葡萄皮提取物的免疫功能和血脂調(diào)節(jié)功能的研究

高文英 劉超

摘要：為了研究葡萄皮提取物對免疫和血脂的調(diào)節(jié)作用，按照《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》2003年版中增強免疫力功能檢驗方法和《關(guān)于印發(fā)抗氧化功能評價方法等9個保健食品功能評價方法的通知》中附件6輔助降血脂功能評價方法進行動物實驗。實驗結(jié)果顯示，血脂實驗 與模型組比較，各劑量組葡萄皮提取物能顯著降低大鼠血清中總膽固醇TC、甘油三酯TG（P<0.05），高劑量組顯著降低低密度脂蛋白LDL-C的含量（P<0.05）;免疫試驗 與對照組比較，高劑量組小鼠ConA誘導的脾淋巴細胞增殖能力顯著增加（P<0.05），中、高劑量組小鼠對DNFB誘導的DTH反應(yīng)顯著增大（P<0.05）;與對照組比較，中、高劑量組小鼠碳廓清吞噬指數(shù)、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬百分率和小鼠吞噬指數(shù)均顯著增大（P<0.05）;小鼠體液免疫和NK細胞活性無明顯影響。說明葡萄皮提取物可以調(diào)節(jié)大鼠血脂水平，同時可以增強小鼠的免疫力。

關(guān)鍵詞：葡萄皮;白藜蘆醇;血脂;免疫;甘油三脂;NK細胞

隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展，人們生活水平亦不斷提高，飲食結(jié)構(gòu)和生活方式的發(fā)生改變，正常人群高脂血癥的發(fā)病率逐年升高。不止城市人高血脂人群增加，農(nóng)村高血脂人群增加更快，目前高達20%～30%。高脂血癥是引發(fā)心腦血管疾病、脂肪肝、腎病的重要危險因素，影響身體免疫狀態(tài)。因此開發(fā)和研制具有調(diào)節(jié)血脂作用的安全有效的保健品意義重大[1]。

葡萄中除了含有大量的營養(yǎng)成分外， 還含有豐富的生物活性成分，其中原花青素和齊墩果酸等具有降血脂作用。葡萄皮除含有豐富的原花青素外，還含有比葡萄肉和籽中更豐富的白藜蘆醇，具有降血脂、抗血栓、預(yù)防動脈硬化、增強免疫力等作用[2]。葡萄皮提取物26.6mg/kg.bw灌胃，可有效降低大鼠甘油三酯和總膽固醇[3]。白藜蘆醇能使高脂血癥大鼠的TC、TG、LDL-c及AI明顯降低，升高HDL-C和HDL-C/TC比值[4]。白藜蘆醇可提高NK細胞的殺傷活性，提高淋巴細胞轉(zhuǎn)化率[5]。Sfaxi等發(fā)現(xiàn)葡萄籽提取物中的總酚和黃酮含量高于葡萄皮提取物，但葡萄皮提取物中的濃縮單寧酸是葡萄籽提取物的3倍，濃縮單寧酸具有調(diào)節(jié)免疫力的作用[6]。本實驗觀察葡萄皮提取物對小鼠免疫功能的影響，研究葡萄皮提取物對高血脂大鼠血脂的調(diào)節(jié)作用。

1材料與方法

1.1受試樣品：葡萄皮提取物由天津市尖峰天然產(chǎn)物研究開發(fā)有限公司提供。人推薦劑量為1.2g/人/日，白藜蘆醇含量為5.08%。

1.2實驗動物：選用SPF級昆明種雌性小鼠200只，用于增強免疫功能實驗。選用健康SPF級Wistar雄性大鼠50只，用于調(diào)節(jié)血脂實驗。

1.3主要儀器與試劑：動物天平、電子天平、離心機、酶標儀、恒溫水浴鍋、手術(shù)器械、恒溫培養(yǎng)箱、顯微鏡;膽固醇、膽酸鈉、血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C），高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）測定試劑盒等。

1.4 高脂飼料：基礎(chǔ)飼料78.8% 、膽固醇1% 、蛋黃粉10% 、豬油10% 、膽鹽 0.2%。

1.5劑量分組及受試物給予：

增強免疫功能實驗分為五個實驗組，每組40只小鼠。免疫實驗一組進行遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實驗;實驗二組進行淋巴器官/體重比值測定和碳廓清實驗;實驗三組進行ConA誘導的小鼠淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗和NK細胞活性測定;實驗四組進行血清溶血素的測定和抗體生成細胞檢測;實驗五組進行小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗。每組實驗設(shè)置低、中、高三個劑量組和一個空白對照組，三個劑量組分別為人體推薦量的5倍、10倍、30倍，即以0.1g/kg.bw、0.2g/kg.bw、0.6g/kg.bw葡萄皮提取物灌胃小鼠。空白對照組灌胃等體積純化水。

調(diào)節(jié)血脂實驗：10只大鼠給予維持飼料作為空白對照組，40只給予模型飼料作為模型對照組。模型對照組給予模型飼料8天后，根據(jù)TC水平將模型對照組隨機分成4組。設(shè)置低、中、高三個劑量組和一個模型對照組，三個劑量組分別為人體推薦量的5倍、10倍、30倍，即以0.1g/kg.bw、0.2g/kg.bw、0.6g/kg.bw葡萄皮提取物灌胃大鼠。空白對照組和模型對照組灌胃給予相當體積的去離子水。空白對照組喂食維持飼料，模型對照組和低、中、高劑量組喂食高脂模型飼料。

1.5試驗方法

增強免疫功能實驗按照《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》2003年版（功能學評價檢驗方法）進行實驗。調(diào)節(jié)血脂實驗按照國家食品藥品監(jiān)督管理局《關(guān)于印發(fā)抗氧化功能評價方法等9個保健食品功能評價方法的通知》（國食藥監(jiān)保化[2012]107號）附件6輔助降血脂功能評價方法的標準進行實驗。

1.6試驗數(shù)據(jù)統(tǒng)計

采用方差分析，按方差分析的程序先進行方差齊性檢驗，方差齊，計算F值，F(xiàn)值

2結(jié)果與分析

2.1葡萄皮提取物對大鼠血脂的調(diào)節(jié)作用

2.1.1葡萄皮提取物對大鼠體重的影響：受試樣品對各劑量組大鼠體重均無明顯影響，與空白對照組及模型對照組比較差異均無顯著性（P>0.05）。

2.1.2實驗前大鼠血脂含量水平：與模型對照組比較，各劑量組大鼠血清總膽固醇TC、甘油三酯TG、高密度脂蛋白HDL-C、低密度脂蛋白LDL-C含量差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。空白對照組血清總膽固醇TC、甘油三酯TG和低密度脂蛋白LDL-C顯著低于模型對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。見表1。

2.1.3實驗后大鼠血脂含量水平：與模型對照組比較，各劑量組大鼠血清TC、TG均顯著下降，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;高劑量組大鼠血清LDL-C含量下降，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。各劑量組大鼠血清HDL-C含量差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。空白對照組大鼠血清TC、TG和LDL-C含量顯著低于模型對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。見表2。

2.2葡萄皮提取物對小鼠免疫力的調(diào)節(jié)作用

2.2.1對小鼠體重的影響：五個實驗組中，受試樣品對各劑量組小鼠體重均無明顯影響，與空白對照組比較，差異均無顯著性（P>0.05）。

2.2.3對小鼠細胞免疫功能的影響：與空白對照組比較，高劑量組小鼠ConA誘導的脾淋巴細胞增殖能力顯著增加，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）;中、高劑量組小鼠對DNFB誘導的DTH反應(yīng)顯著增大，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。

2.2.4對小鼠體液免疫功能的影響：與空白對照組比較，各劑量組小鼠抗體生成細胞數(shù)量及血清溶血素含量均無明顯變化，無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

2.2.5對小鼠單核-巨噬細胞功能的影響：與空白對照組比較，中、高劑量組小鼠碳廓清吞噬指數(shù)、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬百分率和小鼠吞噬指數(shù)均顯著增大，具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。低劑量小鼠碳廓清吞噬指數(shù)、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬百分率和小鼠吞噬指數(shù)無明顯變化，無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

2.2.6對小鼠NK細胞活性的影響：與空白對照組比較，各劑量組小鼠NK細胞活性均無明顯變化，無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。

3. 結(jié)論

高脂血癥可引起內(nèi)皮細胞的損傷和灶狀脫落，可導致血管壁的通透性升高。血漿脂蛋白得以進入內(nèi)膜。其后引起巨噬細胞的清除反應(yīng)和血管壁平滑肌細胞增生，并形成斑塊。同時，脂質(zhì)成分也能使細胞膜，包括血小板、內(nèi)皮細胞、平滑肌細胞等胞膜的脂質(zhì)成分改變，從而使這些細胞的生物活性發(fā)生改變，同時還使體內(nèi)免疫功能發(fā)生改變[7]。高血脂癥的脂質(zhì)代謝紊亂可以誘導巨噬細胞及血管壁細胞產(chǎn)生細胞黏附分子、化學因子及炎癥介質(zhì)，同時損傷血管內(nèi)皮，激活損傷應(yīng)答過程。同時脂質(zhì)成分使細胞膜等胞膜的脂質(zhì)發(fā)生改變，從而使細胞生物活性改變，從而影響體內(nèi)免疫功能發(fā)生改變。

實驗結(jié)果顯示，血脂實驗 與模型組比較，各劑量組葡萄皮提取物能顯著降低大鼠血清中總膽固醇TC、甘油三酯TG（P<0.05），高劑量組顯著降低低密度脂蛋白LDL-C的含量（P<0.05）;免疫試驗 與對照組比較，高劑量組小鼠ConA誘導的脾淋巴細胞增殖能力顯著增加（P<0.05），中、高劑量組小鼠對DNFB誘導的DTH反應(yīng)顯著增大（P<0.05）;與對照組比較，中、高劑量組小鼠碳廓清吞噬指數(shù)、小鼠腹腔巨噬細胞吞噬百分率和小鼠吞噬指數(shù)均顯著增大;小鼠體液免疫和NK細胞活性無明顯影響。說明葡萄皮提取物可以調(diào)節(jié)大鼠血脂水平，同時可以增強小鼠的免疫力。

參考文獻：

[1]崔曉田.中醫(yī)藥物治療高脂血癥的機制研究[J].山東醫(yī)學高等專科學校學報，2007，29（1） ： 42.

[2]于紅霞，趙秀蘭，徐貴發(fā)，等.葡萄籽提取物對高脂家兔血脂的影響[J].衛(wèi)生研究.2002， 31（2）：114-116

[3]劉忠華，劉文杰.葡萄皮提取物與磷蝦油對肥胖高脂血癥大鼠血脂的影響.山東化工.2016年第45卷：42-43轉(zhuǎn)46

[4]朱立賢，金征宇.白藜蘆醇對大鼠實驗性高脂血癥的影響[J].食品科學，2005，26（10） ： 228.

[5]李覃，袁育康，范桂香，等.白黎蘆醇增強機體免疫調(diào)節(jié)功能的研究.新疆醫(yī)學.2004年第34期：14-17

[6] Pathak AK， Dutta N， Banerjee PS， et al. Effect of condensed tannins supplementation through leaf meal mixture on voluntary feed intake， immune response and worm burden in Haemonchus contortus infected sheep[J]. J Parasitic Dis，2016， 40：100-105

[7]任建勛，張衛(wèi)萍.痰瘀同治對高脂血癥大鼠免疫功能影響的實驗研究[J].中醫(yī)藥發(fā)展與人類健康.2005，11：843-845.