[4]Gutierrez A，Ceron J，Fuentes-Rubio M，et al. A Proteomic Approach To Porcine Saliva[J].Current Protein & Peptide Science，2014（1）：56-63.

[5]Sakura，Arai，Hyunjung，et al. Assessment of pig saliva as a Streptococcus suis reservoir and potential source of infection on farms by use of a novel quantitative polymerase chain reaction assay[J].American Journal of Veterinary Research，2018（9）：941-948.

[6]Bosi P，Casini L，Finamore A，et al. Spray-dried plasma improves growth performance and reduces inflammatory status of weaned pigs challenged with enterotoxigenic Escherichia coli K88[J].Journal of Animal Science，2004（6）：1764-1772.

[7]付文貴.非洲豬瘟檢測技術要點[J].今日畜牧獸醫，2019（12）：11.

[8]位玉玲.唾液中豬偽狂犬病毒熒光定量PCR和ELISA檢測方法的建立與初步應用[D].杭州：浙江農林大學，2017.

[9]Kaufman E，Lamster I B. The diagnostic applications of saliva - A review[J].Critical Reviews in Oral Biology & Medicine，2002（2）：197-212.

[10]Escribano D，Fuentes-Rubio M，Cerón J J. Salivary testosterone measurements in growing pigs：validation of an automated chemiluminescent immunoassay and its possible use as an acute stress marker[J].Research in Veterinary Science，2014（1）：20-25.

[11]Muneta Y，Yoshikawa T，Minagawa Y，et al. Salivary IgA as a Useful Non-Invasive Marker for Restraint Stress in Pigs[J].Journal of Veterinary Medical Science，2010（10）：1295-1300.

[12]Camila Peres Rubio，Eva Mainau，José Joaquín Cerón，et al. Biomarkers of oxidative stress in saliva in pigs：analytical validation and changes in lactation[J].BMC Veterinary Research，2019（1）：144.