膚陰凈洗劑揮發(fā)油提取工藝的研究

藍(lán)曉步，許崇遙，董思喆，周 剛，梁穎娥，黃興振

（1.南寧市第一人民醫(yī)院藥學(xué)部，南寧，530022；2.廣西醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，南寧，530022）

膚陰凈洗劑是南寧市第一人民醫(yī)院根據(jù)婦科陰部炎癥的病因和治療原則制定的一種中草藥制劑，主要含有苦參、小葉桉、黃柏、蛇床子、白鮮皮、蒼術(shù)、薄荷腦、艾葉等，洗劑工藝為先提取揮發(fā)油，再水提醇沉最后而得到。臨床證實(shí)膚陰凈洗劑具有清熱解毒，殺蟲止癢，祛風(fēng)除濕等功效，被廣泛應(yīng)用于陰道炎、外陰瘙癢、濕疹、體股癬、痱子等。為進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)膚陰凈陰凈洗劑的產(chǎn)業(yè)化，在不對原生產(chǎn)工藝進(jìn)行質(zhì)的改變的前提下，逐步完善細(xì)化工藝參數(shù)。而提取揮發(fā)油作為膚陰凈洗劑制備工藝的關(guān)鍵，其中含揮發(fā)油成分的藥材小葉桉、蒼術(shù)、蛇床子及艾葉，為了后續(xù)產(chǎn)業(yè)化關(guān)鍵技術(shù)開展研究，本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了膚陰凈洗劑揮發(fā)油最佳提取工藝條件的優(yōu)選。

1 相關(guān)材料

1.1 藥材及相關(guān)材料

蒼術(shù)、蛇床子、艾葉（南寧生源中藥飲片有限責(zé)任公司），執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)：《中國藥典》2015年版一部。從吳圩采摘的小葉桉經(jīng)過廣西醫(yī)科大學(xué)中藥學(xué)教研室老師鑒別確定為小葉桉。對照品：桉油精（成都德思特生物技術(shù)有限公司）。色譜純乙腈（成都市科隆化學(xué)品有限公司）

1.2 實(shí)驗(yàn)條件

色譜條件：色譜柱：Dikma Kromasil C18（250 mm×4.5 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（64:36）；流速：1.0 ml/min；檢測波長：203 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：1 μL。

1.3 相關(guān)溶液

①實(shí)驗(yàn)溶液：精密稱取L9（34）正交表所得揮發(fā)油50 mg作為供試品，置于10 mL棕色容量瓶中，加入色譜乙腈稀釋至刻度，搖勻，即得。②對照品溶液：稱取桉油精對照品適量，精密稱定，置于10 mL容量瓶中，加色譜乙腈至刻度，搖勻，成濃度為3.018 mg/mL的溶液。

2 揮發(fā)油提取工藝

2.1 高效液相線性關(guān)系考察

取配置好的桉油精對照品溶液（3.018 mg/ml）按照“1.5”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，進(jìn)樣體積分別為4 μl，5 μl，6 μl，7 μl，8 μl，9 μl，10 μl，記錄揮發(fā)油中桉油精的峰面積。以桉油精峰面積Y對進(jìn)樣濃度進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程為：Y=83764X+15.798，r=0.9999。

2.2 精密度試驗(yàn)

取配好的桉油精對照品溶液（2.113mg/ml），高效液相連續(xù)進(jìn)樣6次，數(shù)據(jù)顯示6次測定出提取揮發(fā)油中桉油精峰面積的RSD為0.84%。

2.3 重復(fù)性試驗(yàn)

取同批供試品，按照“1.6”項(xiàng)下制備6份供試品溶液，分別進(jìn)樣分析，記錄峰面積，結(jié)果RSD值為0.67%，表明提取重復(fù)性好。

2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取配好的揮發(fā)油供試品溶液，制備后0、4、6、8小時進(jìn)樣測定提取揮發(fā)油中桉油精的峰面積，結(jié)果0到8小時的桉油精鋒面積的RSD值為1.8%，說明供試品溶液在8小時內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 揮發(fā)油提取時間的選擇

小葉桉、蒼術(shù)、蛇床子、艾葉的主要有效成分為揮發(fā)油，本發(fā)明采用原工藝水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，并以正交試驗(yàn)法L9（34）進(jìn)行試驗(yàn)研究，篩選揮發(fā)油最佳提取工藝。

按照膚陰凈洗劑處方量的3/10稱取小葉桉150份，蒼術(shù)30份，以及艾葉和蛇床子各22.5份，加入12倍水，浸泡時間為1小時，進(jìn)行水蒸氣蒸餾，記錄4到8小時不同提取時間的揮發(fā)油量，并計(jì)算提取率，研究對揮發(fā)油提取率變化的影響。結(jié)果見表1：

表1 不同提取時間揮發(fā)油的提取率

結(jié)果表明，揮發(fā)油的提取率首先隨著時間增加逐漸變大，6小時提取的揮發(fā)油的提取率最高為1.023%，4小時是0.976%，然后隨著提取時間變長揮發(fā)油的提取率相應(yīng)減少，產(chǎn)出的揮發(fā)油的顏色由開始的淡黃色加深為金黃色，并且提取時間超過6小時后容易焦鍋，影響產(chǎn)品質(zhì)量，為了保證收油率和產(chǎn)品質(zhì)量，提取時間選定的上限為4小時，下限為6小時。

2.6 揮發(fā)油提取的正交試驗(yàn)

2.6.1 按照處方膚陰凈洗劑中含揮發(fā)油的4位藥材處方量的3/10稱取，即小葉桉150份，蒼術(shù)30份，艾葉和蛇床子各22.5份，然后加水浸泡1小時后開始進(jìn)行水蒸氣蒸餾，提取4位藥材所含總的揮發(fā)油，量取揮發(fā)油體積，計(jì)算揮發(fā)油提取率，同時按照“1.6”項(xiàng)測定揮發(fā)油中桉油精的含量，并計(jì)算各試驗(yàn)號中揮發(fā)油中桉油精的總量。按L9（34）正交設(shè)計(jì)表進(jìn)行以下試驗(yàn)（見表2），考察以下三個因素A（加水倍數(shù)）、B（浸泡時間）、C（提取時間）對提取的影響，以揮發(fā)油提取率和桉油精量為評價指標(biāo)，篩選出揮發(fā)油提取最佳工藝條件。

2.6.2 正交試驗(yàn)結(jié)果 本實(shí)驗(yàn)以揮發(fā)油提取率和桉油精量為評價指標(biāo)，講兩者的權(quán)重系數(shù)定為50%和50%，結(jié)果見表3。方差分析的結(jié)果見表4，影響提取效果的主次因素順序?yàn)椋篈＞C＞B。結(jié)合正交分析結(jié)果和生產(chǎn)實(shí)際，最優(yōu)方案為加14倍水，浸1 h，提取時間6 h，即A3B2C3。

表2 揮發(fā)油提取工藝的因素和水平表

表3 揮發(fā)油提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果

表4 揮發(fā)油提取工藝正交實(shí)驗(yàn)方差分析表

2.6.3 驗(yàn)證試驗(yàn) 為了驗(yàn)證工藝的穩(wěn)定性，按篩選的最佳提取工藝提取3次，結(jié)果見表5.驗(yàn)證結(jié)果表明，所篩選的提取工藝條件穩(wěn)定可行。

表5 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3 討 論

水蒸氣蒸餾法是目前實(shí)驗(yàn)室最常見的揮發(fā)油提取方法[1]，具有設(shè)備簡單，容易操作，成本便宜等優(yōu)點(diǎn)。在膚陰凈洗劑工藝提取揮發(fā)油步驟過程中藥材要注意控制干燥程度，尤其小葉桉藥材的干燥程度盡量保持水分含量在5 %左右提取揮發(fā)油的量才能保持一定的穩(wěn)定并且要時刻注意提取溫度，不要過高，玻璃儀器要洗凈，否則提取出的揮發(fā)油會變少顏色變金黃色，嚴(yán)重影響揮發(fā)油質(zhì)量。

本研究發(fā)現(xiàn)加水倍數(shù)對于揮發(fā)油提取的量提高有顯著意義，但是因素B、因素C對揮發(fā)油提取的量提高沒有顯著意義。在桉油精含量實(shí)驗(yàn)結(jié)果中表明在一定程度和結(jié)果上上，選擇A1、B1、C1三個條件能使提取的揮發(fā)油中桉油精的含量提高。

膚陰凈洗劑制備工藝中揮發(fā)油提取的最佳工藝條件為A3B2C3，即加水倍數(shù)為14 倍水，浸泡時間為1 小時，提取時間為6 小時，最后的揮發(fā)油量以及所含的桉油精的量相比較最好。