淺析系列肝素藥物質量分析及控制研究

田玉曄

摘?要：肝素是臨床醫學較為常用的一種抗凝劑，近年來，臨床醫學和藥理學兩大學科的科研成果不斷顯現，使肝素的應用范圍也隨之擴大，尤其在抗炎殺菌、調節免疫、抗動脈硬化、抗腫瘤等藥理學應用領域取得了突破性進展。但是，由于肝素提取自天然動物組織，質量屬性難于控制，無形當中增加了患者的用藥風險。因此，本文將以提高肝素藥物質量的安全可靠性為主要目的，圍繞系列肝素藥物的質量分析與控制方法展開論述。

關鍵詞：系列肝素藥物;質量分析;控制方法

本文利用聚丙烯酰胺凝膠電泳法對肝素分子量進行檢測，利用離子色譜法對肝素中氨基糖的組成結構進行分析，對肝素中的硫酸根進行定量定性分析。通過采用現代儀器分析法，能夠深入探究肝素中各個成分的結構特點，進而對肝素藥物的質量進行有效控制，以降低患者的用藥風險，為肝素藥物在臨床醫學與藥理學的實際應用提供確鑿的數據支持。

1 利用聚丙烯酰胺凝膠電泳分析肝素分子量

1.1 質量分析基本原理

聚丙烯酰膠凝膠電泳檢測法將聚丙烯酰胺凝膠作為中間介質，該介質主要由甲叉雙丙烯酰胺以及丙烯酰胺聚合而成，較為常見的兩種聚合方法為化學聚合與光聚合。化學聚合的基本反應原理是：S2O82-+e-→SO42-+SO4-，如果R·表示自由基，M表示丙烯酰胺單位，聚合過程反應式可以表示為：R·+M→RM·，RM·+M→RMM·，RMM·+M→RMMM·?ect·當CH2=CH-乙烯基依次聚合，就構成了丙烯酰胺長鏈，進而為甲叉鍵交聯創造了有利條件，然后在甲叉鍵交聯作用下形成一個三維網狀結構。而用于光聚合的催化劑是核黃素，該物質在光合作用下，本身產生自由基，并在兩到三小時之內就可以完成化學聚合反應。

1.2 實驗階段

此次分析肝素分子量實驗采用的標準樣品是檢定合格的肝素鈉，實驗樣品來自于國內某制藥企業，而酶部分降解低分子量肝素與肝素8糖樣品均產自美國Sigma-Aldrich公司。實驗采用的儀器是電泳儀裝置、脫色搖床，實驗主要試劑是硼酸、甘氨酸、鹽酸等。

實驗方法是：首先將6ml分離膠膠液與36μLAPS與2μLTEMED混合，當膠液混合均勻后靜置30分鐘，然后將其倒出水封，再取2mL濃縮膠，加梳子，同樣靜置30分鐘，取出梳子后，加入緩沖液，接下來取一個肝素鈉標準品與兩個樣品各5μL，與同樣容積的50%的蔗糖溶液混合在一起，靜置30分鐘，當接通電源后，將電壓調整為200V。電泳實驗結束后，將凝膠片取出，并對其進行染色處理，靜置30分鐘后，在經過脫色搖床脫后，對檢驗結果進行觀察[1]。

1.3 結果分析

肝素鈉標準品與樣品PAGE圖譜如下圖所示。其中數字1，2，3，4代表樣品，5，6代表肝素鈉標準品，7代表酶部分降解低分子量肝素，8代表肝素8糖。

從實驗圖譜中可以清晰直觀的發現，肝素鈉標準品與樣品并沒有顯著區別，分子量均達到20糖以上，這說明肝素質量較純，通過PAGE圖譜法，能夠快速的分析出肝素中的分子量分布情況，并且具有檢測靈敏度高、操作方便快捷、數據信息準確率高等特點，是目前肝素分子量檢測實驗當中較為常用的一種方法。

2 利用離子色譜法分析肝素氨基糖結構組成

2.1 分析檢測原理

離子色譜法是近年來出現的分析檢測糖類物質的一種新技術，檢測原理是：利用單糖與寡糖在PH值大于12的情況下，解離離子型物質的陰離子，這種檢測方法能夠明顯區分開氨基葡萄糖以及氨基半乳糖，因此，可以將其作為一種特異性的氨基糖純度分析檢測法[2]。

2.2 實驗方法

該實驗分兩次取測試樣品，以降低檢測結果的誤差值，檢測色譜條件是高壓梯度的離子色譜，安培脈沖檢測品流動相以及15mMNaOH溶液。色譜柱溫度為25℃，流速是1mL/min，樣品進入量為20μL，采集時間為20分鐘。

2.3 實驗結果分析

對氨基葡萄糖標準品與氨基半乳糖標準品單獨進樣檢測分析時，氨基葡萄糖的保留時間約為8.5min，而氨基半乳糖的保留時間為7.35min。在測試肝素鈉樣品時，樣品與標準品當中均不含有氨基半乳糖，這就可以證實，實際摻入的物質是肝素類似物。此外，在測試標準品與樣品時均出現了約9.98min的未知物，經過分析可以得出結論，這種未知物極有可能是TFA降解時的產出物。可見，離子色譜法分析肝素氨基糖物質時，重現性好、靈敏度高，該檢測法對Elson-Morgan法給予補充，使肝素藥物的服用安全性更高。

3 利用離子色譜法分析檢測肝素硫酸根

3.1 分析檢測原理

離子色譜法作為一種高效的液相色譜法，具有使用樣品少、檢測速度快、數據精準度高、操作便捷等優勢，因此，可以用該方法定量定性分析肝素鈉中的陰離子硫酸根，比較常用的分析方法包括比色法以及滴定法。

3.2 實驗結果分析

通過實驗可以得出結論，離子色譜法具有較好的重現性，其中F-、Cl-、Br-、NO3-、SO4-、PO43-等負離子保留的時間分別為4.04min、5.83min、8.58min、9.73min、13.44min、15.42min。該實驗的水解樣品與未水解的樣品均出現了彌5.82minCl-峰，由此可以判斷該物質來自于NaCl，這就說明在制備肝素鈉樣品時脫鹽不徹底，但是Cl-的含量并未超標，滿足≤0.52%的標準范圍，此外，在水解樣品中存在約7.92min峰的三氟乙酸離子。利用離子色譜法對肝素鈉硫酸根進行檢測分析，具有安全性高、重現性好等特點，而且具有較高的分辨率以及靈敏度，進而能夠得到精準的硫酸根含量數值。

4 結語

通過對肝素藥物中分子量、氨基糖以及硫酸根的測定與分析，能夠準確了解和掌握組成肝素藥物化學成分的含量以及結構屬性，進而對肝素藥物質量進行有效控制，讓更多的患者吃上放心藥，為患者的身體健康保駕護航。

參考文獻：

[1]劉利.系列肝素藥物質量分析及控制研究[D].江蘇：蘇州大學，2014.

[2]顏明明，劉利月，戴婷婷，等.低分子肝素類藥物的臨床應用[J].中國醫藥指南，2018，16（18）：39-40.