MSI對晚期結(jié)直腸癌化療效果評價的意義分析

胡文杰，應(yīng)雪，王景芳

（1.江西省景德鎮(zhèn)市第二人民醫(yī)院，景德鎮(zhèn) 333000；2.江西省景德鎮(zhèn)市第三人民醫(yī)院，景德鎮(zhèn) 333000）

結(jié)直腸癌（CRC）是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤，為全球第三常見的癌癥類型，其癌癥相關(guān)死亡率居第二位[1]。該病早期癥狀特異性較低，大部分患者確診時已是中晚期，失去了手術(shù)機(jī)會，化療則是中晚期CRC 最為重要的治療方式[2]。CRC 發(fā)生機(jī)制較為復(fù)雜，其發(fā)生是一個多因素及多基因參與的過程[3]。隨著分子靶向治療研究的不斷深入，越來越多的文獻(xiàn)報道其發(fā)病主要原因除了癌基因的激活、抑癌基因的抑制，微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（MSI）為其發(fā)病的另一重要因素[4]。本研究對晚期CRC 化療患者進(jìn)行MSI 分析，探討MSI 狀態(tài)對患者化療療效及預(yù)后的影響。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取 2016 年 1 月-2019 年 1 月我院收治的晚期CRC 患者200 例，均符合CRC 的診斷標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)腸鏡活檢后病理組織學(xué)確診，有RECIST 實(shí)體瘤療效評價標(biāo)準(zhǔn)中的可測量病灶，影像學(xué)檢查或轉(zhuǎn)移灶活檢明確存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶，預(yù)計生存期>3 個月，功能狀態(tài)評分（KPS）>70 分，初治患者，進(jìn)行至少2 個周期FOLFOX 方案化療，意識清楚，表達(dá)順暢；排除存在腫瘤腦轉(zhuǎn)移，化療前接受過任何形式的抗腫瘤治療,心肝肺腎功能及造血功能嚴(yán)重異常,存在其他化療禁忌癥，精神病史、意識不清、認(rèn)知障礙者及病例資料記錄不完整者。200 例患者中男 126 例，女 74 例；年齡 39-74（61.53±6.78）歲；病變部位：右半結(jié)腸 84 例，左半結(jié)腸71 例，直腸 45 例；病理類型：黏液腺癌 76 例，非黏液腺癌124 例；分化程度：低分化108 例，中高度分化 92 例；轉(zhuǎn)移情況：單發(fā) 117 例，多發(fā) 83 例。

1.2 方法

1.2.1 化療方法 200 例患者均予FOLFOX 方案進(jìn)行化療。奧沙利鉑 （批準(zhǔn)文號： 國藥準(zhǔn)字H20093487；生產(chǎn)廠家：浙江海正藥業(yè)股份有限公司；規(guī)格：50mg/支）85mg/m2靜脈滴注 2h，第 1d；亞葉酸鈣 （商品名： 同奧； 批準(zhǔn)文號： 國藥準(zhǔn)字H20000584；生產(chǎn)廠家：江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司；規(guī)格：50mg/支）200m/m2靜脈滴注 2h，第 1、2d：5-氟尿嘧啶（批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字H12020959；生產(chǎn)廠家： 天津金耀藥業(yè)有限公司； 規(guī)格：250mg/支）400mg/m2靜脈推注，再以600mg/m2持續(xù)靜脈注射22h，第 1、2d。14d為1 個化療周期，持續(xù)治療不少于2 個周期。

1.2.2 療效判定 采用RECIST 實(shí)體瘤評估標(biāo)準(zhǔn)對化療療效進(jìn)行評價。完全緩解（CR）：所有可見病灶完全消失，全部病理淋巴結(jié)短直徑減少至10mm 以下；部分緩解（PR）：所有可見病灶直徑之和比基線水平減少30%以上；疾病進(jìn)展（PD）：所有可見病灶直徑之和比基線水平增加至少20%且5mm 以上；疾病穩(wěn)定（SD）：靶病灶改變程度介于PR 和PD 之間；有效率（ORR）=CR+PR，疾病控制率（DCR）=CR+PR+SD。

1.2.3 MSI 分析 對所有原發(fā)腫瘤組織進(jìn)行DNA錯配修復(fù)基因 （MMR） 檢測，分析 MLH1、MSH2、MSH6 以及PMS2 的表達(dá)情況。⑴免疫組化染色：所有試劑均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司，儀器采用美國羅氏公司生產(chǎn)的Benchmark XT全自動免疫組織化學(xué)染色機(jī)。腫瘤組織固定，包埋，并制成3μm 石蠟切片，再用染色機(jī)進(jìn)行染色，染色步驟嚴(yán)格參照配套試劑盒說明書進(jìn)行。⑵結(jié)果判讀： 所有閱片由2 名高年資病理科醫(yī)師采用雙盲法完成。計數(shù)5 個高倍視野，根據(jù)染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞所占的百分比進(jìn)行評分。染色強(qiáng)度評定標(biāo)準(zhǔn)：棕褐色為3 分，棕黃色為2 分，淡黃色為1分，無色為0 分； 陽性細(xì)胞所占的百分比評定標(biāo)準(zhǔn)：＞75%為 4 分，50%-75%為 3 分，10%-50%為 2分，≤10%為1 分，陰性為0 分。染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞百分比的乘積為最終分?jǐn)?shù)：8-12 分為強(qiáng)陽性，4-7 分為中度陽性，1-3 分為弱陽性，0 分為陰性。MLH1、MSH2、MSH6 或 PMS2 中任意一種或一種以上表達(dá)為陰性定義為MMR 蛋白缺失，即為MSI；四種蛋白均未見表達(dá)缺失，則為微衛(wèi)星穩(wěn)定（MSS）。

1.3 觀察指標(biāo) 根據(jù)200 例患者M(jìn)SI 分析結(jié)果分為 MSS 組、MSI 組，回顧性分析 2組患者臨床特征、化療療效及預(yù)后。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 19.0 軟件分析數(shù)據(jù)。計數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有顯著性意義。

2 結(jié)果

2.1 200 例患者M(jìn)SI 分析結(jié)果 200 例患者原發(fā)腫瘤組織標(biāo)本結(jié)果顯示，出現(xiàn)至少一種錯配修復(fù)蛋白陰性表達(dá)即 MSI 狀態(tài) 22 例（MSI 組）、缺失率為11.00%，MSS 狀態(tài)則為 178 例 （MSS 組）、穩(wěn)定率89.00%。其中 hPMS2 蛋白缺失 21 例 （10.50%）、hMLH1 蛋白缺失 18 例（9.00%）、hMSH2 蛋白缺失4 例 （2.00%）、hMSh6 蛋白缺 失 3 例 （1.50%），MLH1、hPMS2 共同缺失 16 例 （8.00%）、hMSH2、hMSH6 共同缺失 2 例（1.00%）。

2.2 2組患者臨床特征比較 2組患者性別、年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），腫瘤部位、分化程度、病理類型及轉(zhuǎn)移情況比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），MSI 組有好發(fā)于右半結(jié)腸、傾向于低分化及黏液腺癌、易發(fā)生2 個及以上轉(zhuǎn)移部位的病理特征。見表1。

2.3 2組患者化療療效比較 MSI 組 ORR、DCR 分別為 9.09%、45.45%，MSS 組分別為 32.58%、70.79%，MSI 組 ORR、DCR 均明顯低于 MSS 組 （P＜0.05）。見表2。

表1 2組患者臨床特征比較[n（%）]

表2 2組患者化療療效比較[n（%）]

3 討論

MMR 是DNA 修復(fù)系統(tǒng)的重要成員，MSI 主要由MMR 缺陷造成DNA 復(fù)制后自我修復(fù)功能喪失，導(dǎo)致微衛(wèi)星重復(fù)的數(shù)目改變，出現(xiàn)新的微衛(wèi)星等位基因現(xiàn)象[5]。研究證實(shí)，MSI 狀態(tài)可致癌基因的異常表達(dá)或者抑癌基因的失活，導(dǎo)致正常基因突變并且不斷積累，并將錯誤的信息傳布腫瘤基因，與多種惡性腫瘤尤其是結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)[6,7]。MLH1、MSH2、MSH6 及 PMS2 均為 MSI形成過程中的主要錯配修復(fù)蛋白,任何一項錯配修復(fù)基因表達(dá)缺失都可導(dǎo)致MSI。本研究檢測了200例晚期CRC 患者腫瘤組織上述蛋白的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有22 例（11%）患者存在MSI，這與以往文獻(xiàn)報道的基本一致[8]。進(jìn)一步研究顯示，2組患者腫瘤部位、分化程度、病理類型及轉(zhuǎn)移情況比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），表明MSI 狀態(tài)患者存在腫瘤好發(fā)于右半結(jié)腸、傾向于低分化及黏液腺癌、易發(fā)生多轉(zhuǎn)移部位等病理特征[9]，提示基因編碼的差異、蛋白表達(dá)水平的不同與結(jié)直腸癌的發(fā)病位置、病理類型、分化程度等存在某種關(guān)聯(lián)。此外，MSI 組 RR、DCR 均明顯低于 MSS 組（P＜0.05），表明相較于MSS 患者，MSI 患者化療療效更差，考慮可能為結(jié)腸癌腫瘤組織存在MMR 蛋白缺乏，而后者是腫瘤組織對抗腫瘤藥物的主要機(jī)制之一。

綜上所述，MSI 狀態(tài)與晚期CRC 的化療療效及預(yù)后密切相關(guān)，可作為晚期CRC 預(yù)測化療療效和預(yù)后的指標(biāo)，具有重要的臨床意義。但本研究仍存在一定的局限性，如MSI 患者在總體患者中所占比例較低（22 例），導(dǎo)致樣本量較小；研究中檢測MLH1、MSH2、MSH6 及 PMS2 四種蛋白，對其他錯配修復(fù)蛋白無關(guān)注。后續(xù)工作中我們將進(jìn)一步完善臨床研究，以期闡明MSI 對晚期CRC 產(chǎn)生影響的相關(guān)分子機(jī)制。