肝細胞癌患者TACE治療前后血清miR-145水平變化及其臨床意義

李天縱，周 松，周 石

肝細胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是一種具有高發病率和高死亡率的惡性腫瘤，約占原發性肝癌的90 %[1]。經導管動脈化療栓塞術(transcatheter arterial chemoembolization，TACE)是目前治療中晚期HCC患者首選非手術治療方法[2,3]。甲胎蛋白(alpha fetoprotein，AFP)是評估TACE術后療效的常用標志物[4]，但以往研究表明，AFP存在部分假陰性現象[5,6]。研究表明，miR-145在HCC組織中水平下調，其能夠抑制肝癌細胞的增殖，可能作為診斷和評估療效的潛在生物標志物[7]。本研究檢測了HCC患者TACE治療前后血清microRNA-145(miR-145)的變化，以探討其對預后的預測價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2013年1月～2015年12月我院收治的HCC患者72例，男45例，女27例；年齡35～70歲，平均年齡為(51.45±10.20)歲。符合2011年我國發布的原發性肝癌臨床診斷標準[8]，即具有病毒感染或肝硬化基礎，肝臟占位直徑≥2 cm，CT或MRI檢查提示占位部位呈“快進快出”表現。納入患者病灶數≤3個，腫瘤直徑≤10 cm，均為初診患者，入院前未接受任何化療、放療或分子靶向治療，肝功能Child-Pugh分級為A級或B級。排除標準：①存在行TACE禁忌證；②肝內外轉移；③腫瘤體積>全肝的70%；④有嚴重的腎臟功能障礙性疾病。另選取同期在本院體檢的60例正常人作為對照組，男36例，女24例；年齡35～70歲，平均年齡為(52.04±9.75)歲。兩組受試者性別和年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)。患者已簽署知情同意書，本研究經醫院醫學倫理委員會批準進行。

1.2 TACE治療方法 采用Seldinger技術，經皮穿刺股動脈，將導管插至腹動脈或肝動脈后，造影確定腫瘤位置、大小、數目和供血動脈等，再用微導管選擇性插入腫瘤供血動脈，注入適量和適當的栓塞劑【碘油化療乳劑：表阿霉素(上海一基實業有限公司)60 mg，奧沙利鉑(上海恒斐生物科技有限公司)50 mg，與其他表柔比星類、絲裂霉素類等聯合治療，用量不超過30 mL】。手術結束前再次造影觀察血管栓塞情況，手術結束后給予止嘔、護肝、護胃等針對性治療。

1.3 血清AFP檢測 采用ELISA法檢測(上海基免實業有限公司)。

1.4 血清miR-145水平檢測 采用RNA提取試劑盒提取血清總RNA，采用反轉錄試劑盒反轉錄成cDNA，采用miScript SYBR Green PCR Kit檢測血清miR-145水平，反應體系為20 μL，qRT-PCR反應條件：95℃：60 s；60℃：30 s，70℃：30 s，共40個循環。miR-145及內參U6的引物序列見表1。采用2-ΔΔCT法對miR-145水平進行定量分析。

表1 qRT-PCR引物序列

1.5 療效評價方法 于治療前1 d和治療后1個月行CT(上海寰熙醫療器械有限公司)或MRI(上海寰熙醫療器械有限公司)掃描檢查，采用根據李虎子等[9]改良的Recist標準評估TACE治療效果，包括完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、疾病進展(PD)和疾病穩定(SD)。

1.6 隨訪 隨訪自出院之日起至2018年12月30日，對所有患者進行門診復查或者電話隨訪，隨訪時間為3年，調查并記錄患者的生存情況，3年內發生死亡即為不良預后。

2 結果

2.1 療效情況 在治療1個月末，16例(22.2 %)為PR，13例(18.1%)為SD，43例(59.7 %)為PD。

2.2 HCC患者與正常人血清miR-145水平比較 治療前，HCC患者血清miR-145水平顯著低于對照組(P<0.05)；術后1個月，HCC患者血清miR-145水平較治療前顯著升高(P<0.05，表2)。

表2 兩組受試者血清miR-145水平比較

與對照組比，①P<0.05；與術前比，②P<0.05

2.3 不同臨床和病理學特征HCC患者血清miR-145水平比較 以HCC患者術前血清miR-145水平的平均值為界限，將其分為高水平組和低水平組，發現不同性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤分化、癌栓和Child-Pugh分級患者血清miR-145水平無顯著性差異(P>0.05)，而不同TNM分級和術前AFP水平患者之間差異顯著(P<0.05，表3)。

2.4 不同近期療效HCC患者血清miR-145水平比較 PD組血清miR-145水平為(0.86±0.21)，顯著高于PR或SD組【(0.62±0.19)或(0.75±0.19)，P<0.05】，后兩組血清miR-145水平也相差顯著(P<0.05)。

2.5 血清miR-145水平與HCC患者預后的關系 隨訪3年，共有28例患者死亡，其中高miR-14水平患者3 a生存率為75.6 %，顯著高于低水平患者的41.94%(x2=8.765，P<0.05)。

2.6 血清miR-145和AFP預測HCC患者不良預后的ROC曲線分析 血清miR-145水平預測HCC患者不良預后的曲線下面積為0.871，診斷截斷點為0.87；血清AFP水平預測HCC患者不良預后的曲線下面積為0.851，診斷截斷點為404.64 ng/mL，而miR-145聯合AFP預測HCC患者不良預后的曲線下面積為0.942，聯合預測的敏感度為91.7%，準確度為90.2%(圖1)。

圖1 血清miR-145和AFP預測HCC不良預后的ROC曲線

3 討論

據中國癌癥統計數據結果顯示，2015年我國肝癌的總發病人數為46.61萬人，死亡人數約為42.21萬人[10,11]。目前，HCC已成為全球第五大惡性腫瘤，居全球癌癥死因的第三位[12]。由于HCC具有早期無特異表現、易復發、預后較差等特點，因此HCC至今仍然是威脅人類健康的重大醫療問題[13]。臨床顯示，提高HCC患者的早期診斷，對改善HCC患者預后，提高生存率具有十分重要的意義[14]。

miRNA是一類內源性、非編碼單鏈小RNA，在腫瘤細胞的增殖、分化、凋亡中具有重要的作用，與惡性腫瘤的發生、發展及轉移過程密切相關[15]。miR-145是miRNA中的一種。研究表明，miR-145通常起抑癌基因的作用，通過抑制原癌基因或調控腫瘤細胞的增殖和凋亡過程，抑制腫瘤的發生發展[16]。研究表明，miR-145在HCC細胞水平下調[17]。本研究結果顯示HCC患者血清miR-145水平顯著低于對照組，提示miR-145在HCC中水平下調，可能充當腫瘤抑制因子的作用。miR-145在HCC組織細胞水平下調，其水平與淋巴結轉移階段、血管侵犯和肝內轉移有關[18]。本研究結果顯示HCC患者血清miR-145水平與性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤分化、癌栓、Child-Pugh分級無關，而與TNM分級和術前AFP水平有關，提示血清miR-145可能與HCC疾病進展有關。

TACE主要通過栓塞腫瘤的供血動脈，使腫瘤缺血、缺氧，最終達到促進腫瘤壞死的目的，是目前用于治療HCC患者的重要方法[19]。本研究結果顯示，術后1個月HCC患者血清miR-145水平顯著高于術前，PD組血清miR-145水平顯著高于PR或SD組，顯示miR-145水平隨治療效果的改善而升高。本研究結果顯示，隨訪3年，共有28例患者死亡，其中miR-14高水平患者3 a生存率為75.6 %，顯著高于低水平患者的41.94%，提示miR-145水平可能與TACE術后患者的不良預后有關。AFP是目前對于HCC診斷、治療和復發檢測時常用的一種血清學標志物，對HCC具有重要的診斷價值。肝癌患者血清AFP水平升高，且血清AFP水平與肝癌患者術后復發率有關，血清AFP異常升高可增加肝癌患者術后1年復發風險[20]。本研究進一步采用ROC曲線分析miR-145和AFP在HCC不良預后預測方面的價值，結果顯示，血清miR-145、AFP水平和miR-145聯合AFP預測HCC患者不良預后的曲線下面積分別為0.871、0.851和0.942，兩者聯合預測HCC不良預后的敏感度為91.7 %，準確度為90.2 %，提示miR-145聯合AFP檢測可提高HCC患者不良預后的預測價值，可能具有一定的參考意義。