反復上呼吸道感染患兒血清25羥維生素D3與LL-37及Ig水平的相關性

段訓新 石玉英 黃龍 梁曉君 胡志堅

摘要：目的? 探究反復上呼吸道感染患兒血清25羥維生素D3與LL-37及Ig水平的相關性。方法? 選擇2015年1月～2018年12月來我院就診的反復上呼吸道感染患兒68例設為復發組，初次就診的上呼吸道感染患兒60例設為初發組，另選取同期來我院體檢的健康兒童56例設為對照組。采用化學發光法檢測外周血血清中25羥維生素D3，用速率散射比濁法測定IgA、IgM、IgG水平，酶聯免疫吸附測定（ELISA）檢測痰上清液抗菌肽LL-37水平，并進行相關性分析。結果? 初發組和復發組外周血25羥維生素D3、IgA、IgM、IgG的水平均低于對照組（P<0.05），復發組外周血25羥維生素D3、IgA、IgM、IgG的水平低于初發組（P<0.05），復發組LL-37的水平低于初發組（P<0.05），反復上呼吸道感染患兒外周血25羥維生素D3與痰上清液LL-37、外周血IgA、IgM、IgG水平呈正相關（r=0.594、0.682、0.543、0.621，P<0.05）。結論? 血清25羥維生素D3與LL-37及免疫球蛋白與兒童反復上呼吸道感染具有一定的相關性，可能三者共同促進反復呼吸道感染的發生。

關鍵詞：反復上呼吸道感染;血清25羥維生素D3;LL-37;免疫球蛋白

中圖分類號：R725.6? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2020.09.054

文章編號：1006-1959（2020）09-0162-03

Correlation of Serum Vitamin D3 with LL-37 and Ig Levels in Children

with Repeated Upper Respiratory Tract Infections

DUAN Xun-xin，SHI Yu-ying，HUANG Long，LIANG Xiao-jun，HU Zhi-jian

（Department of Laboratory Medicine，the Affiliated Hospital of Jiujiang University，Jiujiang 332000，Jiangxi，China）

Abstract：Objective? To explore the correlation between serum 25-hydroxyvitamin D3， LL-37 and Ig levels in children with repeated upper respiratory tract infections.Methods? 68 patients with recurrent upper respiratory tract infection who came to our hospital from January 2015 to December 2018 were selected as the relapse group， and 60 patients with upper respiratory tract infection who initially visited the hospital were set as the initial group. Fifty-six healthy children with physical examination were set as the control group. Chemiluminescence method was used to detect 25-hydroxyvitamin D3 in peripheral blood serum. IgA， IgM and IgG levels were determined by rate-scattering turbidimetry， and the level of antibacterial peptide LL-37 in sputum supernatant was detected by enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA），and conduct correlation analysis.Results? The levels of peripheral blood 25-hydroxyvitamin D3， IgA， IgM， and IgG in the initial group and relapse group were lower than those in the control group （P<0.05）， and the levels of peripheral blood 25-hydroxyvitamin D3， IgA， IgM， and IgG in the recurrent group were lower than the initial group（P<0.05）;The level of LL-37 in the relapse group was lower than that in the initial group （P<0.05）. Peripheral blood 25-hydroxyvitamin D3 in children with repeated upper respiratory tract infection was positively correlated with sputum supernatant LL-37， peripheral blood IgA， IgM， IgG levels（r=0.594、0.682、0.543、0.621，P<0.05）.Conclusion? Serum vitamin D3， LL-37 and immunoglobulin have a certain correlation with children's repeated upper respiratory tract infections， and the three may jointly promote the occurrence of repeated respiratory tract infections.

Key words：Repeated upper respiratory tract infections;Serum vitamin D3;LL-37;Immunoglobulin

反復上呼吸道感染（repeated upper respiratory tract infections，RURTI）是兒科的常見呼吸系統疾病之一，發病率高達20%以上[1]，病程漫長，遷延不愈，可嚴重影響患兒的生長發育和身心健康，生存質量顯著降低[2]。而免疫功能缺損被認為是引起上呼吸道感染反復發作的主要原因之一[3]。有研究表明[4]，維生素D對人體免疫起重要作用，抗菌肽LL-37是固有免疫的重要效應分子之一[5]，25羥維生素D3可通過其受體調節固有免疫，并促進抗菌肽LL-37的表達，增強機體的抗感染能力[6]。為了進一步探討反復呼吸道感染患兒與25羥維生素D3、LL-3及免疫球蛋白的關系，本研究分析反復上呼吸道感染患兒血中25羥維生素D3、LL-37和免疫球蛋白水平變化，并分析25羥維生素D3與LL-37、免疫球蛋白水平之間的相關性，現報道如下。

1資料與方法

1.1一般資料 選擇2015年1月～2018年12月九江學院附屬醫院兒科收治的RURTI患兒68例設為復發組，診斷均符合2008年中國醫學會兒科學分會制訂的標準，其中男38例，女30例，平均年齡（3.92±1.03）歲;選取初次就診的上呼吸道感染患兒60例為初發組，其中男36例，女24例，平均年齡（3.37±1.32）歲;另外選取同一時間段健康體檢的兒童56例設為對照組，其中男34例，女22例，平均年齡（3.67±1.14）歲。研究對象均排除使用腎上腺皮質激素、免疫調節劑及維生素D制劑等藥物，有心血管疾病、嚴重肝腎功能不全、免疫功能缺陷等疾病，且在3 d內未進行任何干預治療。本研究經過本院醫學倫理委員會批準，患兒家長同意，并簽署知情同意書。三組年齡、性別比較，差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2方法

1.2.1血清25羥維生素D3和免疫球蛋白水平測定? 所有受試者均于清晨坐位采肘靜脈血5 ml，室溫下放置20～40 min后，3000 r/min 離心10 min，離心分離血清并轉至EP管中，-70℃保存備檢。采用德國羅氏Cobase601電化學發光儀及配套試劑盒檢測血清25羥維生素D3，采用美國貝克曼IMMAGE800及配套試劑盒測定IgA、IgM、IgG水平。

1.2.2抗菌肽LL-37水平測定 初發組和復發組上呼吸道感染患兒用4%氯化鈉溶液霧化吸入? ? ? ? 10 min，痰液收集于無菌容器中，加入4倍體積的0.1%二硫蘇糖醇（DTT），置于37℃水浴箱5 min，吹打致黏液完全溶解，3000 r/min 離心5 min，上清液置于-70℃保存。采用ELISA檢測人抗菌肽LL-37水平，人抗菌肽ELISA試劑盒購于上海佳和生物科技有限公司。

1.3判斷標準[7]? 維生素D缺乏：<50.0 nmol/L;維生素D不足：50.0～75.0 nmol/L;維生素D充足：75.0～250.0 nmol/L[7]。

1.4統計學方法 采用SPSS 18.0統計軟件進行分析，計量資料用（x±s）表示，兩組間比較采用兩獨立樣本t檢驗，計數資料使用[n（%）]表示，比較采用？字2檢驗，相關分析應用Pearson相關系數法，P<0.05表示差異有統計學意義。

2結果

2.1三組25羥維生素D3、免疫球蛋白及LL-37水平比較? 復發組外周血25羥維生素D3、IgA、IgM、IgG的水平均低于對照組，復發組LL-37水平低于初發組，差異有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2三組維生素D水平分布情況? 對照組存在一定比例的維生素不足及缺乏，但初發組和復發組維生素D缺乏率高于對照組，復發組全部為維生素D的缺乏，見表2。

2.3反復上呼吸道感染患兒25羥維生素D3與免疫球蛋白及LL-37的相關性? 經Pearson分析反復呼吸道感染患兒外周血25羥維生素D3與免疫球蛋白IgA、IgM、IgG及LL-37的水平均呈正相關（r=0.682、0.543、0.621、0.594，P<0.05）。

3討論

反復上呼吸道感染是小兒常見病，冬春季發病為主，導致兒童上呼吸道感染反復發作的原因是多方面的，常見原因有支氣管哮喘、營養不良、免疫異常、病毒感染及慢性疾病等[8]，其主要病因與兒童自身的機體生理及免疫功能發育水平密切相關[3]。從兒童的生理結構特點來看，兒童上呼吸道氣道狹窄，含氣量少，肺彈力纖維不足，機體呼吸系統尚處于發育狀態，功能薄弱[9]，且兒童黏膜淋巴血管較為豐富，組織嬌嫩、柔軟，對外界刺激較為敏感，缺乏抵抗力[10]。血清25羥維生素D3是維生素D在體內的主要存在形式，其是一種免疫調節激素，研究證實，其具有增強機體抵抗力的作用，當血清25羥維生素D3缺乏時，可為細菌人侵機體定值、增殖提供機會，增加呼吸道感染的風險，近年有學者報道呼吸道反復感染與維生素D缺乏有明顯相關性[11]。此外，Belderbos ME等[12]研究也發現，新生兒25羥維生素D3缺乏明顯增加上呼吸道感染次數和風險。

本研究中對照組具有一定比例的維生素D不足及缺乏，說明兒童應加強維生素D的補充，但初發組和復發組上呼吸道感染患兒的維生素D缺乏率高于對照組，復發組維生素D的缺乏率達100.00%。復發組和初發組上呼吸道感染患兒外周血清25羥維生素D3水平低于對照組，復發組上呼吸道感染患兒外周25羥維生素D3水平低于初發組，差異有統計學意義（P<0.05），表明血清25羥維生素D3缺乏可能與患兒反復呼吸道感染有關。

抗菌肽LL-37是Cathelicidin家族的成員之? 一[13]，是人體先天免疫系統的組成部分，可以直接參與調節機體炎癥的發生、發展，在機體的防御功能中扮演重要角色，具有廣譜抗菌活性、免疫調節、促進損傷修復、誘導細胞凋亡等生物學功能[14]。研究表 明[15]，LL-37在炎癥部位的表達受促炎細胞因子、細菌產物等一系列刺激因素的上調，但抗菌肽LL-37在上呼吸道反復感染中的作用尚不明確。Sun L等[16]研究表明，25羥維生素D3是抗菌肽的潛在誘導因子，其可通過與維生素D受體（vitamin D receptor，VDR）結合，促進抗菌肽的表達。25羥維生素D3缺乏降低VDR信號通路促進抗菌肽LL-37的表達。本研究發現復發組上呼吸道感染患者LL-37水平低于初發組（P<0.05），表明LL-37缺乏可能與患兒反復呼吸道感染有關。另外本研究發現反復上呼吸道感染患兒外周血25羥維生素D3和誘導痰上清液抗菌肽LL-37水平呈正相關，表明25羥維生素D3的缺乏可能會引起抗菌肽LL-37的水平降低。

免疫功能低下是導致呼吸道感染反復發作的主要原因。體液免疫在抗感染中起到重要作用。IgA是呼吸道和消化道腔內主要的免疫球蛋白，是防御病原體入侵的第一道防線，在黏膜免疫中發揮著重要作用; 而IgM是近期感染的重要標志，通過將補體激活，以實現對微生物的吞噬的殺傷，對早期的感染起到重要的免疫防御作用，是新生兒出生后形成的;IgG能有效調節吞噬細胞的吞噬功能，具有防護人體免疫功能的作用。本研究結果顯示復發組和初發組血清IgA、IgM 和IgG均低于對照組，提示上呼吸道感染患兒的體液免疫功能表現異常，IgA、IgM 和IgG水平的降低可能是患兒發生反復上呼吸道感染的原因之一。適應性免疫系統的細胞（樹突狀細胞、單核細胞、T淋巴細胞和B淋巴細胞、NK細胞）直接或者經適當免疫刺激后均可表達VDR，維生素D與受體結合，并參與機體免疫調節[17];血清25羥維生素D3水平高低還可直接影響到兒童免疫球蛋白功能的表達[18]，原因可能是維生素D3作為新的神經內分泌免疫調節素，能夠增殖分化T、B淋巴細胞，促進免疫調節。研究發現反復上呼吸道感染患兒外周血25羥維生素D3和IgA、IgM 和IgG水平呈正相關，表明25羥維生素D3的缺乏可能會引起人體的體液免疫功能低下。

綜上所述，反復呼吸道感染患兒存在血清維生素D的缺乏、LL-37及血清IgA、IgM、IgG水平降低的現象，維生素D與LL-37及免疫球蛋白呈正相關，可能三者共同促進反復呼吸道感染的發生，補充維生素D對兒童反復上呼吸道感染治療可能有一定的作用。

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收稿日期：2019-10-13;修回日期：2019-12-03

編輯/肖婷婷

作者簡介：段訓新（1992.9-），男，江西九江人，本科，主管技師，從事臨床檢驗工作