廈門市新發現HIV-1感染者病毒載量及外周血T淋巴細胞檢測分析

李 莉，張榮秋，馬桂林，歐陽雪

人類免疫缺陷病毒(human immunodeficientcy virus，HIV)進入人體后，主要侵犯CD4+輔助性T淋巴細胞并復制增殖，導致機體細胞免疫功能受損乃至缺陷，引發獲得性免疫缺陷綜合征(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)，最終并發各種嚴重機會性感染和腫瘤。血漿中HIV病毒載量及外周血中CD4+T淋巴細胞(CD4+細胞)水平分別反映HIV病毒在體內復制情況及機體細胞免疫功能，可用于HIV感染者和AIDS患者病程的判定、臨床進展及抗病毒治療效果的評價。廈門市自1991年首次報告HIV-1感染者以來，HIV/AIDS疫情呈現逐年上升的趨勢，截至2018年12月，廈門地區HIV/AIDS報告1 819例，累計治療1 742例。本研究旨在了解廈門市新發現HIV-1感染者未經抗病毒治療狀況下體內病毒復制情況及機體細胞免疫功能水平，為當地艾滋病的防治工作提供基礎數據。

1 對象與方法

1.1對象 收集2017年1月—2018年6月經廈門市疾病預防控制中心蛋白免疫印跡實驗確證為HIV-1抗體陽性、排除“艾滋病綜合防治信息系統”中既往報告病例、按《艾滋病病毒感染者隨訪工作指南》要求完成首次隨訪，并于抗體確證陽性后2周內采血進行首次CD4+細胞檢測的HIV-1感染者共269例。

1.2方法

1.2.1樣本采集 采用EDTA-K2 抗凝管采集靜脈血5 mL×2管，一管于24 h內檢測外周血T淋巴細胞，一管于4 h內分離血漿并存放于-80 ℃冰箱用于檢測病毒載量。

1.2.2病毒載量檢測 基于實時熒光定量RT-PCR方法(TaqMan熒光探針法)，使用羅氏 COBAS AmpliPrep核酸提取儀、COBAS TaqMan 48病毒載量儀(試劑為TaqMan48 HIV檢測試劑)，嚴格按照說明書進行測定，并根據試劑盒說明書判定結果。HIV-1病毒載量線性范圍：20～10 000 000 HIV-1 RNA拷貝/mL。

1.2.3外周血T淋巴細胞檢測 采用單平臺法檢測(FC500流式細胞儀，德國貝克曼公司)，應用CD45-FITC/CD4-PE/CD8-ECD/CD3-PC5 四色熒光標記抗體和Flow-Count絕對計數熒光微球，通過流式細胞儀淋巴細胞亞群分析軟件，獲得T細胞亞群的相對數(百分比)和絕對數。

2 結 果

2.1基本情況 269例新發現的HIV-1感染者中，男性244例(90.7%)，女性25例(9.3%)；年齡(33.4±11.0)歲(16～75歲)，主要集中在20～40歲(75.1%)；未婚140例(52.8%)，已婚有配偶82例(30.9%)，離異或喪偶33例(12.5%)；文化程度以大專及以上為主，為106例(40.0%)；傳播途徑以性傳播為主，為228例(84.8%)。

2.2病毒載量檢測情況 269份血漿樣本中，2份(0.74%)未檢測到目標，2份(0.74%)病毒載量低于檢測下限(<20拷貝/mL)，其余樣本病毒載量為23～1.76×106拷貝/mL，對數平均值為(4.43±0.79)log/mL。93.69%(252/269)樣本的病毒載量≥103拷貝/mL，其中103～104拷貝/mL 46份(17.10%)，104～105拷貝/mL 153份(56.88%)，105～106拷貝/mL 49份(18.22%)，≥106拷貝/mL 4份(1.49%)。不同性別、年齡、婚姻狀況、文化程度、傳播途徑的新發現HIV-1感染者的病毒載量水平構成情況比較，差別無統計學意義(P>0.05，表1)。

表1 不同特征人群血漿HIV病毒載量基線檢測結果構成情況

Tab 1 Distribution of plasma HIV viral load in different groups

n(%)

2.3外周血CD4+T淋巴細胞和CD4+/CD8+比值檢測情況 269例中，CD4+細胞計數范圍為3～1 736 μL-1，平均值為(423±219)μL-1，中位數為397 μL-1。半數以上(61.7%，166/269)樣本的CD4+細胞≥350 μL-1，29例(10.8%)<200 μL-1。CD4+/CD8+比值范圍為0.01～1.95，平均值為(0.39±0.23)，中位數為0.33，大部分樣本(77.0%，207/269)CD4+/CD8+比值<0.50，僅5例(1.9%)CD4+/CD8+比值≥1.0(表2)。

表2 外周血CD4+T淋巴細胞和CD4+/CD8+檢測情況

Tab 2 Distribution of peripheral blood CD4+T-lymphocytes and CD4+/CD8+

CD4+細胞數量μL-1n(%)<20029(10.8)200～35074(27.5)350～50085(31.6)>50081(30.1)合計269(100.0)CD4+/CD8+比值n(%)<0.2584(31.2)0.25～0.50123(45.7)0.50～1.057(21.2)>1.05(1.9)合計269(100.0)

2.4血漿病毒載量與外周血T淋巴細胞數量相關性 對265例血漿病毒載量在檢測限范圍內的樣本進行分析，結果顯示：血漿病毒載量值不同，外周血CD3+T淋巴細胞(CD3+細胞)總數、CD8+T淋巴細胞(CD8+細胞)計數差別無統計學意義(P>0.05)；病毒載量值越高，則CD4+細胞數量越少、CD4+/CD8+比值越低，差別有統計學意義(P<0.05，表3)。Spearman檢驗結果顯示，血漿病毒載量對數值與CD3+細胞總數、CD8+細胞計數無顯著相關性，與CD4+細胞數量(r=-0.276，P<0.01)和CD4+/CD8+比值(r=-0.355，P<0.01)呈負相關。

3 討 論

本研究對HIV-1感染者在抗體確證陽性后2周內采集血樣進行血漿HIV病毒載量及外周血T淋巴細胞檢測，能較好地反映HIV-1感染者在接受高效抗逆轉錄病毒治療前體內病毒復制和機體細胞免疫水平的初始狀況。98.51%(265/269)的研究對象血漿中可檢測到病毒核酸，病毒載量平均值為4.42 log/mL，主要集中在4～5 log/mL，提示絕大多數新發現HIV-1感染者體內HIV病毒有不同程度復制，且大部分感染者體內病毒復制活躍，與文獻報道基本一致[1]。Mellors等報道，基礎HIV-1 RNA水平可以預測感染者發展成為AIDS及死亡的風險。基礎HIV-1 RNA 水平高于30 000 拷貝/mL的人群中，6年內有80%發展成為AIDS，70%死于AIDS[2]。據此推測，本次調查中135例(50.2%)血漿HIV病毒載量高于30 000 拷貝/mL的感染者，倘若不及時進行治療，很有可能在6年內發病。張超等報道HIV/AIDS患者接受抗病毒治療后影響血漿病毒載量水平的有民族、教育程度、傳播途徑等因素[3]。本研究中，不同性別、年齡、婚姻狀況、文化程度和傳播途徑的新發現HIV-1感染者的病毒載量基線檢測結果構成情況無差別，提示HIV病毒在未接受抗病毒治療的感染者群體中的復制不受上述因素的影響。

表3 不同病毒載量HIV-1感染者外周血T淋巴細胞檢測情況

與病毒載量<103拷貝/mL組比較，★：P<0.05；與病毒載量103～104拷貝/mL組比較，▲：P<0.05；與病毒載量104～105拷貝/mL組比較，◆：P<0.05；與病毒載量≥105拷貝/mL組比較，●：P<0.05.

外周血T淋巴細胞亞群測定是檢測機體細胞免疫功能的重要指標，HIV感染人體后攻擊、破壞CD4+細胞，造成CD4+細胞進行性減少，而CD8+細胞異常激活呈現增長趨勢，導致CD4+/CD8+比值倒置。越來越多的研究證據表明，CD4+/CD8+比值可作為評估病毒學成功抑制的HIV感染者臨床預后以及非AIDS相關并發癥風險的指標[4]。本研究結果提示，血漿病毒載量與外周血CD3+T淋巴細胞總數、CD8+細胞計數無統計學意義上的相關性；血漿病毒載量對數值與外周血中CD4+細胞數量呈總體負相關，與國內相關報道一致[5]；血漿病毒載量越高，CD4+/CD8+比值越低，與季亞勇等的報道不同[6]。本研究的調查對象CD4+細胞平均值為423 μL-1，CD4+細胞<200 μL-1者占10.8%，同比分別高于、低于歐陽雪等的報道[7]。結果不同，從側面反映了近3年來廈門市在艾滋病擴大檢測覆蓋面、增加高危人群檢測頻率等方面工作略見成效，更多HIV感染者在感染早期就得以確診。

病毒載量檢測費用高，且對實驗室條件和檢測人員素質要求較高。我國目前對HIV/AIDS患者抗病毒治療前開展血漿病毒載量基線評估未作強制要求，只是建議有條件者進行檢測[8]。有報道認為，根據病毒載量與CD4+細胞數量的負相關性，檢測CD4+細胞在一定程度上可以間接評價病毒載量水平[9]。筆者則認為，二者雖然存在負相關性，但結果并非完全匹配，CD4+細胞數量反映機體免疫功能，病毒載量反映病毒復制活躍程度，故CD4+細胞檢測不能替代病毒載量檢測。本研究中，26例感染者CD4+細胞≥350 μL-1，而病毒載量>105拷貝/mL，這部分感染者雖然免疫功能未受到明顯破壞，但體內病毒復制活躍、傳染性高，如果僅以首次CD4+細胞檢測結果評估抗病毒治療的必要性，可能會忽略這部分感染者。有研究表明，在用于指示一線抗逆轉錄病毒治療的起始、評估效果時，聯合應用病毒載量檢測比單獨使用CD4+細胞計數效果更好[10]，應根據當地的社會經濟發展水平選擇合適的檢測技術。廈門作為經濟發展水平較好的地區，應考慮為HIV感染者提供抗病毒治療前病毒載量基線檢測服務，以便于觀測其抗病毒治療后病毒抑制的效果，更好地指導其抗病毒治療。

綜上所述，廈門市大部分新發現HIV-1感染者體內HIV病毒復制活躍。作為社會經濟發展水平較好的地區，應考慮聯合應用病毒載量和外周血T淋巴細胞基線檢測結果指導抗病毒治療和觀測抗病毒治療效果。