基因芯片技術(shù)檢測結(jié)核分枝桿菌對利福平和異煙肼耐藥性的研究

趙立娜

【摘 要】目的：分析并研究基因芯片技術(shù)檢測結(jié)核分枝桿菌對利福平和異煙肼的耐藥性。方法：本次實(shí)驗(yàn)共有58例患者體液樣本參與實(shí)驗(yàn)，所有患者體液樣本均是我院2018年10月至2019年10月收治的結(jié)核病患者。對所有患者體液樣本進(jìn)行基因芯片檢測，檢測患者對利福平和異煙肼的耐藥性，其中基因芯片檢測包括異煙肼的KatG和inhA基因位點(diǎn)和利福平的rpoB基因位點(diǎn)。結(jié)果：通過本次實(shí)驗(yàn)可得，58例患者體液樣本中有24（41.38%）例531位點(diǎn)（C-T）的突變;3（5.17%）例526位點(diǎn)（C-G）的突變，總突變數(shù)為27（46.55%）例;58例患者體液樣本中有12（20.69%）例KatG-315（G-C）的突變;5（8.62%）例InhA-15（C-T）的突變，總突變數(shù)為17（29.31%）例。結(jié)論：基因芯片技術(shù)具有敏感的利福平和異煙肼耐藥性檢驗(yàn)效果，可以快速準(zhǔn)確的分析利福平和異煙肼的耐藥性，可以在結(jié)核分枝桿菌的耐藥性檢驗(yàn)中大力推廣使用。

【關(guān)鍵詞】基因芯片技術(shù);結(jié)核分枝桿菌;利福平;異煙肼：耐藥性

【中圖分類號】R521【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號】1005-0019（2020）07-228-01

結(jié)核分枝桿菌是一種嚴(yán)重危害人們身健康的病菌，但是目前結(jié)核分枝桿菌的抗藥性逐漸增強(qiáng)，具有耐藥性后會(huì)對患者的治療有消極影響，所以如何快速、準(zhǔn)確的分析患者結(jié)核分枝桿菌的耐藥性就顯得十分重要[1]。

1 資料與方法

1.1 一般資料

本次實(shí)驗(yàn)共有58例患者體液樣本參與實(shí)驗(yàn)，所有患者體液樣本均是我院2018年10月至2019年10月收治的結(jié)核病患者。其中共有患者58例，男性患者30例，女性患者28例;年齡分布為15-64歲，平均年齡為（39.27±12.38）歲;所使用的患者體液分別有痰液34例，傷口分泌物5例，胸泡灌洗液19例。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

本次實(shí)驗(yàn)中使用的儀器有：PCR擴(kuò)增儀、微陣列芯片掃描儀 Lux-Scan10K-B、ExtractorTM36核酸提取儀、Hybset基因微陣列芯片雜交盒、基因芯片、離心機(jī)和離心干燥芯片的容器[2]。使用試劑有：核酸提取液、PCR擴(kuò)增試劑1、PCR擴(kuò)增試劑2、PCR擴(kuò)增試劑3、洗液SSC和SDS、雜交緩沖液。實(shí)驗(yàn)具體操作：痰液和胸泡灌洗液的處理方法：準(zhǔn)備盛有痰液和胸泡灌洗液的無菌盒，并向其中加入適量的4%NaOH溶液，使用離心機(jī)進(jìn)行離心后取沉淀物，并在沉淀物中加入磷酸緩沖液0.5-1.0ml，然后對所得物進(jìn)行接種和培養(yǎng)[3]。傷口分泌物的處理方法：準(zhǔn)備盛有傷口分泌物的無菌盒，并向其中加入適量的4%H2SO4溶液，對所得物靜置20min后進(jìn)行接種和培養(yǎng)。將培養(yǎng)的細(xì)胞做基因芯片技術(shù)檢測，具體操作為：取大于等于1麥?zhǔn)蠞岫鹊呐囵B(yǎng)液和核算提取液置于同一試管中進(jìn)行5min的震蕩，同時(shí)進(jìn)行5min的水浴和1min的5000r/min離心。將所得樣品于3個(gè)試管中，分別加入適量PCR擴(kuò)增試劑1、2、3，然后進(jìn)行擴(kuò)增。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

本次實(shí)驗(yàn)使用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 21.0進(jìn)行相關(guān)的統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)處理。

2 結(jié)果

2.1 利福平耐藥性的檢測

通過本次實(shí)驗(yàn)可得，58例患者體液樣本中有24（41.38%）例531位點(diǎn)（C-T）的突變;3（5.17%）例526位點(diǎn)（C-G）的突變，總突變數(shù)為27（46.55%）例，詳見表1。

2.2 異煙肼耐藥性的檢測 通過本次實(shí)驗(yàn)可得，58例患者體液樣本中有12（20.69%）例KatG-315（G-C）的突變;5（8.62%）例InhA-15（C-T）的突變，總突變數(shù)為17（29.31%）例，詳見表2。

3 討論

經(jīng)常治療結(jié)核分枝桿菌使用的藥物有利福平和異煙肼，但是結(jié)核分枝桿菌容易產(chǎn)生利福平和異煙肼的耐藥性，所以需要檢測患者體內(nèi)結(jié)核分枝桿菌的藥物耐藥性，在之前通常使用的耐藥性檢測方法是使用培養(yǎng)法為基礎(chǔ)的絕對濃度法或比例法，但是這兩種方法通常需要進(jìn)行2-3個(gè)月的培養(yǎng)才能夠得出結(jié)果，嚴(yán)重延誤患者的用藥，對患者的生命健康具有消極意義[4]。基因芯片技術(shù)是指將大量的生物信息分析按照一定的序列固定在玻璃上，然后通過使用熒光標(biāo)記的靶分子和探針進(jìn)行結(jié)合，這樣就可以通過檢測熒光強(qiáng)度對雜交結(jié)果進(jìn)行檢測。利福平的主要耐藥靶分子為rpoB位點(diǎn)，異煙肼的主要耐藥靶分子為KatG和inhA基因位點(diǎn)，通過對這些位點(diǎn)的檢驗(yàn)可得出是否具有耐藥性[5]。

通過本次實(shí)驗(yàn)可得，58例患者體液樣本中有24（41.38%）例531位點(diǎn)（C-T）的突變;3（5.17%）例526位點(diǎn)（C-G）的突變，總突變數(shù)為27（46.55%）例;58例患者體液樣本中有12（20.69%）例KatG-315（G-C）的突變;5（8.62%）例InhA-15（C-T）的突變，總突變數(shù)為17（29.31%）例。

綜上所述，基因芯片技術(shù)具有敏感的利福平和異煙肼耐藥性檢驗(yàn)效果，可以快速準(zhǔn)確的分析利福平和異煙肼的耐藥性，可以在結(jié)核分枝桿菌的耐藥性檢驗(yàn)中大力推廣使用。

參考文獻(xiàn)

[1]何進(jìn)偉， 張燕飛， 汪明星， et al. 利用基因芯片檢測結(jié)核分枝桿菌及其利福平耐藥性的研究[J]. 遼寧醫(yī)學(xué)雜志， 2017（6）：25-27.

[2]白雪娟， 劉銀萍， 張俊仙， et al. 應(yīng)用基因芯片直接檢測結(jié)核病患者各類標(biāo)本中利福平和異煙肼耐藥的價(jià)值[J]. 中國防癆雜志， 2019（2）：138-144.

[3]芮冬妹， 朱珍， 樊燕. 基因芯片技術(shù)在結(jié)核分枝桿菌對利福平敏感性檢測中的臨床價(jià)值[J]. 海南醫(yī)學(xué)， 2017， 28（22）：3714-3716.

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[5]王蓮芝， 張晶， 李瑩瑩，等. 三種分子診斷技術(shù)對兒童肺結(jié)核的診斷價(jià)值[J]. 中國防癆雜志， 2019（5）：546-551.