高效液相色譜法測定食用油中黃曲霉毒素的討論

劉振濤

摘 要：食用油中的黃曲霉毒素（AFT）是由寄生曲霉菌和黃曲霉菌代謝產生的一組具有強毒性的真菌毒素及其衍生代謝物，其中以B1、B2、G1、G2、M1與M2最為常見。而要控制食品中的黃曲霉毒素含量，就要有科學的檢驗標準和正確的方法對其進行檢測和分析，確保含有黃曲霉毒素的食用油不流入市場，保證食品質量安全和人們群眾的生命安全。

關鍵詞：高效液相色譜法測定;島津液相色譜儀;食用油

黃曲霉毒素中含有很多劇毒物質，這些劇毒物質的過量攝入會導致人類在短時間內中毒，甚至會因來不及醫治而死亡。1993年，黃曲霉毒素被世界衛生組織（WHO）癌癥研究機構劃定為一類天然存在的致癌物，屬毒性極強的劇毒物質，如果長期過量攝入，會讓人類患肝癌的概率大大提高。而黃曲霉毒素的化學結構又比較穩定，一般不易改變，同時又具有一定的耐熱性，只有把食品加熱到230 ℃以上時才能破壞其中的黃曲霉毒素，所以一般的食物處理很難把它們清除。如果不慎服用了黃曲霉毒素，人體的免疫系統受到破壞，會對身體造成不可挽回的損害，危害人類生命安全，我國為了保護人民的健康安全，對可能含有黃曲霉毒素的食品進行了嚴格的含量限定及檢測方法。

黃曲霉毒素的檢測方法主要包括：同位素稀釋液相色譜-串聯質譜法、高效液相色譜-柱前衍生法、高效液相色譜-柱后衍生法、為酶聯免疫吸附篩查法、為薄層色譜法與放射免疫法等。在過去的黃曲霉毒素分析方法中，薄層色譜法是使用最廣泛的分析方法，也是使用最早的技術，但是由于要求較多，操作步驟繁瑣，加上提取和凈化的效果不夠理想，在萃取液中依然存有許多雜質，所以現在很少使用這種方法。同位素稀釋液相色譜-串聯質譜法因為設備價格較高，還不能在基層檢驗檢測機構普遍采用，而酶聯免疫吸附篩查法因準確度不高而僅限于常規的定性快速篩查檢測，高效液相色譜法雖然沒有同位素稀釋液相色譜-串聯質譜法準確度高，但因操作便捷、分辨率高、分析時間較短、可同時檢測多個AF種類以及適于大批量樣品的分析等優點，是目前基層檢驗檢測機構采用較多的一種檢驗檢測方法[1]。本文將圍繞高效液相色譜法檢測食用油中黃霉曲毒素的相關問題進行討論分析。

1 檢測黃曲霉毒素的必要性

影響食物油品質的重要因素之一就是黃霉曲毒素是否超標。國家對食用油中黃霉曲毒素含量的要求也十分嚴格，盡管如此，在食用油中抽檢中，依然發現很多樣品中黃霉曲毒素的含量處于偏高和超標狀態，所以需進一步加強對食用油中黃霉曲毒素含量的檢測，然后針對食用油生產和流通過程采取有效的管、控、防措施，有效降低食用油中黃霉曲毒素的含量，提高食用油的質量，保障人民群眾的食品安全。

2 高效液相色譜法特點

蒙山縣食品安全檢驗檢測中心主要采用高效液相色譜-柱后衍生法來檢驗食用油中的黃曲霉毒素含量。以下將對高效液相色譜法的特色進行簡單的描述。

（1）高壓：儀器中配置了高壓泵，在裝載液中加入高壓，這樣可以讓流動相快速通過色譜柱，提高了分析速度。

（2）高效：分離的效率較高，還可以選擇固定相和流動相，以達到最佳分離效果，比其他方法的效能高很多倍。

（3）高靈敏度：檢測器檢測限度可以達到納克級別。

（4）應用范圍廣：70%以上的有機化合物可用高效液相色譜分析，特別是高沸點、大分子、強極性與熱穩定性差化合物的分離，具有明顯優勢。

（5）柱子耐用：柱子可多次使用，并且用一根色譜柱可分離多種不同的化合物。

（6）樣品量少、容易回收：樣品經過色譜柱后不被破壞，可以收集單一組分。

高效液相色譜是近年使用率很高的黃曲霉毒素檢驗檢測儀器，它應用廣泛，覆蓋了大部分食品的定量和定性分析。它的組成類似于氣相色譜但又有所區別，高效液相色譜的流動相是液體，而液體的流動相粘度比氣體的粘度要高得多，所以為了降低柱壓，高效液相色譜的色譜柱一般比氣相色譜的色譜柱厚，也短了很多。而其中加入的高壓泵能保證儀器有恒定穩固的輸液量。在高效液相色譜柱工作的時候，待檢測的液體物質進入進樣器中，并在壓力的推動下通過色譜柱。因為物質種類不同，與固定相之間的吸附作用不同，這些不同的物質會按不同的保留時間逐一離開色譜柱，然后通過檢測器，檢測器獲得不同的峰值信號，并形成電信號，最后通過對電信號強弱的判斷和分析，從而得到食用油中黃曲霉毒素的含量[2]。

3 島津液相色譜儀及其使用方法

島津液相色譜儀LC-2030C3D是目前檢測食用油中黃曲霉素毒的主要儀器。

3.1 儀器組成

由DGU-20As脫氣機、LC-2030 Pump低壓梯度泵、LC-2030Autosampler自動進樣器、LC-2030Oven柱溫箱、LC-2030PDA Detector檢測器、RF--20A熒光檢測器、LC-2030 Controller系統控制器與Labsolutions工作站等組成。

3.2 操作步驟

啟動前，根據樣品的方法的特性制備流動相、標準品和樣品前處理。流動相通過超聲過濾和脫氣15 min，標準品和樣品通過0.22 μm的濾膜。

打開主機、檢測器和計算機電源開關，待高壓泵、柱溫箱、自動取樣器、檢測器和系統控制器自檢完成后，雙擊Labsolutions圖標，啟動工作站軟件。

選擇新建方法文件，并在編輯方法（儀器參數）依次選定數據采集時間、沖洗脫氣時間、泵濃度和流速、檢測器類型及波長、色譜柱溫度與進樣量等各種參數并下載保存參數到儀器[3]。

方法參數保存后，開始執行自動排氣，共10 min，在排氣完成后，開始執行色譜柱平衡化，觀察基線是否達到實驗要求。

根據樣品數量選擇“單次處理分析”還是“批處理分析，，并設定樣品編號、樣品瓶架、樣品名，最后設定文件名稱并保存，完成后即可開始儀器分析。

3.3 數據處理

以上操作完成后，得到樣品分析的原始數據，然后對樣品進行數據處理（再分析），主要的處理方法有兩種，一種是單針進樣分析，另一種是批量分析。具體使用的處理方法需要與實際情況相結合，以得出更準確、更科學的結果。

3.4 形成報告

數據處理完畢，經復核無誤后，保存到電腦，并形成實驗報告。

4 結語

高效液相色譜-柱后衍生法可以同時分離多種黃曲霉毒素，操作相對簡單便捷，進樣架較多，適合同時開展大批量樣品的分析，但這個方法的樣品預處理程序相對復雜，所用到的試劑較多，也需要一定的檢測時間，數據處理也需要較強的專業技術，對技術人員的專業水平要求很高。據調查發現，目前縣一級的食品檢驗檢測機構基本是近年來新成立的基層檢測機構，存在技術人員偏少、技術比較薄弱、業務范圍較窄與財政預算投入較少的狀況，大規模普遍開展高效液相色譜法檢測還有一定困難。只有積極引進培養優秀技術人員，提高專業檢測水平，拓展業務范圍，增加財政投入，加大業務培訓和實驗操作，才能進一步提高基層檢驗機構使用高效液相色譜法的頻率和檢驗準確率，為保障食用油的品質和安全作貢獻。

參考文獻

[1]劉嵐.糧油食品中黃曲霉毒素檢測方法[J].農產品加工·綜合刊，2010（4）：66-67.

[2]王峰瑩.高效液相色譜法測定花生中的黃曲霉毒素[J].現代儀器，2002（3）：22-23，16.

[3]宮春波，姜連芳，張永翠，等.黃曲霉毒素在食品中的危害及去除方法[J].食品研究與開發，2004，25（1）：120-123.