14AA復(fù)方氨基酸口服液的配制*

張雪華，鄧乾華，楊善彬，王曉楠，余雙雙，陳孝飛

(1 重慶師范大學(xué)化學(xué)學(xué)院，重慶 401331；2 重慶師范大學(xué)活性物質(zhì)生物技術(shù)教育部工程研究中心，重慶 401331)

紅棗又叫良棗、華棗，是鼠李科類植物棗屬的果實(shí)，原產(chǎn)于中國(guó)。紅棗中含有糖類、蛋白質(zhì)等可促進(jìn)肝臟合成蛋白，是肝臟的營(yíng)養(yǎng)劑。枸杞中含有豐富的枸杞多糖、甜菜堿、氨基酸等活性成分有養(yǎng)肝明目、補(bǔ)氣補(bǔ)血、增強(qiáng)非特異性免疫功能等作用，且來(lái)源廣泛，具有極高的醫(yī)療和保健功能，在保健品的研發(fā)中具有廣闊的應(yīng)用前景?？诜菏且环N具有攜帶方便，治療急性病的口服體制劑[1]。近代研究發(fā)現(xiàn)，肝昏迷是血漿中支鏈氨基酸與芳香氨基酸比例失調(diào)導(dǎo)致的，當(dāng)兩者的比值降低至1.0～1.5時(shí)就會(huì)發(fā)生昏迷[2]。所以可通過(guò)調(diào)節(jié)口服液中兩種氨基酸配比的方式來(lái)治療肝昏迷。本實(shí)驗(yàn)以市場(chǎng)上所售的14AA復(fù)方氨基酸口服液的配方為基礎(chǔ)，提取紅棗枸杞的有效中藥成分對(duì)14AA口服液進(jìn)行優(yōu)化。常見(jiàn)的中藥提取成分方法有超臨界流體萃取法，組織破碎提取法、超聲微波法等。超聲微波法簡(jiǎn)單易操作、穿透能力強(qiáng)，能快速提取出藥材中的有效成分，所以本實(shí)驗(yàn)采用超聲微波法對(duì)紅棗枸杞中的有效成分進(jìn)行提取，并對(duì)配制的口服液中進(jìn)行各指標(biāo)質(zhì)量檢測(cè)。

1 實(shí) 驗(yàn)

1.1 儀器和原料

DF-101S超聲清洗儀，鞏義市予華儀器有限公司；pH計(jì)(批號(hào)20180910)，上海馨晟試化工有限公司；UV-2550紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，島津儀器有限公司；FA2004分析天平，上海恒平科學(xué)儀器有限公司；DHG-9076A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

紅棗產(chǎn)地為新疆，枸杞產(chǎn)地為寧夏中寧，葡萄糖、苯酚、濃硫酸、無(wú)水乙醇均為AR，購(gòu)于成都市科隆化學(xué)品有限公司。

1.2 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

精確稱取100 mg干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品于100 mL的容量瓶中，加蒸餾水定容，搖勻備用。用移液槍分別移取一定體積的葡萄糖溶液于帶塞試管中，加入相應(yīng)體積的超純水，配制濃度為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mg/mL的葡萄糖溶液，加蒸餾水至體積為2 mL。分別加入5 mL質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的苯酚溶液，然后快速分別加入8 mL濃硫酸，搖勻，靜置20 min 至室溫，另外取一支帶塞試管，加入2 mL蒸餾水后，同上操作，作為空白對(duì)照溶液。用紫外分光光度計(jì)在300～600 nm范圍內(nèi)進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，在489 nm處檢測(cè)到最大吸收波長(zhǎng)，取489 nm處的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3 多糖的提取

稱取3 g干燥至恒重的紅棗枸杞(紅棗枸杞各1.5 g)，剪碎過(guò)篩后置于錐形瓶中，加入60 mL的蒸餾水，置于固定功率和溫度的超聲清洗儀中，經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的提取后，抽濾。向提取液中加入三倍體積80%的無(wú)水乙醇，搖勻，靜置24 h后進(jìn)行抽濾，將沉淀物放入真空干燥器中進(jìn)行干燥得粗多糖。

(1)稱取3 g干燥至恒重的紅棗枸杞(紅棗枸杞各1.5 g)，剪碎過(guò)篩后置于錐形瓶中，加入60 mL的蒸餾水，溫度設(shè)置為70 ℃，超聲功率分別為120 W、140 W、160 W、180 W、200 W。經(jīng)過(guò)一定時(shí)間的提取后，測(cè)得粗多糖的提取率。

(2)設(shè)置液料比分別為1:30、1:35、1:40、1:45、1:50，同上述方法，得出各個(gè)液料比下粗多糖的提取率。

(3)設(shè)置超聲時(shí)間分別為25 min、35 min、45 min、55 min、65 min，同上述方法，得出各個(gè)液料比下粗多糖的提取率。

(4)設(shè)置提取溫度分別為50 ℃、60 ℃、70 ℃、80 ℃、90 ℃，同上述方法，得出各個(gè)液料比下粗多糖的提取率。

采用Origin 8.1軟件繪制各因素對(duì)多糖提取率的影響曲線。

1.4 口服液的配制

將冷藏3 h后的紅棗枸杞提取液取出，加入0.025 g亞硫酸氫鈉作為抗氧化劑、加入3.8%的檸檬酸鈉作為酸味調(diào)節(jié)劑至pH=4.4，然后加入相應(yīng)質(zhì)量的14種氨基酸[4]。14種氨基酸的質(zhì)量比例：L-亮氨酸0.688 g、L-異亮氨酸0.563 g、L-纈氨酸0.525 g、L-甘氨酸0.563 g、L-脯氨酸0.500 g、L-丙氨酸0.481 g、L-賴氨酸0.476 g、L-精氨酸0.375 g、L-絲氨酸0.313 g、L-蘇氨酸0.281 g、L-組氨酸0.150 g、L-蛋氨酸0.063 g、L-苯丙氨酸0.063 g、L-色氨酸0.041 g，然后加蒸餾水定容至500 mL，搖勻后得到棕黃色的口服液[7]。

2 結(jié)果與討論

2.1 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線

取489 nm處的吸光度，以葡萄糖濃度為橫坐標(biāo)，以吸光度(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。由圖1可知，該標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=0.50762x+0.00238，R2=0.9997。

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖Fig.1 The standard curves

2.2 單因素實(shí)驗(yàn)

2.2.1 超聲功率對(duì)多糖提取的影響

圖2 超聲溫度的影響Fig.2 The effect of ultrasonic temperature

由圖2可知，隨著超聲功率的增大，紅棗提取率增大，因?yàn)殡S著功率的增大穿透力增強(qiáng)，更多的多糖滲透到水溶劑中，當(dāng)功率超180 W時(shí)，多糖提取率降低，可能是由于穿透力太大，使部分多糖結(jié)構(gòu)破壞。因此，最佳超聲功率為180 W。

2.2.2 溫度對(duì)多糖提取的影響

圖3 超聲時(shí)間的影響Fig.3 The effect of ultrasonic time

由圖3可知，隨著溫度的升高，紅棗提取率增大，當(dāng)溫度大于80 ℃時(shí)，多糖提取率增大的幅度降低，因?yàn)殡S著溫度的升高，伴隨著一些可溶性雜質(zhì)析出，因此適宜的提取溫度為80 ℃。

2.2.3 提取時(shí)間對(duì)多糖提取的影響

圖4 超聲功率的影響Fig.4 The effect of ultrasonic power

由圖4可知，隨著時(shí)間的增長(zhǎng)，紅棗提取率增大，多糖可以充分的滲透到溶劑中，但當(dāng)時(shí)間超過(guò)45 min時(shí)，多糖提取率降低，可能隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)被破壞。因此最佳提取時(shí)間為45 min。

2.2.4 液料比對(duì)多糖提取的影響

圖5 液料比的影響Fig. 5 The effect of extracting solid liquid ratio

由圖5可知，隨著液料比的增大，紅棗提取率增大，但液料比超過(guò)1:40時(shí)，多糖的提取率反而降低，可能是太多的溶劑把提取出的多糖稀釋了，因此最佳液料比為1:40。

2.3 正交實(shí)驗(yàn)

通過(guò)單因素實(shí)驗(yàn)，篩選出的影響多糖提取率的三個(gè)主要因素為：超聲時(shí)間、液料比、超聲溫度，設(shè)計(jì)三因素三水平實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)因素如表1所示。

表1 正交實(shí)驗(yàn)因素水平表Table 1 Orthogonal factor level table

通過(guò)正交實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析可得，最佳提取工藝為超聲功率180 W，超聲時(shí)間40 min，提取溫度為80 ℃，液料比1:40。

2.4 各種氨基酸含量的測(cè)定

利用氨基酸分析儀在pH=5.0～5.5、溫度為100 ℃、反應(yīng)時(shí)間為13 min、每種的上樣量為0.1 μmol的條件下進(jìn)行氨基酸含量的測(cè)定[3]，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 氨基酸含量分析結(jié)果Table 2 Analysis of amino acids content

2.5 pH值的測(cè)定

在19 ℃的溫度下，用pH計(jì)對(duì)配制的口服液進(jìn)行pH值的測(cè)定[4]。重復(fù)測(cè)量五次，測(cè)量結(jié)果顯示：氨基酸口服液的pH值穩(wěn)定在4.4～4.7之間，測(cè)量五次取平均值為4.6，與配制時(shí)的pH值有差距，可能與兩次測(cè)量校準(zhǔn)過(guò)程或測(cè)量室溫等實(shí)驗(yàn)因素有關(guān)。

2.6 相對(duì)密度測(cè)定(比重法)

取一個(gè)25 mL潔凈干燥的比重瓶，精密稱量其質(zhì)量為m0，裝滿該氨基酸口服液密封，置于19 ℃恒溫水浴鍋中20 min[6]，取出比重瓶，用濾紙將瓶身擦干，精密稱其質(zhì)量為m1，口服液的質(zhì)量m=m1-m0，同理將口服液換成蒸餾水，用上述方法測(cè)得同一溫度下水的質(zhì)量m水，相對(duì)密度=m/m水[7]，重復(fù)五次實(shí)驗(yàn)得出，氨基酸口服液的相對(duì)密度保持一致，均在1.0858～1.0908 g/cm3之間。

3 結(jié) 論

市面上的14AA復(fù)方氨基酸口服液為棕黃色的澄清液體，規(guī)格為50 mL/瓶，每瓶含氨基酸總量為5.082 g。本實(shí)驗(yàn)配制的復(fù)方氨基酸口服液顏色為棕黃色，pH為4.4，呈弱酸性，符合氨基酸口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中要求pH在3.8～4.5之間[5]。利用茚三酮試劑的鑒定實(shí)驗(yàn)中，氨基酸口服液呈現(xiàn)紫紅色，說(shuō)明口服液中氨基酸穩(wěn)定。在氨基酸口服液相當(dāng)于標(biāo)示量90.0%～110.0%時(shí)，相對(duì)密度應(yīng)在1.140～1.170之間，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果為1.088，經(jīng)分析可能是在配制過(guò)程中口服液被稀釋，應(yīng)再做加標(biāo)測(cè)定實(shí)驗(yàn)才更準(zhǔn)確可靠，經(jīng)氨基酸分析儀檢測(cè)，該口服液中含有14種氨基酸，與理論結(jié)果吻合。