康復新液對乙醇致大鼠急性胃潰瘍的保護作用

陶柱萍 郭銳 王雪雪 厲穎 劉衛紅 高鵬飛

摘要?[目的]探討康復新液對無水乙醇致大鼠急性胃潰瘍的保護作用及機制。[方法]采用無水乙醇灌胃SD大鼠，制備急性胃潰瘍模型，將大鼠按體質量隨機分為空白組、模型組（無水乙醇10?g/kg）和康復新液給藥組（無水乙醇10?g/kg+康復新液6?mL/kg）。給藥后，觀察各組大鼠的胃黏膜形態學變化和潰瘍指數，測定大鼠胃組織中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）、還原型谷胱甘肽（GSH）的含量。[結果]與空白組相比，模型組胃組織損傷嚴重，潰瘍指數、MDA水平明顯升高;SOD、GSH水平顯著降低（P<0.01）。與模型組相比，康復新液給藥組胃組織損傷程度減輕，潰瘍指數和MDA水平降低（P<0.05），SOD、GSH水平升高（P<0.01）。[結論]康復新液對無水乙醇引起的急性胃潰瘍有一定的保護作用，其機制可能與減少氧自由基生成、促進氧自由基清除和抑制脂質過氧化、增加氧化應激有關。

關鍵詞?康復新液;無水乙醇;急性胃潰瘍;抗氧化;保護作用

中圖分類號?R285.5文獻標識碼?A

文章編號?0517-6611（2020）07-0190-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.07.054

Protective?Effect?of?Kangfuxin?Solution?on?Rats?with?Ethanolinduced?Acute?Gastric?Ulcer

TAO?Zhuping1，GUO?Rui2，WANG?Xuexue1?et?al?（1.School?of?Pharmacy，Dali?University，Dali，Yunnan?671000;2.Chongqing?Chemical?Industry?Vocational?College，Chongqing?400020）

Abstract?[Objective]?The?research?aimed?to?investigate?the?protective?effects?of?Kangfuxin?solution?on?ethanolinduced?acute?gastric?ulcer?in?rats.[Method]The?models?of?acute?gastric?ulcer?were?established?using?absolute?ethanol.The?rats?were?randomly?divided?into?control?group，model?group?（absolute?ethanol?10?g/kg），Kangfuxin?solution?group?（absolute?ethanol?10?g/kg+Kangfuxin?6?mL/kg）?according?to?its?body?weight.The?morphological?changes?of?gastric?mucosa?and?ulcer?index?were?observed，the?activity?of?superoxide?dismutase?（SOD）?and?the?contents?of?malondialdehyde?（MDA）?and?glutathione?（GSH）?in?gastric?tissue?of?rats?were?checked.[Result]Compared?with?normal?group，the?gastric?tissue?injury?was?serious，the?ulcer?index?and?and?the?contents?of?MDA?in?model?group?were?increased，whereas?the?level?of?SOD?and?GSH?were?decreased，which?presented?statistical?significant?differences?（P<0.01）.Compared?with?the?model?group，the?degree?of?gastric?tissue?injury?was?alleviated，the?ulcer?index?and?the?contents?of?MDA?was?reduced?significantly?（P<0.05），and?the?level?of?SOD?and?GSH?were?elevated?obviously?（P<0.01）?in?the?Kangxin?solution?group?（P<0.01）.[Conclusion]Kangfuxin?solution?has?protective?effect?on?ethanolinduced?acute?gastric?ulcer，which?may?be?related?to?reducing?the?production?of?oxygen?free?radicals，promoting?the?scavenging?of?oxygen?free?radicals，inhibiting?lipid?peroxide?and?increasing?oxidative?stress.

Key?words?Kangfuxin?solution;Ethanol;Acute?gastric?ulcer;Antioxidation;Protective?effect

基金項目?國家自然科學基金項目（81260676，81960712）;云南省地方本科高校（部分）基礎研究聯合專項項目（2018FH001-097）;云南省教育廳科學研究基金重點項目（2013Z154）。

作者簡介?陶柱萍（1994—），女，云南宣威人，碩士研究生，研究方向：代謝組學。通信作者，副教授，博士，碩士生導師，從事代謝組學研究。

收稿日期?2019-12-01

隨著現代社會的發展，帶來生活節奏加快、社會交往增多、生活壓力增大等情況，導致人們胃潰瘍的發病率日益升高，尤其是飲酒所引起的急性胃潰瘍在臨床日益常見;據有關資料，我國部分地區胃潰瘍發病率高達6.07%，復發率為60%～80%[1-2]。乙醇對胃黏膜損害很大，通過消耗黏液和碳酸氫鹽而破壞黏膜保護層;也可通過微粒體氧化酶在醇代謝過程中產生乙醛，導致抗氧化酶活性受損，加劇胃黏膜損傷[3]。胃黏膜損傷導致氧自由基清除率降低、胃黏膜中的氧自由基增加，進而引起脂質過氧化增加，損傷細胞和細胞膜及影響黏膜供血，從而進一步加劇潰瘍的形成[4]。

康復新液由美洲大蠊干燥蟲體的提取物制成，具有改善局部微循環、抗炎消腫、促進表皮細胞生長和肉芽組織的增生、加速壞死組織脫落、修復各種潰瘍和創面的作用[4-5]。研究發現，康復新液對急性乙醇性胃潰瘍有一定的保護作用[5]，但其作用機制尚不清楚。該試驗通過觀察大鼠的胃黏膜形態學變化和胃潰瘍指數，檢測胃組織中超氧化物歧化酶（SOD）、還原型谷胱甘肽（GSH）及丙二醛（MDA）的水平，探討康復新液對乙醇致大鼠急性胃潰瘍的影響及可能的作用機制，為康復新液的臨床應用提供理論依據。

1?材料與方法

1.1?試驗材料

1.1.1?藥品及試劑。

康復新液（昆明賽諾制藥股份有限公司）;氯化鈉（天津市福晨化學試劑廠）;無水乙醇（國藥集團化學試劑公司）;SOD、GSH、MDA生化指標試劑盒均購自卡邁舒生物科技有限公司。

1.1.2?儀器。

METTLER?AE240分析天平，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司;SIGMA?3-15低溫高速離心機，西格瑪實驗室離心機公司;MICCRA?D-1組織破碎儀，邁卡萊客（廣州）工業技術有限公司;VORTEX-5渦旋儀，海門市其林貝爾儀器制造有限公司。

1.1.3?實驗動物。

SPF級雄性SD大鼠，體重220～250?g，購自昆明楚商科技有限公司，動物許可證號：SYXK（滇）K2012-0002，所有大鼠在清潔級環境中常規飼養。

1.2?試驗方法

1.2.1?動物分組與給藥。

將18只SD大鼠，適應性飼養7?d后，隨機按體質量分為3組，即空白組、模型組、康復新液給藥組。在禁食不禁水12?h后，模型組和康復新液給藥組一次性灌胃無水乙醇（10?g/kg）建立胃損傷模型;造模后1?h，給藥組一次性給予康復新液（6?mL/kg）進行治療;給藥后1?h處死大鼠。

1.2.2?樣本的收集和處理。

1.2.2.1?潰瘍指數的計算。

將大鼠胃組織取出后，進行拍照評分，并計算潰瘍指數。胃損傷指數評定參照文獻[6]，標準為：黏膜皺褶消失（0、1、2、3）;出血性區域（0、1、2、3）;潰瘍（0、2、4、6）;穿孔（0、10）;潰瘍指數是所有病變的分數之和。

1.2.2.2?胃組織生化指標的檢測。取3份胃組織0.1?g，分別加入預冷的生理鹽水勻漿，制成勻漿液。將勻漿液離心后，取上清于-80?℃保存，用于SOD、GSH、MDA生化指標檢測。

1.3?統計學方法?所測得的試驗數據用SPSS?17.0軟件進行分析和處理，處理后的試驗結果以平均值±標準差（±S）的方式表示，用隨機單因素的方差分析ANOVA，各組之間的比較用LSD（least?significant?difference）法。以P<0.05表示各組間結果具有顯著性差異。

2?結果與分析

2.1?大鼠胃黏膜組織形態觀察比較

如圖1所示，空白組大鼠胃壁完整、未見到明顯損傷，模型組大鼠胃部可以看到明顯的充血腫脹，而康復新液給藥組大鼠相對模型組損傷程度明顯減輕。

2.2?潰瘍指數

從圖2可以看出，與空白組比較，模型組的潰瘍指數具有顯著差異（P<0.01）;與模型組相比，康復新液給藥組潰瘍指數明顯減少（P<0.05），表明康復新液可以減輕急性胃潰瘍癥狀，有一定的保護作用。

2.3?胃組織生化指標

采用試劑盒測定大鼠胃組織勻漿中SOD、GSH與MDA，結果如圖3所示。與空白組相比，模型組大鼠的SOD活性和GSH含量明顯降低（P<0.01），MDA含量顯著升高（P<0.01）。與模型組相比，康復新液給藥組大鼠的SOD活性、GSH含量均顯著升高（P<0.01），而MDA含量明顯降低（P<0.05）。

3?討論與結論

該試驗選用無水乙醇灌胃致急性胃潰瘍的動物模型，灌入的乙醇直接破壞胃表面的保護屏障，導致胃壁血液循環障礙，胃黏膜損傷;其病理特點與人胃黏膜損傷相似，且具有操作簡便、成模速度快、試驗重復性好等優點[2]。急性乙醇性胃潰瘍的發生與胃黏膜血流量減少及氧自由基增加誘發的脂質過氧化反應有關，其中氧自由基的增多是重要因素[7];機體通過酶系統與非酶系統產生氧自由基，攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發脂質過氧化作用，并由此形成脂質過氧化物[8]。

SOD是機體內一種重要的內源性氧自由基清除劑，在抗氧化方面起著重要作用，能有效地清除氧自由基，中斷氧自由基的連鎖反應，保護細胞免受損傷，其活性的高低也間接反映了機體清除氧自由基的能力[4，9-10]。SOD可以將超氧化物（O2-）還原為過氧化氫（H2O2），然后過氧化氫酶將過氧化氫轉化為水，并具有修復細胞的功能[11]。胃黏膜受到損傷時，胃黏膜及血液中的氧自由基增多，促使體內SOD被大量消耗[12]。經康復新液給藥治療后，胃組織中的SOD活性明顯升高，可清除機體過多的自由基，從而減輕機體的氧化應激損傷，并能穩定細胞膜，起到保護胃黏膜的作用。

GSH是細胞抗氧化防御系統中最重要的物質之一，可以保護胃黏膜組織免受自由基物質的損害;其作用承接SOD，能將胃組織氧化產生的過氧化物轉化為低毒無害的物質。GSH主要在谷胱甘肽過氧化物酶的作用下與H2O2反應，消除H2O2生成H2O，自身則轉化為氧化型谷胱甘肽（GSSG），而GSSG則可在谷胱甘肽還原酶的作用下還原成GSH;此外，GSH還可在谷胱甘肽轉硫酶的作用下，與許多有害化合物及其活性代謝物的結合，從而分解有害的內源性、外源性化合物，并促進這些化合物的分解[13]。GSH的降低會使細胞面臨氧化損傷的風險。在該試驗中，給予無水乙醇后大鼠胃組織中GSH水平顯著降低，說明在無水乙醇的作用下胃組織產生了嚴重的氧化損傷，并可能產生了一些相應的有害化合物;給藥后GSH水平有恢復正常的趨勢，提示康復新液具有抗胃潰瘍的作用。

MDA是多不飽和脂肪酸過氧化的主要產物，也是氧化應激的生物標志物，可以破壞核酸、蛋白等生物大分子，造成機體損傷和疾病的發生，其產生還可以破壞細胞膜結構，加劇膜的損傷，導致細胞腫脹壞死;其含量是反映機體內氧自由基和脂質過氧化代謝的重要指標，可間接反映出細胞受損的程度[3，14-15]。乙醇致急性胃潰瘍的胃組織中SOD活性的降低，可促使氧自由基在胃黏膜中積聚，從而引發鏈式脂質過氧化反應，使MDA含量升高，進一步加重胃黏膜的損傷[10]。試驗結果顯示，康復新液給藥，降低了無水乙醇造成的MDA升高，進一步表明康復新液能降低脂質過氧化，增加機體氧化應激能力，抑制胃黏膜損傷的發生和發展，從而對乙醇引起的胃黏膜損傷進行保護。

綜上所述，康復新液能降低乙醇誘導的潰瘍損傷指數和胃組織中MDA含量的增加，升高SOD活性和GSH含量，

從而改善胃黏膜損傷。其機制可能與減少氧自由基生成、

促進氧自由基清除和抑制脂質過氧化作用、增加氧化應激有關。

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