奶牛胚胎早期死亡的轉錄組初探

呂小青，劉林，薛建華，王彥平，李艷華，麻柱

（1.北京奶牛中心，北京 100192；2.農業農村部奶牛遺傳育種重點實驗室，北京 100192;3.奶牛遺傳育種與繁殖北京市重點實驗室，北京 100192）

早期胚胎丟失是奶牛繁殖失敗的主要原因之一，主要發生在胚胎附植前后，有多個因素影響胚胎丟失，如遺傳（SNPs、CNV等）、環境、疾病、病原微生物等都能引起胚胎死亡[1,2]。受精失敗引起的胚胎損失達17%，卵裂階段的胚胎損失達37%[3,4]。本研究篩選了兩個不同卵裂階段，對奶牛早期死亡胚胎進行了轉錄組分析。

轉錄組測序現在已經被廣泛應用于人類、小鼠、豬、牛等動物研究中[5～7]，能快速地獲得樣本的序列信息和表達信息，具有高通量、全面等優點，為研究基因表達調控的重要方法。本研究的目的是挖掘引起奶牛胚胎早期死亡的關鍵基因或突變，目前國內還沒有相關的報道，具體包括采用轉錄組測序技術對奶牛8-細胞期和桑葚胚期死亡和正常的胚胎樣本進行基因表達變化的分析，本研究分別針對奶牛胚胎的兩種不同時期進行細胞組學測序，聯合分析不同時期胚胎之間的差異表達基因，獲得與奶牛胚胎發育相關的生物標志物，為奶牛群體篩選奠定基礎。

1 材料與方法

1.1 體外胚胎的生產

屠宰場收集的卵巢通過保溫瓶運回實驗室后，用10mL注射器采集卵母細胞。將鑒定可用的卵母細胞洗滌4遍后，放入成熟液滴中，成熟培養22～24h，并利用鮮精體外受精后，精卵共培養6～8h。之后將受精后的合子轉移到胚胎發育液滴中進行培養，培養條件為38.5℃、5% CO2、飽和濕度，期間每隔48h半量換液。……