農(nóng)藥境外登記GLP項(xiàng)目的委托及審閱策略

李紅霞，高 靜，王文濤，王欣童，溫華珍，林吉柏

(北京穎泰嘉和分析技術(shù)有限公司，北京 102206)

我國是農(nóng)藥生產(chǎn)大國，也是農(nóng)藥出口大國。隨著農(nóng)藥市場(chǎng)的開放，我國農(nóng)藥企業(yè)加快開拓國外市場(chǎng)。農(nóng)藥進(jìn)入相關(guān)國家市場(chǎng)前須在各國相關(guān)部門進(jìn)行登記，獲取批準(zhǔn)。農(nóng)藥境外登記人員在準(zhǔn)備登記一個(gè)農(nóng)藥產(chǎn)品之前，需要先對(duì)該產(chǎn)品的可行性、運(yùn)營模式和登記時(shí)間、費(fèi)用等進(jìn)行分析，確定其數(shù)據(jù)缺口，從而進(jìn)行相關(guān)的試驗(yàn)安排。在獲取試驗(yàn)報(bào)告后，準(zhǔn)備相應(yīng)的卷宗，提交后跟蹤進(jìn)度，直至獲得登記許可。

良好實(shí)驗(yàn)室規(guī)范(Good Laboratory Practice，GLP)是一種質(zhì)量管理體系，是實(shí)驗(yàn)室研究從計(jì)劃、試驗(yàn)、監(jiān)督、記錄到試驗(yàn)報(bào)告等一系列的管理而制定的法規(guī)性文件，用于對(duì)農(nóng)藥、醫(yī)藥等化學(xué)品進(jìn)行安全性評(píng)價(jià)。GLP的目的就是降低試驗(yàn)的誤差，確保試驗(yàn)結(jié)果的真實(shí)性。許多國家在登記資料要求中，都規(guī)定企業(yè)提交的數(shù)據(jù)報(bào)告需由具有GLP資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室出具。因此，作為境外登記人員，需要了解GLP項(xiàng)目的基本程序，委托、跟蹤 GLP項(xiàng)目執(zhí)行及審閱GLP報(bào)告時(shí)應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注的問題。本文概要介紹了境外登記人員如何進(jìn)行相關(guān)的試驗(yàn)委托，并對(duì)幾種常見的登記試驗(yàn)項(xiàng)目如何進(jìn)行審閱做了重點(diǎn)闡述。

1 選擇適合的GLP實(shí)驗(yàn)室

境外登記人員在進(jìn)行登記試驗(yàn)準(zhǔn)備工作時(shí)首先要確認(rèn)登記試驗(yàn)的種類，研究擬申請(qǐng)登記國家的相關(guān)要求，對(duì)可以提交查詢數(shù)據(jù)的材料，不需要安排GLP試驗(yàn)，以避免不必要的資源浪費(fèi)；但對(duì)登記資料要求中明確規(guī)定有關(guān)數(shù)據(jù)和報(bào)告必須符合GLP要求的項(xiàng)目，則必須選擇由具有GLP資質(zhì)的實(shí)驗(yàn)室開展試驗(yàn)并出具報(bào)告。此時(shí)，選擇、確定合適的GLP實(shí)驗(yàn)室，就成為保障境外登記成功非常重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。首先，境外登記人員要對(duì)備選的實(shí)驗(yàn)室資源進(jìn)行分析，考察GLP實(shí)驗(yàn)室的資質(zhì)、能力以及GLP報(bào)告提交該國的通過情況等；其次，對(duì)GLP實(shí)驗(yàn)室的報(bào)價(jià)、時(shí)間安排和周期等進(jìn)行考察。此外，境外登記人員還要特別注意備選的GLP實(shí)驗(yàn)室是否有多個(gè)地址，試驗(yàn)在哪里進(jìn)行等問題。

需要特別指出的一個(gè)細(xì)節(jié)是，境外登記人員在選擇GLP實(shí)驗(yàn)室時(shí)還要考慮到擬登記產(chǎn)品的性質(zhì)及運(yùn)輸條件，例如烯草酮這類易降解產(chǎn)品對(duì)運(yùn)輸條件要求較高，優(yōu)先選擇本地的GLP實(shí)驗(yàn)室會(huì)減少GLP試驗(yàn)的風(fēng)險(xiǎn)。

2 明確委托方及受托 GLP實(shí)驗(yàn)室的責(zé)任與義務(wù)

根據(jù)經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織(OECD) GLP準(zhǔn)則[1]的定義，委托方是指委托、資助及提交非臨床健康和環(huán)境安全研究的實(shí)體和單位。試驗(yàn)委托方在GLP準(zhǔn)則實(shí)施中有很多的任務(wù)和責(zé)任，GLP項(xiàng)目不單是GLP實(shí)驗(yàn)室的責(zé)任，委托方參與整個(gè)GLP項(xiàng)目的過程，從確定項(xiàng)目內(nèi)容，提供相應(yīng)信息開始，到樣品確認(rèn)，方法篩選，雜質(zhì)確認(rèn)，簽署研究計(jì)劃，試驗(yàn)期間的溝通，審閱、審批最終報(bào)告等，委托方都不可或缺。

委托方在項(xiàng)目運(yùn)行的各個(gè)階段都需要明確其相應(yīng)的職責(zé)并發(fā)揮作用：⑴ 試驗(yàn)前階段：委托方需要對(duì)實(shí)驗(yàn)室的資源進(jìn)行分析，確認(rèn)要進(jìn)行的試驗(yàn)類型，登記地所要求的試驗(yàn)指南，提供合適的被試物信息。明確委托方和試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的各自職責(zé)。⑵ 計(jì)劃書階段：對(duì)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果、試驗(yàn)計(jì)劃、企標(biāo)情況和可能出現(xiàn)問題等進(jìn)行溝通。⑶ 試驗(yàn)階段：當(dāng)試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)問題或可疑數(shù)據(jù)等要及時(shí)溝通。例如動(dòng)物死亡的原因，劑量調(diào)整，異常數(shù)據(jù)等。⑷ 報(bào)告階段：要仔細(xì)審核草稿報(bào)告，對(duì)出現(xiàn)的問題及時(shí)聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行修改或者補(bǔ)充試驗(yàn)。當(dāng)提交最終報(bào)告遇到登記當(dāng)局的疑問時(shí)，要及時(shí)聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室協(xié)助解決。

在GLP項(xiàng)目的運(yùn)行中，委托方要注意把關(guān)好被試物的質(zhì)量，提供的相應(yīng)信息準(zhǔn)確無誤，并在GLP項(xiàng)目運(yùn)行期間和實(shí)驗(yàn)室保持良好溝通。與此同時(shí)，承擔(dān)項(xiàng)目的GLP實(shí)驗(yàn)室要嚴(yán)格按照程序要求進(jìn)行試驗(yàn)，確保試驗(yàn)的質(zhì)量，并及時(shí)匯報(bào)溝通。只有委托方和實(shí)驗(yàn)室雙方通力合作、溝通順暢，才能確保GLP項(xiàng)目的順利完成。

3 實(shí)施GLP項(xiàng)目的基本程序

進(jìn)行一個(gè)GLP項(xiàng)目的基本程序如下：⑴ 委托方和 GLP實(shí)驗(yàn)室簽署協(xié)議，確認(rèn)要進(jìn)行的項(xiàng)目及檢測(cè)內(nèi)容。⑵ 委托方提供被試物及相關(guān)信息。⑶ GLP實(shí)驗(yàn)室獲得樣品后展開預(yù)試驗(yàn)。⑷ GLP實(shí)驗(yàn)室撰寫項(xiàng)目試驗(yàn)計(jì)劃方案，質(zhì)量保證人員(QA)審核，委托方進(jìn)行確認(rèn)。⑸ GLP實(shí)驗(yàn)室根據(jù)審核批準(zhǔn)后的試驗(yàn)計(jì)劃實(shí)施GLP試驗(yàn)。⑹ GLP實(shí)驗(yàn)室根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果出具草稿報(bào)告，經(jīng)QA和委托方審核后出具最終簽字版報(bào)告。

4 跟進(jìn)GLP項(xiàng)目試驗(yàn)過程

根據(jù)OECD GLP準(zhǔn)則[1]的要求，試驗(yàn)項(xiàng)目負(fù)責(zé)人(SD)是對(duì)試驗(yàn)項(xiàng)目的實(shí)施和管理全面負(fù)責(zé)的人員，SD的首要職責(zé)是確保研究工作遵從GLP的要求。在GLP試驗(yàn)體系中，質(zhì)量保證是一個(gè)獨(dú)立于試驗(yàn)操作、旨在保證試驗(yàn)單位遵循GLP準(zhǔn)則的系統(tǒng)。QA會(huì)科學(xué)、客觀地對(duì)試驗(yàn)設(shè)施、GLP軟硬件運(yùn)轉(zhuǎn)狀態(tài)、研究計(jì)劃、試驗(yàn)操作、原始數(shù)據(jù)及試驗(yàn)報(bào)告等是否符合GLP規(guī)范進(jìn)行監(jiān)督檢查。

GLP實(shí)驗(yàn)室對(duì)其GLP項(xiàng)目的試驗(yàn)過程有嚴(yán)格的要求，所有操作都需要按照實(shí)驗(yàn)室的標(biāo)準(zhǔn)操作程序進(jìn)行，試驗(yàn)過程嚴(yán)格按照計(jì)劃書執(zhí)行。計(jì)劃書、試驗(yàn)關(guān)鍵過程及最終報(bào)告QA都會(huì)進(jìn)行審查以確保研究工作遵從GLP。境外登記人員在GLP項(xiàng)目實(shí)施過程要和SD保持良好的溝通以便GLP項(xiàng)目順利實(shí)施。

GLP項(xiàng)目的最終成果是GLP報(bào)告，境外登記人員最需要關(guān)注的就是GLP項(xiàng)目的報(bào)告。根據(jù)GLP準(zhǔn)則要求，每個(gè)試驗(yàn)項(xiàng)目均應(yīng)當(dāng)有一份最終試驗(yàn)報(bào)告。試驗(yàn)項(xiàng)目負(fù)責(zé)人應(yīng)在最終試驗(yàn)報(bào)告上簽署姓名和日期，對(duì)數(shù)據(jù)有效性、真實(shí)性和完整性負(fù)責(zé)，同時(shí)說明遵從本規(guī)范和試驗(yàn)計(jì)劃的程度，以及偏離對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。試驗(yàn)報(bào)告修訂應(yīng)明確說明修改或補(bǔ)充的理由，并由試驗(yàn)項(xiàng)目負(fù)責(zé)人簽署姓名和日期。此外，最終試驗(yàn)報(bào)告需要包括以下內(nèi)容：⑴ 試驗(yàn)項(xiàng)目基本情況；⑵ 委托方和試驗(yàn)單位的情況；⑶ 試驗(yàn)開始時(shí)間和完成時(shí)間；⑷ QA聲明，QA聲明中需要列出檢查類型、檢查內(nèi)容、檢查結(jié)果等信息；⑸ 儀器、試劑、材料和方法等信息；⑹ 項(xiàng)目中的偏離和修訂，需要說明偏離規(guī)范和試驗(yàn)計(jì)劃的程度，評(píng)價(jià)偏離的影響；⑺ 所做試驗(yàn)的描述和結(jié)果，需要報(bào)告所用試驗(yàn)計(jì)劃中要求的所有信息和數(shù)據(jù)。

境外登記人員在審閱GLP報(bào)告時(shí)，尤其要注意報(bào)告中的GLP遵循部分的說明，這部分內(nèi)容會(huì)說明該項(xiàng)目對(duì)遵循GLP準(zhǔn)則程度或情況。正常情況下，GLP遵循中除被試物的信息或有些基于SD經(jīng)驗(yàn)做出的譜圖解析或解釋之外，其他不遵循GLP準(zhǔn)則的地方要特別引起重視，可能會(huì)對(duì)登記造成不良影響。此外，審閱人也要特別注意報(bào)告中的偏離和修訂，判斷其是否影響整個(gè)報(bào)告質(zhì)量。

5 審閱GLP報(bào)告及重點(diǎn)注意事項(xiàng)

GLP項(xiàng)目需要完全按照簽署的研究計(jì)劃進(jìn)行實(shí)施，而GLP報(bào)告需要完全精確地反映研究的實(shí)施和研究數(shù)據(jù)。不管是試驗(yàn)方案還是報(bào)告草案都需要仔細(xì)的審查，一旦簽字確認(rèn)后，根據(jù)GLP的規(guī)范，任何的修改都需要以修訂或偏離的形式出現(xiàn)，并顯示在報(bào)告中。如果修訂或偏離過多，可能會(huì)降低登記審查機(jī)關(guān)對(duì)該GLP報(bào)告的好感，影響登記進(jìn)程。無論是GLP實(shí)驗(yàn)室，還是作為委托方代表的登記人員或咨詢顧問，都要在草案階段盡可能的去避免相應(yīng)的錯(cuò)誤和疏漏。

中國絕大多數(shù)企業(yè)的產(chǎn)品境外登記是相同產(chǎn)品登記，本文就目前市場(chǎng)相同產(chǎn)品登記中經(jīng)常使用的幾種類型的GLP項(xiàng)目，整理了一些需要重點(diǎn)注意的事項(xiàng)以供參考。

5.1 GLP項(xiàng)目中的信息審閱

根據(jù)不同國家的要求，檢測(cè)項(xiàng)目和導(dǎo)則會(huì)不同。在GLP項(xiàng)目的草稿計(jì)劃過程中，實(shí)驗(yàn)室和委托方一定要審查研究計(jì)劃中的檢測(cè)項(xiàng)目和對(duì)應(yīng)的試驗(yàn)方法和導(dǎo)則。提供準(zhǔn)確的樣品信息是委托方的責(zé)任，樣品信息雖然看起來簡單，但是出現(xiàn)的問題很多，要給予特別重視。樣品產(chǎn)品分析單(COA)中容易出現(xiàn)如下情況：⑴ COA中樣品名稱、物理特性等與GLP試驗(yàn)中使用的不一致；⑵ COA中質(zhì)檢報(bào)告日期晚于試驗(yàn)開始日期；⑶ COA中含量、批號(hào)與試驗(yàn)使用的不一致；⑷ 同一個(gè)批號(hào)供試品的COA不一樣，或者單位印章位置不同；⑸ 樣品COA信息與郵件、方案中不一致；⑹ 樣品COA保存條件前后不一致；⑺ 樣品COA中含量與GLP報(bào)告中差距較大；⑻ 樣品COA中只有公司印章，沒有責(zé)任人簽字；⑼ 需要注意，在巴西除五批次外的GLP報(bào)告都需要GLP的COA。

此外，在進(jìn)行GLP項(xiàng)目中，有時(shí)需要委托方提供其他與試驗(yàn)相關(guān)的數(shù)據(jù)，如分散性、持久起泡性和懸浮性等，需要提供稀釋倍數(shù)等。

5.2 五批次項(xiàng)目審閱

農(nóng)藥原藥的五批次分析是指針對(duì)有效成分、含量達(dá)到0.1%及以上的任何顯著雜質(zhì)，以及FAO (聯(lián)合國糧食及農(nóng)業(yè)組織)、WHO (世界衛(wèi)生組織)、歐盟或者是各國農(nóng)藥主管部門規(guī)定的相關(guān)雜質(zhì)定性和定量分析。五批次全分析鑒定出的組分總量在98%～102%，一般是由委托方提供五個(gè)批次的工業(yè)化原藥來進(jìn)行。

GLP的五批次報(bào)告是進(jìn)行國外市場(chǎng)開發(fā)及農(nóng)藥登記不可或缺的重要技術(shù)資料。目前絕大多數(shù)國家的登記都需要提供五批次報(bào)告，一些中高端市場(chǎng)更是日趨嚴(yán)格，越來越多的市場(chǎng)要求登記申請(qǐng)人提供 GLP五批次報(bào)告。五批次報(bào)告是解析原藥產(chǎn)品組分的核心登記資料，是判定原藥產(chǎn)品質(zhì)量是否合格的關(guān)鍵要素，也是農(nóng)藥藥效、毒理和環(huán)境等一系列試驗(yàn)的源頭。

GLP的五批次報(bào)告對(duì)判斷產(chǎn)品的質(zhì)量至關(guān)重要，該報(bào)告的結(jié)論直接反映了原藥的品質(zhì)。在幾乎所有的高端市場(chǎng)，原藥的五批次分析報(bào)告還作為評(píng)價(jià)原藥產(chǎn)品是否符合相同產(chǎn)品的判定依據(jù)，直接決定產(chǎn)品是否可以按照相同產(chǎn)品原則進(jìn)行登記——即是否可以以最低的登記成本取得登記。一份高質(zhì)量的五批次報(bào)告，幾乎可以在全球通用，可以說是市場(chǎng)開發(fā)的敲門磚。

對(duì)于GLP的五批次報(bào)告的具體要求，各國之間存在一定的差別。對(duì)于GLP的五批次報(bào)告的格式，除了符合OECD GLP導(dǎo)則中的規(guī)定內(nèi)容外，美國環(huán)境保護(hù)署(EPA)提出了一定的要求，如報(bào)告要增加是否有保密部分的聲明等[2]。按照美國EPA要求出具的GLP報(bào)告在其他國家提交基本沒有問題，一般不需要為各國準(zhǔn)備各自的報(bào)告模板。在五批次項(xiàng)目運(yùn)行過程中，實(shí)驗(yàn)室和委托方還要注意以下這些可能存在的問題。

5.2.1 各國對(duì)五批次的不同要求

一般而言，各國對(duì)五批次的定性、定量的要求基本一致，有效成分的定性一般2種方法就可以(一般接受核磁共振波譜和質(zhì)譜法定性)，定量分析方法驗(yàn)證也基本都認(rèn)可遵從歐盟的SANCO 3030[3]指南。但在細(xì)節(jié)要求上，還存在一定的差異，需要實(shí)驗(yàn)室和委托方給予重視。

歐盟會(huì)根據(jù)生產(chǎn)工藝的資料來評(píng)估原藥整個(gè)生產(chǎn)過程中用到的所有溶劑或溶劑催化劑的毒性。毒性評(píng)估可以直接從官網(wǎng)上下載 MSDS (物質(zhì)安全數(shù)據(jù)單)，并對(duì)毒性進(jìn)行比較。如果所用溶劑的毒性大于原藥主成分的毒性，就需要對(duì)溶劑進(jìn)行測(cè)定。在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)過程中，建議將定量限設(shè)為至多 0.01%或0.02%，以保證溶劑不會(huì)影響原藥的毒性。此外，溶劑測(cè)定的期限最好是距離生產(chǎn)日期近一些，這樣更容易反映出在生產(chǎn)過程中溶劑的真實(shí)殘留情況。

5.2.2 五批次GLP報(bào)告中的雜質(zhì)確認(rèn)及毒性評(píng)價(jià)

GLP的五批次分析一般包含2個(gè)階段，首先是實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的預(yù)掃描階段，這部分內(nèi)容不體現(xiàn)在GLP五批次報(bào)告中。在這個(gè)階段，實(shí)驗(yàn)室和委托方要確認(rèn)正式GLP試驗(yàn)中要進(jìn)行檢測(cè)的雜質(zhì)，包括毒性相關(guān)雜質(zhì)和大于0.1%的任何顯著雜質(zhì)。這是一個(gè)五批次報(bào)告是否能順利拿到等同登記的關(guān)鍵，需要委托方和實(shí)驗(yàn)室共同確認(rèn)。在確認(rèn)好雜質(zhì)種類及準(zhǔn)備好雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品后，實(shí)驗(yàn)室就進(jìn)入到GLP階段，對(duì)有效成分及雜質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析。

表1 各國對(duì)GLP五批次報(bào)告的特殊要求

因此，確認(rèn)及收集有關(guān)產(chǎn)品的雜質(zhì)信息非常重要，這對(duì)評(píng)估產(chǎn)品是否符合登記要求以及制定研究計(jì)劃等非常有幫助。除了FAO/WHO規(guī)格上會(huì)提到相關(guān)雜質(zhì)，在歐盟、澳大利亞和加拿大等官網(wǎng)上可以查詢及下載已登記產(chǎn)品的評(píng)價(jià)報(bào)告，會(huì)提及需要關(guān)注的雜質(zhì)。GLP的五批次報(bào)告必須滿足登記國的要求，要考慮到報(bào)告的使用范圍，確認(rèn)好相關(guān)雜質(zhì)。

對(duì)于顯著雜質(zhì)而言，其是否會(huì)有毒性，是否會(huì)影響登記是委托方非常關(guān)心的問題。對(duì)于不確認(rèn)的雜質(zhì)，可以根據(jù)預(yù)分析的結(jié)構(gòu)，先用定量構(gòu)效關(guān)系(QSAR)來評(píng)判一下該化合物的毒性。QSAR是指定量的構(gòu)效關(guān)系，是使用數(shù)學(xué)模型來描述分子結(jié)構(gòu)和分子的某種生物活性之間的關(guān)系。有很多免費(fèi)的QSAR軟件可以幫助來進(jìn)行毒性評(píng)估，如 QSAR toolbox、Toxtree、VEGA等。

5.2.3 農(nóng)藥的儲(chǔ)存條件

大部分農(nóng)藥在常溫下儲(chǔ)存，其雜質(zhì)及性質(zhì)長時(shí)間不會(huì)發(fā)生改變。但有些特殊農(nóng)藥要特別注意特殊儲(chǔ)存條件以免影響到五批次的結(jié)果。吸水性強(qiáng)的農(nóng)藥，如煙嘧磺隆，需要在干燥條件下儲(chǔ)存，實(shí)驗(yàn)室在稱量樣品時(shí)也需要注意空氣中水分的影響。有些農(nóng)藥在常溫下易分解，主成分含量還沒有顯著變化時(shí)，雜質(zhì)變化就已經(jīng)異常明顯，如烯草酮原藥，建議最好選擇國內(nèi)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分析，且以冷凍狀態(tài)進(jìn)行運(yùn)輸，避免運(yùn)輸途中雜質(zhì)發(fā)生變化。

5.2.4 水分、不溶物等其他組分

水分含量是五批次項(xiàng)目中必須測(cè)試的項(xiàng)目。有些時(shí)候，根據(jù)不同產(chǎn)品的生產(chǎn)工藝，需要做干燥失重、不溶物或硫酸鹽灰分等項(xiàng)目。在進(jìn)行這些項(xiàng)目時(shí)，要多思考其相關(guān)性。如干燥失重量遠(yuǎn)大于水分含量，需要解釋其他組分可能會(huì)是什么。五批次報(bào)告中的不溶物如果含量超過0.1%，在韓國登記時(shí)會(huì)被要求對(duì)這些不溶物進(jìn)行定性。

此外，在GLP五批次分析中，也要格外注意樣品的COA和五批次檢測(cè)項(xiàng)的符合程度，雖然可能由于測(cè)量方法的不同造成 COA中的含量和五批次結(jié)果中不一致，但是如果相差太大，將難以解釋。

5.2.5 農(nóng)藥的異構(gòu)體現(xiàn)象

農(nóng)藥的異構(gòu)體現(xiàn)象很普遍，其異構(gòu)體分幾何異構(gòu)體和光學(xué)異構(gòu)體。有的異構(gòu)體之間，生物活性有明顯甚至很大的差別，有的則差別不明顯。在GLP五批次報(bào)告中，實(shí)驗(yàn)室首先需要仔細(xì)查詢?cè)撧r(nóng)藥的有效組分究竟是其中的單一組分還是混合體。一般而言，如果有效成分是混合體，可以不用分開檢測(cè)，但是各國對(duì)異構(gòu)體拆分要求的嚴(yán)格程度不同，需要根據(jù)登記市場(chǎng)進(jìn)行確認(rèn)。此外，雜質(zhì)的光學(xué)異構(gòu)體一般不再要求拆分檢測(cè)。

5.2.6 質(zhì)量平衡及產(chǎn)品規(guī)格

五批次GLP全分析分析報(bào)告中鑒定出的組分總量應(yīng)該為 98%～102%，當(dāng)測(cè)得的各種組分含量的總和不足98%時(shí)，應(yīng)采用其他可能的方法進(jìn)一步鑒定分析；當(dāng)各種組分含量的總和超過102%時(shí)，應(yīng)分析原因并做出合理解釋。絕大部分國家在制定登記產(chǎn)品的規(guī)格時(shí)，是根據(jù)五批次GLP報(bào)告中的平均數(shù)據(jù)加減三倍標(biāo)準(zhǔn)偏差進(jìn)行計(jì)算的，所以在預(yù)分析階段，就要關(guān)注其結(jié)果的可能分布情況。

5.3 理化項(xiàng)目審閱

任何化學(xué)物質(zhì)都具有自己獨(dú)特的物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)。物理性質(zhì)是指不經(jīng)過化學(xué)變化就能體現(xiàn)出來的性質(zhì)，如外觀、熔點(diǎn)和密度等；化學(xué)性質(zhì)是物質(zhì)經(jīng)過化學(xué)變化才能體現(xiàn)出來的性質(zhì)，如閃點(diǎn)、燃點(diǎn)、可燃性和爆炸性等。物理性質(zhì)和化學(xué)性質(zhì)簡稱“理化性質(zhì)”或“物化性質(zhì)”。

和五批次GLP報(bào)告不同，各國和地區(qū)對(duì)理化性質(zhì)報(bào)告的要求差別很大，這就要求委托方在進(jìn)行理化試驗(yàn)項(xiàng)目的安排前，必須先設(shè)計(jì)好要登記的國家及地區(qū)。此外，在審閱理化項(xiàng)目中，還需要關(guān)注如下問題。

5.3.1 理化性質(zhì)的導(dǎo)則

理化性質(zhì)有很多國際通用的導(dǎo)則文件，普遍使用的有經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織(OECD)、歐盟(EU)、美國環(huán)境保護(hù)署(EPA)及國際農(nóng)藥分析協(xié)作委員會(huì)(CIPAC)方法，它們之間既有聯(lián)系也有不同。GLP實(shí)驗(yàn)室在進(jìn)行項(xiàng)目前需要仔細(xì)核對(duì)。

很多指南對(duì)某個(gè)理化性質(zhì)給出了多種測(cè)試方法，一般情況下可酌情選擇其中一種。比如密度的測(cè)量有8種方法，蒸氣壓的測(cè)定有6種方法等。在使用不同的分析方法時(shí)，要注意指南對(duì)應(yīng)的檢測(cè)范圍是否合適。

表2 理化性質(zhì)的國際指南文件

5.3.2 和文獻(xiàn)值不一致的情況

在實(shí)施理化性質(zhì)測(cè)定中，實(shí)驗(yàn)室和委托方有時(shí)會(huì)發(fā)現(xiàn)，GLP報(bào)告中的數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)報(bào)道值相差很大，這一方面可能是由于不同實(shí)驗(yàn)室使用了不同的分析方法；另外一方面，不同實(shí)驗(yàn)室之間的操作也會(huì)引起一定的差異。尤其是數(shù)值較小的檢測(cè)項(xiàng)目，如蒸氣壓，不同的分析方法測(cè)定的結(jié)果差異很大。在遇見結(jié)果差異很大的情況下，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該首先進(jìn)行自查，看是否屬于自身操作引起的誤差，并合理分析偏差存在的原因。

5.4 毒理項(xiàng)目審閱

毒理試驗(yàn)項(xiàng)目可以簡單分為生態(tài)毒理和哺乳動(dòng)物毒理。生態(tài)毒理試驗(yàn)是研究各種有毒有害因素，尤其是化學(xué)環(huán)境污染物對(duì)生態(tài)環(huán)境影響及其對(duì)人類之外其他生物種類包括動(dòng)物、植物和微生物等的損害作用。哺乳動(dòng)物毒理試驗(yàn)是研究外來化合物對(duì)生物體的損害作用及其機(jī)理。哺乳動(dòng)物毒理試驗(yàn)主要是應(yīng)用動(dòng)物來進(jìn)行，所觀察到的毒性反應(yīng)與人體有很多相似之處，但有些方面也有很大差異。因此，一定要進(jìn)行綜合分析，不能簡單外推于人。

不同國家和地區(qū)對(duì)毒理試驗(yàn)的要求差別很大。目前只有巴西對(duì)生態(tài)毒理項(xiàng)目有要求，墨西哥和泰國等國家要求急性毒理試驗(yàn)，巴西、阿根廷和中國臺(tái)灣除了急性毒性試驗(yàn)外，還要求致突變?cè)囼?yàn)。因此，委托方必須要確認(rèn)好要登記地區(qū)的要求。此外，毒理試驗(yàn)中還應(yīng)該注意以下問題。

5.4.1 試驗(yàn)導(dǎo)則

絕大多數(shù)國家和地區(qū)都認(rèn)可按照OECD的試驗(yàn)導(dǎo)則進(jìn)行的GLP試驗(yàn)，但對(duì)于同一個(gè)試驗(yàn)，OECD也有多種指南文件，比如急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)方法，就有 OECD TG420-固定劑量法(Fixed dose procedure，F(xiàn)DP)、OECD TG423-分級(jí)試驗(yàn)法(Acute toxic class method，ATC)和 OECD TG425-序貫法或上下移位法(Up-and-down procedure，UDP)。其中OECD TG423為大多數(shù)國家接受的方法。GLP實(shí)驗(yàn)室和委托方都要清楚這些要求及區(qū)別所在。

此外，由于毒理試驗(yàn)導(dǎo)則的更新較為頻繁，試驗(yàn)室需要隨時(shí)關(guān)注OECD網(wǎng)站上的更新，了解最新要求，避免使用已廢止的導(dǎo)則進(jìn)行GLP試驗(yàn)。

5.4.2 體外替代試驗(yàn)的新要求

因動(dòng)物福利及動(dòng)物試驗(yàn)方法的不確定性等原因，現(xiàn)在各國正推進(jìn)毒性測(cè)試替代方法的進(jìn)程。即使用沒有知覺的試驗(yàn)材料代替活體動(dòng)物，或使用低等動(dòng)物代替高等動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)。目前歐盟和巴西已經(jīng)做出了相應(yīng)的要求，因此實(shí)驗(yàn)室和委托方應(yīng)關(guān)注各國對(duì)體外替代試驗(yàn)的要求，使報(bào)告符合登記注冊(cè)的要求。

5.4.3 毒性等級(jí)

在進(jìn)行毒理試驗(yàn)時(shí)，有時(shí)候需要用統(tǒng)計(jì)軟件計(jì)算出毒性大小，通常用半致死中量(LD50)或致死中濃度(LC50)表示。毒性等級(jí)決定該農(nóng)藥產(chǎn)品是否能順利登記。當(dāng)毒性數(shù)據(jù)落在兩個(gè)等級(jí)之間的數(shù)值時(shí)，要特別注意是否是統(tǒng)計(jì)方法引起的差異性。

5.4.4 文獻(xiàn)數(shù)據(jù)

一般情況下，農(nóng)藥電子手冊(cè)是境外登記人員經(jīng)常查詢的資料之一，需要注意的是農(nóng)藥電子手冊(cè)上的數(shù)據(jù)存在一定的誤差。當(dāng)審閱草稿報(bào)告時(shí)，發(fā)現(xiàn)農(nóng)藥產(chǎn)品和文獻(xiàn)數(shù)據(jù)不一致的情況時(shí)，要查詢?cè)摦a(chǎn)品在各國的登記材料加以佐證。

5.4.5 病理學(xué)報(bào)告

毒理病理學(xué)報(bào)告是一般毒理試驗(yàn)、嚙齒類致癌性試驗(yàn)以及生殖發(fā)育毒理試驗(yàn)等GLP試驗(yàn)需要的。毒理病理學(xué)報(bào)告要求較高，專題病理學(xué)家要具有病理學(xué)專業(yè)技能，并在毒理病理報(bào)告中簽字。毒理病理學(xué)報(bào)告中應(yīng)該有試驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)及特殊切片或技術(shù)的詳細(xì)描述，并且有清晰的照片、圖片幫助登記機(jī)構(gòu)對(duì)結(jié)果進(jìn)行確認(rèn)。此外，報(bào)告中還需要給出給藥相關(guān)的生物學(xué)和毒理學(xué)關(guān)系等的相關(guān)科學(xué)文獻(xiàn)或試驗(yàn)背景數(shù)據(jù)等。

6 結(jié) 語

我國是農(nóng)藥生產(chǎn)和出口大國，要開拓海外市場(chǎng)，優(yōu)秀的GLP報(bào)告是不可或缺的工具。GLP實(shí)驗(yàn)室和企業(yè)委托方是保證其質(zhì)量的兩大支柱。

一份優(yōu)秀的 GLP報(bào)告要有國際通用的導(dǎo)則(一般是OECD Guidelines)，以及國際通用的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，要完全按照導(dǎo)則中要求的試驗(yàn)條件、物種、年齡、性別和環(huán)境等條件等進(jìn)行試驗(yàn)。在GLP報(bào)告中需要描述試驗(yàn)的詳細(xì)步驟、給藥方法、觀察方法、毒性反應(yīng)癥狀、體重變化、死亡時(shí)間、LD50和LD5及其可信限的計(jì)算方法和結(jié)果討論等。試驗(yàn)報(bào)告中要提供各種清晰可辨代表性譜圖或圖片，要具有科學(xué)性的令人信服的解釋。

隨著我國企業(yè)對(duì)農(nóng)藥海外登記的重視，及國內(nèi)GLP實(shí)驗(yàn)室的興起，相信中國農(nóng)藥企業(yè)能夠獲得在國際市場(chǎng)更多的話語權(quán)，實(shí)現(xiàn)由農(nóng)藥大國向農(nóng)藥強(qiáng)國的轉(zhuǎn)變。