RA患者免疫功能失衡與疾病活動情況的關系研究

孟慶防

類風濕關節炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一組以炎性滑膜炎為臨床表現的自身免疫性疾病，本病多發于雙手、腕、膝以及足等關節處[1]。RA患者癥狀以體重下降、易疲、關節畸形以及功能受限等為主，部分患者還將出現心臟、呼吸系統、神經系統以及腎臟受累等，嚴重影響患者生存質量[2-3]。臨床尚未就RA 病機達成一致，但多數研究認為T細胞免疫應答失衡是本病的重要影響因素[4-5]。最新研究表明[6]，T細胞因子異常表達與RA患者疾病進展時期相關，不同疾病階段患者T細胞應答模式可能存在一定變化。為探究RA患者免疫功能失衡與患者疾病活動程度間的關系，本文選取90例RA患者進行如下研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年6月至2018年6月本院類風濕免疫科確診的RA患者90例（RA組）、健康體檢志愿者60例作為對照組。RA組，男26例、女64例，年齡46～79歲，平均（62.2±10.6）歲，病程（10.7±3.2）年，患者體質量指數（Body Mass Index，BMI）（23.4±2.1）kg/m2；關節壓痛數目（18.4±7.1）個，DAS28（Disease Activity Score 28）評分＞5.1 分的有39例、DAS28 評分≤5.1 分的有51例。對照組，男18例、女42例，年齡41～79歲，平均（60.8±11.3）歲，患者（BMI 23.2±2.5）kg/m2。兩組研究對象年齡、性別、BMI 比較，差異均無統計學意義（P＞0.05）。

納入標準：①RA患者的診斷標準參考2010年ACR（American College of Rheumatology）、EULAR（The European League Against Rheumatism）組織修訂的診斷標準[7]，患者具有典型的關節腫脹、疼痛、畸形、晨僵等；②患者年齡范圍19～79歲；③入組前3個月患者未接受任何相關藥物治療；④對照組為健康體檢志愿者；⑤本研究符合《赫爾辛基倫理學宣言》[8]中臨床研究相關規定。排除標準：①骨腫瘤疾病、骨結核；②合并心肝腎疾病；③伴有精神及認知功能障礙；④伴有病毒感染、全身感染性疾病；⑤其他類型的免疫系統疾病；⑥近3個月具有糖皮質激素、免疫抑制劑應用史。

1.2 方法

收集兩組患者外周靜脈血各4 mL，選用鹽城市凱特實驗儀器有限公司生產的KS50R 臺式高速冷凍離心機進行4 500 r/min，10cm 半徑離心12 min，收集上清選用上海睿鈺生物科技有限公司生產的Countstar Rigel 智能熒光流式細胞儀檢測兩組患者Th17 細胞、調節性T細胞（Regulatory cells，Treg）表達水平；選用魏氏法檢測患者ESR（Erythrocyte sedimentation rate）水平；選用ELISA 法檢測IFN-γ（Interferon-γ）、IL-4（Interleukin-4）及CRP（C-reactive protein）表達水平，相關試劑盒由上海撫生實業有限公司提供，操作根據相應說明書進行。

記錄RA組患者關節疼痛數目，并選用類風濕關節炎病情評價（DAS28 評分）系統對患者進行評價。分析Th17 細胞、Treg、IFN-γ、IL-4與患者關節疼痛數目、類風濕關節炎病情評價（DAS28 評分）的相關性。

1.4 統計學方法

采用SPSS 21.0 軟件進行數據分析，計量數數據用（）表示，兩組間分析采用獨立樣本t檢驗相關性分析采用Pearson 線性相關分析法；以P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組的免疫相關指標比較

RA組患者的Th17 細胞、血清IFN-γ 均高于對照組（P＜0.05），RA組患者的Treg 細胞低于對照組（P＜0.05）；（表1）。

表1 RA組和對照組的免疫相關指標比較（±s）Table1 Comparison of immune related indexes between RA group and control group（±s）

表1 RA組和對照組的免疫相關指標比較（±s）Table1 Comparison of immune related indexes between RA group and control group（±s）

組別RA組對照組t 值P 值n 90 60 Th17 細胞（%）1.68±0.54 0.61±0.27 14.200 0.000 Treg 細胞（%）2.17±0.67 3.21±0.82-8.507 0.000 IFN-γ（pg/mL）24.28±6.33 7.52±2.11 19.771 0.000 IL-4（pg/mL）141.7±17.4 144.0±22.0-0.713 0.477

2.2 兩組血清CRP、ESR水平比較

RA組患者的血清CRP、ESR水平均高于對照組，差異有統計學意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 不同疾病活動程度的RA組患者免疫功能指標比較

DAS28 評分＞5.1 分RA患者的Th17 細胞、血清IFN-γ 均高于≤5.1 分的患者（P＜0.05），DAS28評分＞5.1 分RA患者的Treg 細胞低于≤5.1 分的患者（P＜0.05）。見表3。

表2 兩組的血清CRP、ESR水平比較（±s）Table2 Comparison of serum CRP and ESR levels between the two groups（±s）

表2 兩組的血清CRP、ESR水平比較（±s）Table2 Comparison of serum CRP and ESR levels between the two groups（±s）

組別RA組對照組t 值P 值n 90 60 CRP（mg/L）21.51±8.40 3.77±1.04 16.258 0.000 ESR（mm/h）43.88±7.19 16.50±3.12 27.781 0.000

表3 不同疾病活動程度的RA組患者免疫功能指標比較[n，（±s）]Table3 Comparison of immune function indexes of RA group with different disease activity[n，（±s）]

表3 不同疾病活動程度的RA組患者免疫功能指標比較[n，（±s）]Table3 Comparison of immune function indexes of RA group with different disease activity[n，（±s）]

DAS28評分＞5.1 分≤5.1 分t 值P 值n 39 51 Th17 細胞（%）2.11±0.51 1.40±0.44 7.079 0.000 Treg 細胞（%）1.81±0.62 2.40±0.66-4.313 0.000 IFN-γ（pg/mL）27.54±6.10 22.10±5.94 4.255 0.000 IL-4（pg/mL）145.0±16.2 138.1±16.8 1.961 0.053

2.4 RA組患者免疫功能指標與DAS28 評分、壓痛關節數目的相關性

RA患者的Th17 細胞、血清IFN-γ與DAS28評分、壓痛關節數目呈顯著正相關（P＜0.05），RA患者的Treg 細胞與DAS28 評分、壓痛關節數目呈顯著負相關（P＜0.05）；見表4。

表4 RA組患者免疫功能指標與DAS28 評分、壓痛關節數目的相關性Table4 Correlation between immune function index and DAS28 score,number of tenderness joints in RA group

3 討論

Th17 細胞屬于T細胞亞群家族，對機體防御及人自身免疫性疾病具有重要意義[9]。Th17 作為T細胞誘導的炎癥反應的早期啟動子，可通過促前炎因子釋放來放大機體炎癥反應[10]。Th17 還可向多種炎性細胞因子轉化，并參與自身免疫性疾病的發生、發展；而Treg 細胞則可抑制自身反應T細胞表達，并維持機體免疫平衡[11]。本組研究結果提示Th17/Treg 失衡是RA 重要病理基礎。Th17/Treg 平衡主要受IL-2、IL-17、TGF-β 等細胞因子及CC 趨化因子受體4、維甲酸相關孤兒核受體γt 等轉錄因子調控，這些細胞因子或許是RA 靶向治療的新方向。

DAS28 評分是臨床常用的RA 病情評估體系，主要包含壓痛關節數、腫脹關節數、紅細胞沉降率以及近7 d 患者RA 病情活動自評分4個項目，并以此計算患者DAS28 得分，得分越高提示患者RA病情越嚴重[12]。進一步的研究發現，RA患者的Th17 細胞與DAS28 評分、壓痛關節數目呈顯著正相關，RA患者的Treg 細胞與DAS28 評分、壓痛關節數目呈顯著負相關，這佐證了前述結論。其原因可能為：①RA患者活動期及病情影響所致，活動期患者Th17 高表達，Treg 低表達，而非活動期患者Th17 表達上升，同時Treg 增高，甚至與健康人群相似[13-14]；②治療因素，活動期RA患者服藥藥物種類及劑量可能增大，某些藥物將加劇患者Th17/Treg 失衡狀況；③樣本及檢測誤差影響。

IFN-γ 淋巴細胞來源的一種糖蛋白，可促巨噬細胞合成一氧化氮合酶，并引發氧化反應。IFN-γ還具有抗病毒以及免疫調節功能[15]。CRP 則是人應急相蛋白的一種，可通過與細胞表面的Fc7 受體相互作用來影響免疫細胞分泌，并以此聯通人天然免疫系統及獲得性免疫系統，最終介導機體炎癥反應。ESR 增大與急性細菌性炎癥、風濕熱、慢性腎炎等疾病密切相關。患者疾病嚴重程度及活動期與IFN-γ表達水平密切相關，臨床或可將IFN-γ 納為RA 疾病嚴重程度及活動期評估指標。

由于基礎條件不足，本組研究取樣數量有限，研究廣泛適用性可能還存在一定不足，這有待我們下一步的大數據研究。

綜上所述，RA患者T細胞及免疫學因子失衡可能與患者疾病活動程度、病情嚴重程度有關。Th17/Treg、IFN-γ 等指標或可RA患者活動程度及病情嚴重程度評估指標。