2015—2018年上海地區成年女性HPV感染基因型別分析

馮欽蓓 劉春興 徐龍府

近幾年，我國女性宮頸癌發病呈上升趨勢[1]，成為威脅女性健康最常見的惡性腫瘤之一。人乳頭瘤病毒(human papilloma virus，HPV)尤其是高危型HPV持續感染是導致宮頸癌的主要因素[2]。HPV基因序列的多樣性造成基因型別種類繁多，而且各型別感染及分布存在明顯的人群差異和地域差異[3]，因此，明確地區人群HPV的感染現狀是預防宮頸癌的重要措施。本文通過對上海地區成年女性HPV感染及基因型別分布特征分析，以期對該地區HPV感染的現狀進行總結，為該地區女性宮頸癌的預防提供客觀的數據支持。

1 資料和方法

1.1 研究對象 研究對象來自2015年1月至2018年12月在華東療養院健康體檢并且進行HPV基因分型檢測的上海地區成年女性，共12 104例，年齡19～89歲，平均年齡(46.81±10.56)歲，中位年齡47歲。按照年齡分組，其中≤29歲組有420人，30～39歲組有2 940人，40～49歲組有3 921人，50～59歲組有3 329人；60～69歲組有1 253人，≥70歲組有241人。

1.2 試劑與儀器 HPV分型檢測試劑由亞能生物技術(深圳)有限公司生產提供，PCR擴增儀采用杭州浪跡科學儀器有限公司生產，ClassⅡ級A2型生物安全柜有山東新華生產，恒溫雜交儀由亞能生物技術(深圳)有限公司生產提供。

1.3 HPV基因分型方法

1.3.1 標本的采集 婦科醫師以窺陰器暴露宮頸，用棉拭子擦去分泌物，將宮頸刷置于宮頸口，順時針旋轉4～5周，取出宮頸刷，放入裝有3 mL保存液的采樣管中送檢。

1.3.2 HPV分型檢測方法 采用PCR反向斑點雜交技術，煮沸法提取DNA后，PCR擴增，然后膜條雜交顯色為陽性。可檢出17種高危型(HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82)和6種低危型(HPV6、11、42、43、81、83)。

1.4 統計學方法 使用SPSS 19.0對數據進行統計分析，計數資料用率表示，使用卡方檢驗和秩和檢驗比較不同組的差異，分析年齡與多重亞型基因感染的相關性使用Spearman秩相關方法，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HPV感染的基因型別分布情況 12 104例樣本中HPV陽性共2 137例，感染率為17.7%。全部感染病例中，23個型別均有檢出，高危型、低危型和高低?；旌闲透腥韭史謩e是12.9%(1 567例)、2.9%(345例)和1.9%(225例)，不同基因型別的感染率占比分布情況(圖1)；高危型的HPV基因亞型感染率由高到低分別是52、53、58、16、51、68、66、59、56、18、33、39、31、35、45、82、73；低危型感染率由高到低分別是81、43、42、6、11、83。

2.2 不同年齡組HPV感染情況 將研究對象按照年齡分成6組，各組感染情況(表1)，各年齡段HPV感染出現兩個高峰，第一個出現在≤29歲組，為18.8%，30～39歲組明顯下降 (χ2＝5.654，P＝0.017)，陽性率為14.4%；30～69歲各組陽性率呈上升趨勢，其中60～69歲組感染率最高，達到21.4%；所有年齡段中≥70歲組感染率最低為12.4%。

2.3 不同年齡組HPV多型別基因感染情況 2 137例感染者中，不同年齡組HPV多型別基因感染情況(表2)，單一型別感染1 605例，構成比為75.1%，兩個型別感染者為373例，二重感染構成比為17.5%，三型別及以上的多重感染者有159例，多重感染構成比是7.4%，合并感染構成比為24.9%；單一型感染中以單一高危型別為主，感染者有1 279例，感染構成比率為59.9%。70歲以上的多重感染率高于其他各組。年齡與多重型別感染呈線性相關 (rs＝0.047，P＝0.028)，即隨著年齡的增高，多重型別感染的概率也會相應增加。

圖1 2 137例HPV感染基因型別分布

表1 不同年齡組HPV感染情況[n(%)]

表2 不同年齡組HPV多型別基因感染情況[n(%)]

3 討論

HPV病毒是一種DNA病毒，可通過性接觸、間接接觸、外傷感染和母嬰傳染等方式進行傳播，其中性接觸是近年來HPV傳播的主要方式，有70%～80%的女性一生中至少感染過一次HPV，大部分的HPV感染都是一過性的，會在8～12個月內自行消退。本研究通過對成年女性健康體檢數據進行分析，本研究群體的HPV感染率與其他文獻報道的差異很大[4-5]。HPV感染主要受兩個因素影響，其一是病毒接觸，其二是宿主清除能力。30歲之前的女性陽性率出現一個高峰，與嚴鳴光等人對門診就診人群的HPV基因型分布特征相似[6]，可能是該年齡段女性性生活比較活躍或者性伴侶多且不穩定[7]有關；30歲以后的女性趨于穩定，陽性率降低，到60～69歲出現第二個高峰，可能是隨著年齡的增長，性生活活躍度下降，而且病毒清除能力下降，持續感染增多。70歲以后陽性率最低，而且多重感染升高，此年齡段女性性生活不活躍，接觸病毒的概率低，但免疫力低下，一經感染難以自然清除。

HPV持續感染[8]宮頸上皮細胞，病毒染色體整合到宿主細胞基因組上[9]是造成浸潤性宮頸癌和宮頸上皮內瘤變的主要原因[10]，低危型HPV感染與性病和濕疣有關，高危型HPV感染與惡性病變有關[11]，本研究發現，上海地區女性高危型HPV感染率高的型別分別是52、53、58、16、51、68、66、59、56、18、33、39、31、35、45、82、73；值得注意的是HPV52、53、58等有較高的感染率，排在前三位，而HPV18型感染率較低，排在第10位，陽性率3.1%。

宮頸癌的發生和發展主要是從宮頸上皮內瘤變到浸潤性癌的過程，其有著連續性的特點，通常情況下，早期宮頸癌患者不會出現顯著臨床癥狀，若患者出現比較明顯的癥狀，通常已經進展成了浸潤癌，預后不佳。本研究對象均是健康體檢人群，采用液基薄層細胞學聯合HPV-DNA分型檢測來篩查女性宮頸疾病，薄層液基細胞學是宮頸癌篩查常見的方法之一[12]，但受限于取材、藥物、制片等因素導致假陰性結果，因此，HPV-DNA檢測在宮頸內瘤變及宮頸癌的篩查中有舉足輕重的作用，對于連續兩年以上高危HPV感染陽性的患者應進行陰道鏡檢查以盡早發現病變并進行治療，并且針對本地區人群也可應用相應的疫苗提高HPV的防治效果。