鹽酸溴己新葡萄糖注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)改進(jìn)建議*

陳乃江，李 玲，王婷婷

（江蘇省連云港市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，江蘇 連云港 222006）

鹽酸溴己新葡萄糖注射液臨床主要用于治療慢性支氣管炎及其他呼吸道疾病，如哮喘、支氣管擴(kuò)張、硅肺等有黏痰而不易咳出的病癥。目前僅有江西科倫藥業(yè)有限公司和石家莊四藥有限公司生產(chǎn)，分別執(zhí)行局頒標(biāo)準(zhǔn)YBH10902004-2016Z[1]（ 以 下 簡 稱 “標(biāo) 準(zhǔn) 1”） 和YBH04412004-2016Z[2]（以下簡稱“標(biāo)準(zhǔn)2”）。兩種標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下均收載了性狀、鑒別、pH、有關(guān)物質(zhì)、5-羥甲基糠醛、含量測(cè)定等項(xiàng)目。檢驗(yàn)工作中發(fā)現(xiàn)，有些鑒別項(xiàng)無法執(zhí)行，有些項(xiàng)目方法的設(shè)置和色譜條件選擇有待商榷。本研究中通過對(duì)鹽酸溴己新葡萄糖注射液2 種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較分析，對(duì)試驗(yàn)方法進(jìn)行探討，擬對(duì)鹽酸溴己新葡萄糖注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提出修訂建議，為該制劑標(biāo)準(zhǔn)的提高提供參考?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比較

現(xiàn)行鹽酸溴己新葡萄糖注射液2 種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中控制限度基本一致，標(biāo)準(zhǔn)1 在鑒別項(xiàng)下增加了鹽酸溴己新芳香第一胺反應(yīng)，在檢查項(xiàng)中增加了重金屬檢測(cè)；2 種標(biāo)準(zhǔn)的含量測(cè)定項(xiàng)下均采用高效液相色譜（HPLC）法，僅流動(dòng)相體系存在差異；葡萄糖含量測(cè)定均采用旋光度測(cè)定法。2 種標(biāo)準(zhǔn)比較見表1。

表1 鹽酸溴己新葡萄糖注射液兩個(gè)版本標(biāo)準(zhǔn)比較

2 各標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)比較

2.1 鑒別項(xiàng)

鑒別項(xiàng)下芳香第一胺反應(yīng)、還原糖-菲林試劑反應(yīng)及HPLC 法鑒別均能完全重現(xiàn)，專屬性強(qiáng)。但2 種標(biāo)準(zhǔn)共有的氯化物鑒別不呈正反應(yīng)，試驗(yàn)中無法生成白色凝乳狀沉淀。原因在于，供試品溶液中Cl-質(zhì)量濃度過低，鹽酸溴己新葡萄糖注射液規(guī)格為100 mL ∶4 mg，經(jīng)折算Cl-質(zhì)量濃度為3 μg/mL。《中國藥典》通則0801 氯化物檢查中，針對(duì)微量氯化物的限度檢查，采用的氯化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液為每1 mL 相當(dāng)于10 μg 的Cl-，也僅產(chǎn)生渾濁，難以生成沉淀。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，供試品氯化物鑒別難以生成白色沉淀，現(xiàn)象不明顯，且專屬性不強(qiáng)，建議取消該項(xiàng)理化鑒別。

2.2 有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)

限度標(biāo)準(zhǔn)：鹽酸溴己新和鹽酸溴己新片是《中國藥典》收錄品種，2010 年版《中國藥典（二部）》對(duì)雜質(zhì)Ⅰ未做要求，2015 年版《中國藥典（二部）》不僅對(duì)雜質(zhì)Ⅰ規(guī)定了限度，對(duì)其他雜質(zhì)的要求也更嚴(yán)格（見表2）。2 種局頒標(biāo)準(zhǔn)均在2016 年發(fā)布并實(shí)施，對(duì)雜質(zhì)Ⅰ和其他雜質(zhì)均未作要求，標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的總雜限度值高于2010 年版《中國藥典（二部）》，是2015 年版《中國藥典（二部）》的7 倍。2 種局頒標(biāo)準(zhǔn)不僅滯后于2010 年版《中國藥典（二部）》，對(duì)雜質(zhì)的控制程度更是嚴(yán)重落后于2015 年版《中國藥典（二部）》的口服片劑標(biāo)準(zhǔn)，其潛在使用風(fēng)險(xiǎn)不容忽視，理應(yīng)引起重視。

可操作性探討：標(biāo)準(zhǔn)1“有關(guān)物質(zhì)”項(xiàng)下規(guī)定，“供試品溶液的色譜中如有雜質(zhì)峰，除空白溶液峰外各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對(duì)照溶液主峰面積的2.0%”。標(biāo)準(zhǔn)2中對(duì)空白溶液峰扣除無要求。執(zhí)行前者的江西科倫藥業(yè)有限公司在內(nèi)部控制中，按生產(chǎn)工藝流程制得1 份除添加鹽酸溴己新原料以外的陰性樣品，作為空白峰扣除。作為企業(yè)可以這樣操作，但對(duì)于監(jiān)督抽驗(yàn)或第三方檢驗(yàn)，按處方工藝生產(chǎn)不現(xiàn)實(shí)，因?yàn)椴粌H要考慮生產(chǎn)工藝高溫滅菌等，還要涉及相應(yīng)批次的輔料和原料葡萄糖，在實(shí)際檢驗(yàn)中不具備操作性。建議考察鹽酸溴己新有關(guān)物質(zhì)時(shí)，其相關(guān)溶劑峰及輔料峰的扣除情況應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)中予以詳細(xì)說明，便于扣除。

已知雜質(zhì)的控制：2015 年版《中國藥典（二部）》[3]中，鹽酸溴己新及其制劑均增加了雜質(zhì)Ⅰ的控制，國外藥典中鹽酸溴己新及其制劑對(duì)雜質(zhì)C，D，F(xiàn) 等已知雜質(zhì)進(jìn)行了限度控制[4-8]。筆者考察了鹽酸溴己新中雜質(zhì)Ⅰ，C，D，F(xiàn)，建立了色譜檢測(cè)法，4 種雜質(zhì)均能達(dá)到有效分離。但當(dāng)雜質(zhì)含量為鹽酸溴己新0.1%時(shí)，鹽酸溴己新葡萄糖注射液制劑母液進(jìn)樣，常規(guī)紫外檢測(cè)器檢測(cè)不到峰，原因在于制劑母液中鹽酸溴己新質(zhì)量濃度僅為0.04 mg/mL，對(duì)應(yīng)鹽酸溴己新0.1%雜質(zhì)強(qiáng)度遠(yuǎn)小于檢出限。由于該輸液劑含有較高濃度的葡萄糖，對(duì)母液中鹽酸溴己新進(jìn)行富集和濃縮也不現(xiàn)實(shí)。建議必要時(shí)提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，采用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用（LC-MS）法對(duì)鹽酸溴己新葡萄糖注射液中的已知雜質(zhì)進(jìn)行控制。

2.3 5-羥甲基糠醛（5-HMF）項(xiàng)

檢查方法：5-HMF 作為葡萄糖降解雜質(zhì)之一，對(duì)人體橫紋肌和內(nèi)臟有損害，且有遺傳毒性、致癌性和致突變性，屬2 類遺傳毒性雜質(zhì)。2015 年版《中國藥典（二部）》中對(duì)葡萄糖注射液的檢查方法主要有紫外分光光度（UV）法和HPLC 法[9-10]，HPLC 法限度一般規(guī)定為不高于葡萄糖含量的0.02%，UV 法規(guī)定在一定濃度時(shí)吸光度不得大于0.32。2 種局頒標(biāo)準(zhǔn)均采用UV 法控制限量，優(yōu)點(diǎn)是簡單便捷、不涉及對(duì)照品使用，缺點(diǎn)是供試品溶液中鹽酸溴己新主藥在284 nm 波長處有吸收。5-HMF 檢查時(shí)，供試品溶液中鹽酸溴己新的質(zhì)量濃度為8 μg/mL，取鹽酸溴己新對(duì)照品配制同樣質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液，進(jìn)行掃描（見圖1），對(duì)照品溶液在284 nm 波長處的吸光度約為0.02，對(duì)5-HMF 的控制有輕微影響。HPLC 法的優(yōu)點(diǎn)為可直觀、準(zhǔn)確地定量分析，缺點(diǎn)是檢測(cè)時(shí)需要對(duì)照品，價(jià)格昂貴，需冷凍保存，該對(duì)照品低熔點(diǎn)近室溫，引濕性強(qiáng)，稱量要求較苛刻，故推薦UV 法進(jìn)行5-HMF 檢查。對(duì)本品分別采用UV 法和HPLC 法測(cè)定5-HMF 含量，結(jié)果見表3。

表2 2 種標(biāo)準(zhǔn)與《中國藥典》項(xiàng)下有關(guān)物質(zhì)限度比較

圖1 紫外分光光譜圖

表3 5-HMF 含量測(cè)定結(jié)果（%）

5-HMF 對(duì)有關(guān)物質(zhì)檢查的影響：有關(guān)物質(zhì)考察的是鹽酸溴己新的雜質(zhì)情況，5-HMF 為葡萄糖的降解產(chǎn)物，在有關(guān)物質(zhì)色譜條件下有較大吸收。有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下5-HMF 峰是否計(jì)入一般雜質(zhì)峰，目前存在爭(zhēng)議。有觀點(diǎn)認(rèn)為，5-HMF 在檢查項(xiàng)下已明確規(guī)定，有關(guān)物質(zhì)中出現(xiàn)的5-HMF 峰不應(yīng)作雜質(zhì)論，應(yīng)予以扣除。另有觀點(diǎn)認(rèn)為，標(biāo)準(zhǔn)中有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下沒有明確說明5-HMF 不按雜質(zhì)峰計(jì)算，且有關(guān)物質(zhì)檢查和5-HMF 檢查是不同概念，兩者所用方法不同，前者用HPLC 法于249 nm波長處測(cè)定總雜，后者用UV 法于284 nm 波長處測(cè)定5-HMF 單個(gè)雜質(zhì)。檢驗(yàn)者一般都會(huì)把5-HMF 色譜峰作為一般雜質(zhì)峰計(jì)入樣品總雜，易造成總雜超過標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定[8]，因5-HMF 峰較大，造成有關(guān)物質(zhì)不符合規(guī)定。鹽酸溴己新葡萄糖注射液的規(guī)格是為每100 mL 含溴己新4 mg、葡萄糖5 g，5-HMF 的限度值按葡萄糖0.02%計(jì)算，每100 mL 鹽酸溴己新葡萄糖注射液中5-HMF 最大允許量為1 mg?？梢?，5 -HMF 對(duì)有關(guān)物質(zhì)測(cè)定有較大干擾，建議標(biāo)準(zhǔn)中明確有關(guān)物質(zhì)檢查項(xiàng)中應(yīng)扣除5-HMF 峰。

2.4 色譜條件

2 個(gè)局頒標(biāo)準(zhǔn)均采用HPLC 法測(cè)定鹽酸溴己新含量和有關(guān)物質(zhì)，HPLC 法專屬性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高。2 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)僅在流動(dòng)相體系上存在差異，前者為甲醇-水-0.01mol/L 三乙胺甲醇溶液（95 ∶5 ∶1.5，V/ V/ V），后者為甲醇-0.05 mol/L 醋酸銨溶液（89 ∶11，V/ V）。標(biāo)準(zhǔn)1 流動(dòng)相體系有機(jī)相比例為95%，水相比例偏小，在有關(guān)物質(zhì)檢查時(shí)，供試品是母液（每1 mL 含50 mg 葡萄糖）進(jìn)樣，遇到高比例有機(jī)相甲醇時(shí)，出現(xiàn)析晶粘針現(xiàn)象，造成色譜峰鬼峰。試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)水相比例提高至10%時(shí)，粘針析糖現(xiàn)象消失，建議修訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)適當(dāng)降低有機(jī)相比例，重新考察流動(dòng)相體系。

3 建議

藥物雜質(zhì)影響藥物的臨床使用安全性和藥品的穩(wěn)定性，對(duì)其進(jìn)行充分研究和控制是確保藥品安全性的必要環(huán)節(jié)。針對(duì)鹽酸溴己新葡萄糖注射液，控制主藥雜質(zhì)具體范圍和明確雜質(zhì)具體限值是控制該制劑質(zhì)量的重點(diǎn)和難點(diǎn)。該制劑中存在鹽酸溴己新和葡萄糖2 種成分，現(xiàn)行2 種局頒標(biāo)準(zhǔn)均弱于2015 年版《中國藥典（二部）》鹽酸溴己新片口服制劑，且無已知雜質(zhì)Ⅰ的限度控制項(xiàng)，故局頒標(biāo)準(zhǔn)有提高的客觀要求。100 mL 樣品中僅含主藥鹽酸溴己新4 mg，樣品盡管是母液進(jìn)針，鹽酸溴己新質(zhì)量濃度也僅為0.04 mg/mL，而2015 年版《中國藥典（二部）》鹽酸溴己新和鹽酸溴己新片考察雜質(zhì)制備的樣品溶液濃度為2.5 mg/mL，該質(zhì)量濃度級(jí)別可有效考察限值為2.0%的雜質(zhì)Ⅰ，有關(guān)物質(zhì)考察客觀要求供試品溶液要有一定濃度，局限性在于樣品本身就是注射劑，采用HPLC-UV 法，供試品無法達(dá)到可開展有關(guān)物質(zhì)限度檢查的進(jìn)樣濃度。對(duì)于注射劑，任何所謂富集和濃縮來提高濃度的手段都不現(xiàn)實(shí)，且除了濃度達(dá)不到要求，另一問題是，100 mL 輸液中還存在5 g 葡萄糖，葡萄糖作為另一主要成分，質(zhì)量濃度是主藥鹽酸溴己新的1 250 倍，在液相色譜UV 檢測(cè)器下，50 mg/mL 葡萄糖背景系統(tǒng)產(chǎn)生的基礎(chǔ)噪音嚴(yán)重干擾了主藥雜質(zhì)的檢測(cè)和相關(guān)雜質(zhì)峰識(shí)別。基于以上考慮，對(duì)于輸液中預(yù)控制已知雜質(zhì)Ⅰ和其他已知單雜C，D，F(xiàn)，企業(yè)只有采用更高靈敏度的LC-MS 法控制（外標(biāo)法）。另外，對(duì)于總雜質(zhì)的控制，只有在系統(tǒng)考察50 mg/mL 葡萄糖背景系統(tǒng)干擾情況下，必要時(shí)進(jìn)行相關(guān)色譜峰區(qū)分后，可采用面積歸一化法。