液相色譜- 串聯質譜法快速測定食用油中的苯并(a)芘

郭芳芳 高宏 朱成晶（江蘇省理化測試中心，江蘇 南京210000）

目前，食用油脂中苯并(a)芘的分析方法主要有免疫學法、表面增強拉曼光譜、氣相色譜法、高效液相色譜法、氣相色譜-質譜聯用法（GC-MS）和液相色譜-質譜聯用法（LC-MS/MS）等。由于食用油成分復雜，其中苯并(a)芘含量又較低，存在著大量的干擾物質，因此靈敏度高，抗干擾強的檢測方法是必要的。GC-MS 法由于靈敏度不高，熱穩定性較差，在很多時候使用受到了限制。高效液相色譜法定性能力不夠；表面增強拉曼光譜還不夠成熟，應用較少，定量分析時還不夠準確；免疫學檢測靈敏度不高；LC-MS/MS法卻能同時提高靈敏度和提升定性能力，目前運用LC-MS/MS測定食用油脂中苯并(a)芘鮮有報道。

文章是針對食用油中苯并(a)芘快速檢測的應用研究，可用于批量樣品的高通量篩查，提高工作效率，也可用于突發食品中毒分析，這些對保護人類健康具有重要的意義。本文建立的這種液相色譜-串聯質譜法測定食用油脂中苯并(a)芘的方法，快速，簡便，高效，定量準確。

1 實驗部分

1.1 儀器與試劑

Agilent-1260-6430液質聯用儀。

石油醚，南京化學試劑股份有限公司；乙腈，德國默克有限公司。

1.2 色譜條件

色譜柱：C18 50×2.1mm 1.8um 柱溫：40℃流動相：乙腈/水＝80/20 流速：0.6ml/min 進樣量：20uL

1.3 標準溶液的配制

苯并(a)芘標準儲備溶液的制備：準確移取1mL 100μg/mL苯并(a)芘標準品于10 mL 容量瓶，用乙腈定容至刻度線，-20℃保存備用。苯并(a)芘-D12 標準儲備溶液的制備：準確移取1mL 100μg/mL 苯并(a)芘-D12 標準品于10 mL 容量瓶，用乙腈定容至刻度線，-20℃保存備用。

標準工作液的配制：將上述苯并(a)芘標準儲備溶液逐級稀釋成濃度為0.5ng/mL、1.0 ng/mL、2.0 ng/mL、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL 的系列標準工作溶液，內標苯并(a)芘-D12溶液逐級稀釋為濃度均為5.0 ng/mL。

1.4 樣品的處理

稱取約0.5g 樣品，加入10 mL 石油醚提取，超聲提取5min，再旋渦振蕩提取15min。離心，取上清。上清液全部轉移到經活化了的固相萃取柱中，經乙腈洗脫，濃縮至近干，再用乙腈定容至1.0mL，經0.45μm有機濾膜過濾，濾液上機分析測試。

1.5 樣品的測定

按照上述色譜條件進樣20μL，以保留時間定性，內標法峰面積定量。

2 結果與討論

2.1 質譜條件的母離子、子離子獲得

采用大氣壓化學電離法進行母離子掃描和子離子掃描，獲得苯并(a)芘母離子253，子離子250，224，200。苯并(a)芘-D12母離子265，子離子259，見圖1。

圖1 苯并(a)芘與苯并(a)芘-D12的子離子

2.2 裂解電壓（Fragmentor）優化

根據母離子掃描，得到裂解電壓在135左右，響應最強。因此選擇裂解電壓為120，125，130，135，140，145進一步分析。結果發現苯并(a)芘子離子200 與224 最優Fragmentor 為135，250最優Fragmentor為130，苯并(a)芘-D12子離子259最優Fragmentor為145。

2.3 碰撞能量（Collision Energy）優化

子離子掃描顯示，碰撞能量在70左右響應最強。因此選擇碰撞能量為60，70，80，90，100五個能量優化，結果表明，苯并(a)芘子離子200 與224 最優碰撞能量為90，250 最優碰撞能量為70，苯并(a)芘-D12子離子259最優碰撞能量為80。

2.4 駐留時間（Dwell）優化

駐留時間長短影響靈敏度，如果駐留時間太短，一段時間通過質量分析儀到達檢測器的粒子數太少，不能忠實再現原始峰形，且響應太小，駐留時間太長，影響峰形。結合循環時間，選擇80ms，100ms，120ms，200ms 四個駐留時間進行優化，結果表明，駐留時間100ms最合適，見圖2。

圖2 駐留時間優化圖譜

2.5 實際樣品分析

實際選擇6批次植物油測定，大豆油，花生油，芝麻油，調和油，菜籽油，葵花籽油，苯并(a)芘均有檢出，含量在0.4μg/kg～2.0μg/kg，均未超出限值。可能是因為在油料生產過程，要先把油籽加熱炒香，炒制的過程中如果溫度控制不均勻，很容易有局部過熱，從而產生苯并(a)芘。

3 結語

建立的液相色譜-串聯質譜法測定食用油中的苯并(a)芘，采用大氣壓化學電離，內標法定量，進樣快，采集時間短，方法線性良好，簡便，獲得了較好的分離效果和較高的靈敏度，此方法可用于食用油中苯并(a)芘的快速測定，同時也為其他食品中苯并(a)芘的測定提供參考。