山楂葉總黃酮提取分離實驗研究

侯愛珍

摘要：文章通過對山楂植物進行概述，設計關于山楂葉總黃酮提取的實驗研究，實驗采用分析純試劑和實驗室提供山楂葉為實驗原料，利用蘆丁質量濃度 C（mg/mL）與吸光度 A 之間的回歸方程為判別提取率方法，結果測得總黃酮得率的相對標準偏差（RSD）為 2.2%，表明該方法重復性良好。

1 山楂植物概述

山楂為薔薇科（Rasaceae）山楂屬（CrataegusL.）植物，全世界山楂屬植物共有140 多種，我國植物志記載共有 17 種 2 個變種。山楂屬植物在我國已有3000多年的栽培歷史，栽培面積廣，據1990年統計，全國山楂栽培面積達35萬hm²，2003年統計栽培面積已達530萬畝，主要分布在東北、華北、山西、廣西、云南等地，中國植物志將中國山楂按植物學特性分為6組，包括麻核組、羽裂組、毛序組、光核組、淺裂組、楔形組。山楂化學成分的研究追溯于 1921 年，當時的研究熱點主要集中于纖維素、鞣質、三萜等成分，隨著對山楂研究的逐步深入，研究者發現山楂中的黃酮類化合物對心血管疾病具有良好的藥理作用，同時人們發現山楂葉具有和山楂果相同的功效，開始將研究方向轉移到山楂葉上，通過一定的分離手段從山楂葉中分離出各種黃酮類化合物。近年來隨著檢測技術的發展，對山楂葉中的氨基酸、微量元素及有機酸等也有了進一步研究。

2 材料和方法

黃酮類化合物是山楂葉主要的功能活性物質，總黃酮提取工藝成為提高山楂葉利用價值的關鍵所在，因此開發出一種操作簡單、環保無害、適用性強的黃酮提取工藝，對提高山楂葉的附加利用價值具有重要的實踐指導意義。

2.1 材料

山楂葉（Crataegus pinnatifida Bge.）實驗室采購實驗用樣品，蘆丁標準品，阿拉丁試劑（上海）有限公司;無水乙醇、甲醇、亞硝酸鈉、氯化鋁、氫氧化鈉等，國藥集團化學試劑有限公司，以上化學試劑均為分析純。

2.2 儀器設備

酶標儀 Spectra Max 190，美國 Molecular Devices 公司;KQ-600DV 數控超聲清洗器，昆山市超聲儀器有限公司;RHP-100? 高速多功能粉碎機，浙江榮浩工貿有限公司;Mettler ME204 型電子天平，梅特勒-托利多儀器有限公司;RE-2000E 旋轉蒸發器，上海亞榮生化儀器廠。

2.3 方法

根據文獻進行改進，采用倍比稀釋法制備濃度為 0.25、0.125、0.0625、0.03125 mg/mL 的蘆丁標準液。精密吸取 50μL 蘆丁標準溶液，加入 0.5mol/L NaNO2溶液 20μL，靜置 5min;加入 0.3mol/L AlCl3溶液 20μL，靜置 6min;最后加入 0.5mol/L NaOH溶液 200μL，在酶標儀中振蕩 30s，以試劑空白作對照，于 510nm 下測定吸光度。蘆丁質量濃度 C（mg/mL）與吸光度 A 之間的回歸方程為：

A=1.5399C+0.0062（R2=0.9998）

3總黃酮提取

準確稱取 1.000g 山楂葉粉末于 100mL 具塞三角瓶中，以一定料液比加入一定體積分數的乙醇溶液，在一定溫度下超聲提取一定時間后抽濾，濾液轉入 100mL 容量瓶中，定容，精密吸取適量樣液按照標準曲線制作方法測定吸光度，計算總黃酮得率，計算公式如下：

提取率=cv/W

式中：C 為粗提液總黃酮質量濃度（mg/m L）;V 為粗提液體積（m L）;W 為原料質量（g）。再進行單因素影響實驗，料液比 1：30，提取溫度 70℃，超聲功率 420W，以不同乙醇體積分數 40%、50%、60%、70%、80%、90%為溶劑提取 30min，考察乙醇體積分數對總黃酮得率的影響;以 70%乙醇為溶劑，料液比 1：30，提取時間 30min，超聲功率 420W，設置不同溫度 30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃提取，考察提取溫度對總黃酮得率的影響;以 70%乙醇為溶劑，提取溫度 70℃，料液比 1：30，超聲功率 420W，設置不同時間 10min、20min、30min、40min、50min、60min 提取，考察提取時間對總黃酮得率的影響;以 70%乙醇為溶劑，提取溫度 70℃，提取時間 40min，超聲功率 420W，設置不同料液比 1：15、1：20、1：25、1：30、1：35、1：40 提取，考察料液比對總黃酮得率的影響;每個處理重復 3 次。

4 結果

取濃度為 0.25mg/mL 的蘆丁標準液重復測定 5 次，求得相對標準偏差（RSD）為 1.18%，表明該方法精密度良好。取同一批山楂葉樣品制備 5 份粗提液，結果測得總黃酮得率的相對標準偏差（RSD）為 2.2%，表明該方法重復性良好。

參考文獻

[1] Effect of Total Flavone of Haw Leaves on Nuclear Factor Erythroid-2 Related Factor and Other Related Factors in Nonalcoholic Steatohepatitis Rats[J]. WANG De-jun，CAI Yue-qin，PAN Shui-zhen， ZHANG Li-zong，CHEN Yun-xiang，CHEN Fang-ming， JIN Ming，YAN Mao-xiang，LI Xiao-dong， CHEN Zhi-yun.? Chinese Journal of Integrative Medicine. 2018（04）

[2]山楂葉總黃酮的藥理作用研究進展[J]. 馬琳，李六水.? 天津藥學. 2017（05）

[3]大孔樹脂吸附法富集山楂葉總黃酮的工藝研究[J]. 趙玉華，岑明政，范海珠.? 中國生化藥物雜志. 2017（08）

[4]微波提取山楂中黃酮類化合物的工藝優化[J]. 施昶，黃海飛，李夢園，沈詩偲，韓偉.? 生物加工過程. 2017（01）

[5]山楂葉提取物不同極性組分的體外抗氧化作用[J]. 龔霞，巫永華，劉恩岐，李超，陳尚龍.? 食品工業. 2016（08）

[6]山楂葉總黃酮抑制慢性腦缺血模型大鼠腦組織神經元的凋亡（英文）[J]. 檀榮方，夏愛華，吳曉光，曹娜娜，李蒙蒙，張天鴿，王義茹，岳志領.? 中國組織工程研究. 2014（49）

[7]山楂葉黃酮類成分提取純化工藝研究[J]. 孫君凱，王帥，包永睿，孟憲生.? 遼寧中醫藥大學學報. 2014（06）

[8]雙水相系統純化山楂葉中黃酮類物質的研究[J]. 趙立輝，武文潔，楊昱涵.? 天然產物研究與開發. 2009（05）