血漿Ficolin-3水平與肺炎支原體感染患兒疾病分期及病情程度的相關性分析

曹燕玲， 高嬌嬌， 李文斌， 李春梅， 劉振奎

(河北北方學院附屬第一醫院兒內科， 河北 張家口 075000)

肺炎支原體(Mycoplasma pneumoniae，MP)感染是臨床上小兒呼吸系統常見的感染疾病，是導致患兒呼吸系統疾病及肺炎支原體肺炎(mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP)的常見病原體，全世界范圍內肺炎支原體感染率高達9.6%～66.7%[1，2]。目前肺炎支原體感染后的致病機制尚未有統一定論，多認為肺炎支原體肺炎與患兒呼吸道上皮吸附作用、肺炎支原體感染后炎癥反應損傷和機體免疫功能紊亂有關[3]。纖維凝膠蛋白-3(Fibrous gel protein-3，Ficolin-3)又稱為糖類模式識別分子，主要分布在血漿中，受FCN3基因編碼調控，通過激活凝集素途徑，參與機體免疫反應[4]。最近有研究表明，Ficolin-3在麻風分枝桿菌引起的慢性炎性疾病患者血漿中高表達，可能與麻風病有關[5]。Ficolin-3在肺炎支原體感染患兒疾病分期及病情程度的相關性未見相關報道，因此本研究擬通過測定健康患兒和肺炎支原體肺炎患兒血漿中Ficolin-3表達水平和血清中IL-8、IL-10、TNF-α表達水平，分析Ficolin-3表達水平與肺炎支原體肺炎患兒疾病分期、病情程度、血清中IL-8、IL-10、TNF-α、IgM、IgA表達水平的相關性。

1 資料與方法

1.1臨床資料:選取本院2018年6月至2019年6月兒內科收治的MP感染的患兒78例，年齡2.1～36.3月，平均年齡(18.27±2.96)月，其中男性患兒45例，女性患兒33例；急性期患兒(20h～8d)38例，恢復期患兒(2～8周)40例；嚴重型患兒56例，輕微型患兒22例。另選取同期兒內科門診健康體檢兒童88例作為對照組，近期無感冒、感染、發熱、咳嗽，年齡2.4～36月，平均年齡(19.05±3.17)月，男性52例，女性36例。兩組兒童家長或法定監護人均對本研究知情，并簽訂臨床研究知情同意書，本研究經本院倫理委員會批準通過，符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》。兩組兒童年齡、性別構成相比差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2診斷標準[6]:肺炎支原體肺炎患兒符合下列1～3標準的任意兩項或符合4～5任意一項則可確診為重癥MMP患兒。①患者使用大環內酯類抗生素治療1周后，患兒持續發熱(≥38.5℃)或胸片無改善；②患兒氣促或心動過速、發紺、三凹征陽性；③胸片顯示肺段以上或1個肺葉大片陰影，累及單葉或多葉病變；④合并嚴重低氧血癥或中樞神經系統感染或心力衰竭、消化道出血等肺外并發癥；⑤并發肺膿腫、肺不脹、壞死性肺炎、胸腔積液等肺內并發癥。

1.3納入和排除標準:納入標準：①符合肺炎支原體肺炎的診斷標準[6]，急性期：病程≤8d，恢復期：經抗生素治療2～8周后，影像學癥狀消失或改善、臨床癥狀基本消失；②抽取患兒靜脈血前未曾使用糖皮質激素或免疫調節劑。排除標準：①患兒合并其它病原體感染者；②白細胞計數(WBC)明顯增高懷疑合并其它感染；③肺結核、支氣管哮喘及其它感染性疾病患兒；④免疫功能缺陷或免疫功能紊亂患兒；⑤溶血性貧血肺外并發患兒。

1.4試劑和儀器:Ficolin-3(批號：orb-EHJ131782)、IL-8(批號：XWCEK1243)、IL-10(批號：XWCEK1202)、TNF-α(批號：KE1066)ELISA試劑盒均購自廈門慧嘉生物科技有限公司；TGL16E高速離心機購自湖南邁達儀器有限公司；Multiskan FC酶標儀購自美國賽默飛世爾公司。AU5800系列全自動生化分析儀及配套試劑購自美國貝克曼庫爾特有限公司。

1.5實驗方法:急性期患兒入院當日或次日取未使用抗生素前、恢復期患兒清晨采集外周靜脈血各8mL，對照組兒童入院當日取8mL靜脈血。其中4mL抗凝處理，5000r/min離心20min，(溫度25℃，離心半徑10cm)，取血漿標本；另4mL不做抗凝處理，5000r/min離心20min，(溫度25℃，離心半徑10cm)，取血清標本，置于-80℃冰箱中保存。使用酶聯免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)測定血漿中Ficolin-3表達水平，血清中IL-8、IL-10、TNF-α表達水平，操作步驟嚴格按照ELISA試劑盒說明書來執行，采用免疫散射比濁法測定血清免疫球蛋白IgM、IgA表達水平。

2 結 果

2.1受試兒童血漿中Ficolin-3表達水平和血清中IL-8、IL-10、TNF-α、IgM、IgA表達水平:與對照組相比，MMP患兒組血漿中Ficolin-3表達水平和血清中IL-8、TNF-α、IgM表達水平顯著升高(P<0.05)，血清中IL-10、IgA表達水平顯著降低(P<0.05),見表1。

表1 受試兒童血漿中Ficolin-3表達水平和血清中IL-8 IL-10 TNF-α IgM IgA表達水平比較

2.2不同疾病分期患兒血漿中Ficolin-3表達水平和血清中IL-8、IL-10、TNF-α、IgM、IgA表達水平:與恢復期組患兒相比，急性期組患兒血漿中Ficolin-3表達水平和血清中IL-8、TNF-α、IgM表達水平顯著升高(P<0.05)，血清中IL-10、IgA表達水平顯著降低(P<0.05),見表2。

表2 不同分期患兒血漿中Ficolin-3表達水平和血清中IL-8 IL-10 TNF-α IgM IgA表達水平比較

2.3不同病情程度患兒血漿中Ficolin-3表達水平血清中IL-8、IL-10、TNF-α、IgM、IgA表達水平:與輕微型組相比，嚴重型組患兒血漿中Ficolin-3表達水平和血清中IL-8、TNF-α、IgM表達水平顯著升高(P<0.05)，血清中IL-10、IgA表達水平顯著降低(P<0.05),見表3。

表3 不同病情程度患兒血漿中Ficolin-3表達水平和血清中IL-8 IL-10 TNF-α IgM IgA表達水平比較

2.4Ficolin-3表達水平與患兒疾病分期及病情程度、IL-8、IL-10、TNF-α、IgM、IgA表達水平的相關性:患兒血漿中Ficolin-3表達水平與患兒疾病分期、病情嚴重程度、血清中IL-8、TNF-α、IgM表達水平呈正相關(P均<0.05)，與血清中IL-10、IgA表達水平呈負相關P<0.05),見表4。

表4 Ficolin-3表達水平與患兒疾病分期及病情程度 IL-8 IL-10 TNF-α IgM IgA表達水平的相關性

3 討 論

肺炎支原體肺炎早期臨床癥狀不明顯，外加兒童免疫系統發育不全、組織器官功能不成熟，導致患兒肺炎支原體感染后較易引發肺內和肺外并發癥[7]。隨著臨床上對肺炎支原體更深入的研究和認識，發現機體免疫在肺炎支原體肺炎發生發展中發揮重要作用，肺炎支原體感染后在機體經歷免疫逃逸、調節、抑制、積蓄等病理過程，細胞因子與自身免疫抗體相互制約和誘導，從而參與疾病進展[8]。因此了解肺炎支原體感染患兒炎癥因子、免疫因子動態變化及調節機制是肺炎支原體肺炎臨床治療的關鍵。

Ficolin-3可維持機體內環境穩定和保持免疫反應，在原發性高血壓患者血清中Ficolin-3表達水平升高，與高血壓病程、血清補體呈正相關，提示Ficolin-3參與原發性高血壓發生發展進程[9]。Troldborg等[10]研究發現Ficolin-3在系統性紅斑狼瘡患者血漿中表達水平顯著升高，與抗C1q抗體、抗dsDNA抗體、SLEDAI評分相關。本研究發現，與對照組相比，MMP患兒組血漿中Ficolin-3表達水平顯著升高，說明Ficolin-3與肺炎支原體肺炎有關，可能參與MMP患兒免疫進程，導致Ficolin-3水平上調。進一步研究發現，與恢復期組相比，急性期組患兒血漿中Ficolin-3表達水平顯著升高；與輕微型組相比，嚴重型組患兒血漿中Ficolin-3表達水平顯著升高，提示Ficolin-3表達水平與肺炎支原體肺炎病程相關，參與支原體肺炎發生發展。

炎癥因子在肺炎支原體感染致病進程中具有關鍵作用，TNF-α可調節機體免疫，但TNF-α持續性增高或分泌可加重或誘導炎癥反應，有研究表明，TNF-α在支原體肺炎患兒血清中持續性高表達[11]。IL-8是單核細胞分泌的趨化性炎性因子，誘導炎癥細胞分泌活性物質，造成機體損傷，有研究表明，IL-8在支原體肺炎患兒血清中高表達，且重度組高于輕度組[12]。IL-10作為抗炎因子，可以抑制單核巨噬細胞激活和TNF-α分泌，從而抑制炎癥反應[13]。本研究表明，與對照組相比，MMP患兒組血清中IL-8、TNF-α表達水平顯著升高，IL-10表達水平顯著降低，提示支原體肺炎患兒存在持續性炎癥損傷，炎癥反應加劇。進一步探究發現，與恢復期組相比，急性期組患兒血清中IL-8、TNF-α表達水平顯著升高，IL-10表達水平顯著降低；與輕微型組相比，嚴重型組患兒血清中IL-8、TNF-α表達水平顯著升高，IL-10表達水平顯著降低，提示炎癥反應伴隨支原體肺炎發生發展進程，與炎癥程度呈正相關。機體免疫反應在支原體肺炎發生發展進程中同樣發揮重要作用，血清免疫球蛋白IgM是體液免疫最早出現的抗體，在支原體肺炎患兒早期表達水平可達到峰值[14]。血清免疫球蛋白IgA發揮免疫功能，約占總免疫球蛋白的15%左右，在支原體肺炎患兒血清中表達水平較低[15]。本研究發現，與對照組相比，MMP患兒組血清中IgM表達水平顯著升高，IgA表達水平顯著降低，提示支原體肺炎患兒免疫功能下降。進一步分析發現，與恢復期組相比，急性期組患兒血清中IgM表達水平顯著升高，IgA表達水平顯著降低；與輕微型組相比，嚴重型組患兒血清中IgM表達水平顯著升高，IgA表達水平顯著降低，提示隨著病情嚴重程度進程，免疫功能也隨之下降。相關性分析表明，患兒血漿中Ficolin-3表達水平與患兒疾病分期、病情嚴重程度、血清中IL-8、TNF-α、IgM表達水平呈正相關，與血清中IL-10、IgA表達水平呈負相關，提示Ficolin-3可能通過影響炎癥因子和免疫因子表達參與支原體肺炎患兒疾病進程。綜上所述，Ficolin-3在支原體肺炎患者血漿中表達水平顯著升高，與患兒疾病分期、病情程度、血清IL-8、TNF-α、IgM表達水平呈正相關，與血清IL-10、IgA表達水平呈負相關，可能成為評價肺炎支原體肺炎(MMP)患兒病情的臨床指標。