荷斯坦牛HH5遺傳缺陷基因快速檢測方法的建立及應用

孫愉洪，王銘正，肖煒，張勝利，張毅

（1.中國農業大學動物科技學院，北京 100193；2.北京市畜牧總站，北京 100107）

在過去幾十年里，奶牛經高強度選育，產奶性能持續提升，但與此同時，群體近交程度不斷增加，隱性有害基因快速擴散風險增大[1]。HH5是新近發現的一種荷斯坦牛隱性遺傳缺陷基因，美國農業部最早通過全基因組標記分析，將其定位于牛9號染色體[2]，后續深入研究揭示致病機理為9號染色體上長達138kb的DNA片段缺失，導致二甲基腺苷轉移酶1（TFB1M）基因丟失[3]。突變型純合個體因缺少TFB1M基因導致核糖體功能障礙，最終造成該基因型的胚胎在妊娠60d左右死亡。HH5基因的共同祖先為1957年出生的加拿大著名公牛Thornlea Texal Supreme[3,4]，其基因在世界范圍內廣泛擴散，奶業發達國家已將HH5列為常規檢測的遺傳位點。

目前，HH5遺傳缺陷基因的檢測方法較為繁瑣或成本較高，如基于高分辨率溶解曲線的檢測方法[3]雖然可以準確分型，但需要專門儀器和試劑盒，檢測成本很高。此外，有國外商業公司（如Neogen）也提供HH5檢測服務，但檢測周期較長。本研究通過測序發現HH5等位基因包含一段特異性序列，在此基礎上建立一種快速、簡便的篩查HH5遺傳缺陷基因攜帶者的新方法，并對北京郊區一個荷斯坦牛群進行了檢測。

表1 HH5突變型和野生型等位基因Sanger測序引物信息

1 材料與方法

1.1 HH5突變型和野生型等位基因Sanger測序

1.1.1 樣本及DNA提取

利用中國農業大學荷斯坦牛基因組信息數據庫，依據經單倍型推斷[2]的HH5基因型信息，挑選53頭荷斯坦公牛，其中野生型純合子46頭，HH5攜帶者7頭。……