外周血CD40、CD40L表達及血清BAFF水平對ITP患者療效的預測價值

尹鳳雷 尹娟 趙芳 張睿 劉靜 張薇 李淑晨 王娟

原發免疫性血小板減少癥（idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP）為臨床上常見的獲得性免疫介導出血性疾病，主要以血小板減少、骨髓巨核細胞正常或增多為其主要臨床表現［1-2］。該病發病機制尚不明確，可能與血小板膜抗原產生抗血小板抗體而使血小板破壞，而影響淋巴細胞的活化及免疫反應［3］。B 細胞激活因子水平過高可破壞自身B 細胞的免疫耐受而出現免疫性疾病，但其水平過低又可導致免疫球蛋白成熟受阻而引起體液免疫缺陷，導致變異型免疫缺陷疾病的發生［4］。多項研究顯示外周血CD40、CD40L 表達及血清BAFF 水平在ITP 發生發展中具有重要的意義，但對于上述指標對ITP 患者療效預測方面的研究較少，因此本研究旨在通過探討外周血CD40、CD40L 表達及血清BAFF 水平對ITP 患者療效的預測價值以期為該病的療效預測提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2017年12月至2019年3月在本院接受治療的ITP 患者80例（觀察組）及同期健康體檢患者100例（對照組）進行研究。其中對照組男44例，女36例；年齡23～58 歲，平均（42.23±6.11）歲；BMI 指數21～29 kg/m2，平均（26.58±3.05）kg/m2。觀察組男55例，女45例；年齡21～59 歲，平均（42.22±6.31）歲；身體質量指數（Body Mass Index，BMI）20～28 kg/m2，平均（26.33±2.88）kg/m2。納入標準：①觀察組患者符合《成人原發免疫性血小板缺少癥診治的中國專家共識》［5］中的相關診斷，對照組不符合相關診斷；②受試者無精神性疾病；③患者對本研究知情并簽署知情同意書。排除標準：①病毒感染繼發ITP 的患者；②惡性腫瘤的患者；③藥物致出血者。兩組患者性別、年齡、BMI 指數對比差異均無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

①外周血CD40、CD40L 檢測：抽取觀察組治療前及對照組空腹外周靜脈血4 mL，加含單克隆熒光標記抗體的鼠抗人CD40-FITC 及CD40L-PE各10 μL（試劑盒均購自于美國R＆G 公司），混勻后室溫下孵育，以PBS 緩沖液清洗后進行美國賽默飛世爾公司Attune NxT 型流式細胞儀檢測，每管收獲10 000 個細胞，以儀器配套軟件分析。②血清BAFF 檢測：采集調查對象血氧2 mL，在3 000 r/min 轉速下離心15 min，吸取0.8 mL 冷凍待測，以酶聯免疫吸附法檢測BAFF 水平，試劑盒購于美國Sigma 公司。③療效判斷標準：完全緩解：血小板計數在100×109L 以上，出血癥狀消失；有效：血小板計數在30×109L 以上且較治療前增加2 倍以上，無出血；無效血小板計數不足30×109L，與治療前相比上升不足2 倍或出現出血癥狀。根據上述標準將觀察組分為2 組，完全緩解及有效的患者劃入治療反應組，無效的患者劃入治療無反應組。

1.3 統計學方法

采用SPSS 22.0 軟件進行數據分析，計量資料用（）表示，采用t檢驗進行分析，相關性分析采用Perason 相關系數法，以受試者工作曲線（ROC）分析外周血CD40、CD40L 表達及血清BAFF 水對ITP 患者療效預測價值，以P＜0.05 為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 2 組受試者外周血CD40、CD40L 表達及血清BAFF 水平對比

觀察組外周血CD40、CD40L 表達及血清BAFF 水平均明顯高于對照組的，差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表1。

表1 2 組患者外周血CD40、CD40L 表達及血清BAFF水平對比（±s）Table1 Comparison of CD40，CD40L expression and serum BAFF levels in peripheral blood of 2 groups of patients（±s）

表1 2 組患者外周血CD40、CD40L 表達及血清BAFF水平對比（±s）Table1 Comparison of CD40，CD40L expression and serum BAFF levels in peripheral blood of 2 groups of patients（±s）

組別對照組觀察組t 值P 值CD40 7.31±2.07 12.92±3.05 6.721 0.000 CD40L 3.24±1.06 6.09±1.70 5.947 0.000 BAFF（ng/L）603.17±112.38 716.44±137.48 2.936 0.005

2.2 觀察組不同療效患者外周血CD40、CD40L表達及血清BAFF 水平對比

治療無反應組患者患者外周血CD40、CD40L表達及血清BAFF 水平均明顯高于治療反應組，差異具有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 ITP 患者外周血CD40、CD40L 表達及血清BAFF 水平與療效相關性分析

ITP患者外周血CD40、CD40L表達及血清BAFF水平均與療效呈顯著負相關，（r值分別為-0.691、-0.713、-0.652）。差異具有統計學意義（P＜0.05）。

表2 觀察組不同療效患者外周血CD40、CD40L 表達及血清BAFF 水平對比（±s）Table2 Comparison of CD40，CD40L expression and serum BAFF levels in peripheral blood of patients with different curative effects in the observation groups（±s）

表2 觀察組不同療效患者外周血CD40、CD40L 表達及血清BAFF 水平對比（±s）Table2 Comparison of CD40，CD40L expression and serum BAFF levels in peripheral blood of patients with different curative effects in the observation groups（±s）

組別治療反應組治療無反應組t 值P 值n 56 24 CD40 11.63±3.73 15.92±5.09 2.127 0.045 CD40L 5.61±1.14 6.88±1.25 2.237 0.034 BAFF（ng/L）683.08±111.88 804.07±117.65 2.155 0.040

2.4 ROC 分析

ROC 曲線分析結果顯示骨髓CD40 對ITP 療效預測的cutoff 值為12.28 %，AUC 為0.892，靈敏度為83.16%，特異度為92.06%；外周血CD40L 對ITP 療效預測的cutoff 值為6.08%，AUC 為0.784，靈敏度為81.75%，特異度為90.25%；BAFF 對ITP療效預測的cutoff值為745.02 ng/L，AUC 為0.708，靈敏度為81.02%，特異度為90.14%。見圖1。

圖1 ROC 分析圖Figure1 ROC analysis chart

3 討論

臨床上出血性疾病中30%為ITP，該病與機體對自身抗原的免疫失耐受密切相關，但對于免疫失耐受的具體作用機制目前尚未被完全闡釋［6-7］。ITP 患者自身抗體的產生與血小板、抗原遞呈細胞、T 細胞及B 細胞間的相互作用有關。該病的臨床治療難度大，部分患者常規治療難以起效發展成為難治性ITP。因ITP 發病機制較為復雜，目前尚未完全明確，對于該病的診斷仍以排除性診斷為主，目前尚缺乏特異性較強的實驗室診斷依據，因而對于該病的療效預測的研究進展較慢，而療效預測對于ITP 治療方案的選擇具有重大的影響，因此尋找合適的ITP 患者療效預測指標一直是研究的熱點。

CD40、CD40L 為特異性免疫系統中共刺激分子重要的一員，其在體液免疫及細胞免疫中均有著重要的作用，目前已有大量研究證實CD40、CD40L 信號傳導途徑在腫瘤、艾滋病、移植物抗宿主病等多種自身免疫性疾病中發揮重要的作用［8-13］。本研究結果提示了ITP 的發病與CD40、CD40L 有密切的關系。在健康人體內CD40L 僅在激活的T 淋巴細胞表面有暫時性的表達，CD40 在正常情況下表達量也較大，僅在各種病理條件下才會出現明顯的上調，CD40L 長時間表達可抑制活化的自身反應性淋巴細胞凋亡而引起自身免疫性疾病，因此其表達水平的高低可對患者的預后情況具有預測作用，預后較好者表達水平相對較高。研究證實ITP 患者的B 淋巴細胞增殖、活化、凋亡等均與健康人群有明顯的差異，ITP 患者樹突狀細胞接受內毒素刺激后釋放BAFF 明顯較多，對于B 淋巴細胞的存活具有重要的意義［9］。研究顯示：當采用大劑量激素進行治療時，ITP 患者可出現BAFF 水平下調，提示BAFF 可能為ITP 潛在的治療靶點［14-15］。

綜上所述，ITP 患者外周血CD40、CD40L 表達及血清BAFF 水平明顯高于健康人群，無治療反應患者外周血CD40、CD40L 表達及血清BAFF 水平明顯更高，上述指標對ITP 患者療效具有較高的預測價值。因本研究為單中心研究，樣本量較少，取得的結果可能有一定的偏差，下步將擴大樣本量進行進一步深入研究。