蒿秦化斑方對紫外線B誘導的HaCaT細胞光損傷的影響

馮丹 劉婷 李冠汝 孫麗蘊

環境污染導致大氣臭氧層的破壞日益加劇，紫外線(ultraviolet radiation，UV)輻射水平增加。紫外線輻射，特別是紫外線B(ultraviolet-B，UVB)290～320 nm直接作用于HaCaT細胞，通過誘導氧化應激、炎癥過程進而影響皮膚屏障功能，形成光損傷[1]。UVB輻射抑制HaCaT細胞內源性抗氧化劑超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、過氧化氫酶(catalase,CAT)的活性并增加氧化終產物丙二醛(malondialdehyde,MDA)的產生[2]，UVB誘導的細胞損傷會激活炎性細胞因子，并能夠抑制細胞增殖和轉化生長因子β(transforming growth facor-β,TGF-β)通路調控的膠原蛋白的表達[3-4]，這是導致HaCaT細胞光損傷的重要內容。中醫藥治療光敏感性皮膚反應具有很好的療效，應用前景廣闊[5]。蒿秦化斑方在臨床中應用治療光敏感性皮膚病取得了較好的療效，由青蒿、秦艽、丹皮、赤芍等組成，其改善光損傷的機制尚未明確。本實驗通過建立UVB輻射誘導的HaCaT細胞光損傷體外模型，以蒿秦化斑方高、中、低劑量進行干預，觀察蒿秦化斑方對于UVB誘導的HaCaT細胞光損傷的影響，探討其可能的作用機制。

1 材料與方法

1.1 藥物

蒿秦化斑方湯劑，組方為青蒿30 g、生地黃15 g、水牛角15 g、秦艽10 g、牡丹皮15 g、赤芍15 g、防風15 g、生甘草6 g。由北京中醫醫院(供貨方：北京盛世龍藥業有限公司)提供。

1.2 主要器材與試劑

二氧化碳培養箱(MCO-15AC型，SANYO)，倒置顯微鏡(XDS-2B型，重慶光電)，超凈臺(SW-CJ-1D型，江蘇通凈)，分光光度計(NANODROP 2000，Therno scientific)，酶標儀(MultiSkan3，Therno scientific)，離心機(Centrifuge 5415D，Eppendorf)。

MEM α, Nucleosides(GIBCO，12571063)，EBSS(GIBCO，14155063)，胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)(GIBCO，12664-025)，胰酶(銳爾康,REK3012)，磷酸緩沖液(銳爾康，REK3005)，MTT(GIBCO，v13145)。

1.3 細胞及其培養

HaCaT細胞購自中國醫學科學院基礎醫學研究所細胞資源中心，在37℃,5% CO2, 95%濕度的二氧化碳培養箱中用含有10%FBS的1640培養基培養。待細胞密度增加至80%以上時，用0.25%胰酶消化，收集細胞。……