一例支原體和大腸桿菌混合感染奶牛乳房炎的診斷

劉琴，張泉鵬，周亞平，孟興祥，成玉梅，施開(kāi)平，李國(guó)平，彭雅婷

（1.昆明市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，昆明 650401；2.云南省嵩明縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，嵩明 651700）

支原體舊稱霉形體，是一類沒(méi)有細(xì)胞壁、高度多形性、能通過(guò)濾菌器、可用人工培養(yǎng)基培養(yǎng)增殖的最小原核細(xì)胞型微生物，大小為0.1～0.3μm。支原體廣泛存在于人和動(dòng)物體內(nèi)，能夠引起奶牛肺炎、關(guān)節(jié)炎、乳房炎、生殖器官炎癥等，1961年首次在美國(guó)奶牛乳房炎中分離到支原體，在我國(guó)1983年首次報(bào)道了奶牛乳房炎乳中分離到支原體。支原體感染的乳房炎病程長(zhǎng)，治療費(fèi)用高。大腸桿菌乳房炎在臨床上很常見(jiàn)，主要是由于環(huán)境衛(wèi)生差、消毒不徹底以及擠奶操作不當(dāng)所造成。2019年5月，昆明市某奶牛場(chǎng)發(fā)生了一起乳房炎病例，共3頭發(fā)病，臨床表現(xiàn)為乳房腫硬、乳區(qū)發(fā)熱，乳汁黃色呈豆腐渣或絮狀。經(jīng)細(xì)菌分離鑒定和奶牛乳房炎四重PCR診斷為大腸桿菌和支原體混合感染。現(xiàn)將其報(bào)告如下。

1 材料

1.1 病料

用無(wú)菌注射器抽取病牛乳房中乳汁，共3頭牛的3份患乳區(qū)混合樣品。

1.2 儀器

全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀（VITEK 2 COMPACT，法國(guó)梅里埃）、冷凍離心機(jī)（貝克曼）、熒光定量PCR儀（STEP ONE PLUS美國(guó)ABI，無(wú)Cy5熒光通道），生化培養(yǎng)箱（上海一恒）。

1.3 試劑

普通瓊脂培養(yǎng)基、血平皿、革蘭氏陰性生化鑒定卡（法國(guó)梅里埃）、革蘭氏陰性細(xì)菌藥敏卡片（法國(guó)梅里埃），4聯(lián)牛乳房炎病原菌核酸檢測(cè)試劑盒（含DNA提取試劑，深圳易瑞），革蘭氏染色液（環(huán)凱生物）。

2 方法

2.1 細(xì)菌分離和革蘭氏染色鑒定

2.1.1 細(xì)菌培養(yǎng)

滅菌劃線法將乳汁分別接種于普通瓊脂平皿和血平皿上，37℃培養(yǎng)24～48h。……