吻合器痔上粘膜環切術病理切片制作體會

付秀妹

（安徽省蕪湖市第五人民醫院病理科，安徽 蕪湖 241000）

內痔、外痔和混合痔是痔瘡常見的三種類型，主要根據肛門處的齒狀線來進行區分。內痔位于齒狀線以內，常覆蓋有直腸粘膜上皮組織；外痔位于齒狀線以外，或突出于肛門外，常覆蓋有鱗狀上皮或移行上皮，伴出血性潰瘍以及急性慢性炎癥；混合痔是指齒狀線上下方均有痔核突出，并聯成一體。痔瘡被國家中醫藥管理局列為肛腸科16種難治病之一并需手術治療。由于混合痔組織由直腸黏膜和肛管皮膚所組成，結構致密、質地堅韌，多伴有壞死、出血等。想要獲得良好的切片，結果就需要從固定樣本開始，選擇合理的脫水、透明、浸蠟時間，并做好其他步驟的精細操作，這樣才能有助于提高切片的制作質量，現介紹如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

收集蕪湖市第五人民醫院醫院2012年1月～12月患者送檢的吻合器痔上粘膜環切術標本15例，其中男性8例，女性7例，年齡32～79歲，平均年齡46.9歲，包括10例環狀混合痔，5例混合痔。

1.2 方法

1.2.1 取材：方法按常規進行，但混合痔組織塊大小應盡量不超過1.5×1×0.2 cm。取材時務必細心剔除組織里的吻合器釘子，否則切片時釘子會損壞切片刀，出現嚴重刀痕。

1.2.2 脫水：脫水方法按常規進行，由低濃度向高難度乙醇逐步梯度脫水，必須溫和緩慢，不可操之過急，保證乙醇滲透完全。

1.2.3 透明：常規用二甲苯更換兩次共透明60分鐘，使二甲苯充分浸入組織蛋白中。

1.2.4 浸蠟：由于患者的混合痔中包含一定的皮膚正常組織，其結構較為緊密，采用常規包埋劑（蠟），很難完全進入患者組織內，所以需要先選擇熔點為（56～58℃）的石蠟Ⅰ，浸蠟60 min，再換至（熔點58～60℃）的石蠟Ⅱ中浸蠟60 min。浸蠟時延長時間，能夠使石蠟充分進入患者的組織，并在組織內均勻滲入，從而保證制成的蠟快具有良好的硬度和均勻度，有助于切片的完整。

1.2.5 包埋：包埋用熔點60℃的硬蠟，比熔點高1～2℃，包埋時要注意蠟的溫度不可過高燙壞組織或使組織變硬變脆。

1.2.6 制片：切片厚度最好控制在4 μm較為合適，我們多次摸索分析，發現刀刃與組織切面的傾角以5度較好，同時應該將上皮部分置于上方最后切，切片時先修切組織，暴露最大的切面后用冰塊直接冷敷降溫，切片刀應鋒利，按粘膜層至鱗狀上皮層的順序切片，可以輕松完整的切出切片；或者將上皮部分垂直于切片刀的方向放置，最大限度減少切片的皺折產生，同樣可以順利完整的切片；切片經30%的酒精初展后，再用載玻片撈起放入展片箱。

1.2.7 染色：染色采用蘇木精伊紅染色法（HE）[3]，對于皮下纖維豐富的混合痔組織，且常伴有嚴重角化現象，所以在進行伊紅染色時，其時間應當在一定程度上縮短，如果染色時間較長，有可能會影響細胞核的染色，但如果選擇蘇木素進行染色，其時間可以進行一定的延長，避免細胞核內結構染色效果較差。

2 結 果

上述方法制成的切片組織結構完整、色彩深淺適度、紅藍對比鮮明，鱗狀上皮著色層次明顯，腺上皮色調柔和悅目。特別是核內結構清晰透澈、顏色鮮艷、核漿對比鮮明，切片質量優于常規制片，得到滿意結果，詳見圖1。

3 討 論

由于混合痔位于齒狀線上下，而且表面覆蓋著直腸黏膜和肛管皮膚，如果痔瘡發展到最后階段，就會成為環狀混合痔圍繞而直腸肛管一周。手術的治療方法是縮短治愈時間同時，又要保護肛門的正常功能。

由于肛管結構特殊，對人們的日常生活有著非常重要的意義，而在柔軟的乙狀結腸鏡或結腸鏡檢查時，因為內窺鏡迅速滑過肛管進入寬而長的直腸，可能漏掉提示腫瘤病變的肛門粘膜結構的細微改變[4]。因此做好混合痔組織制片是保證臨床病理組織診斷的重要內容，這也對于患者后續臨床診斷來說有積極的意義。由于混合制組織結構較為特殊，其較為緊密和堅韌，并且部分患者在發病后會出現壞死和出血等癥狀，如果采用常規制片方案則難以獲得良好的組織樣本，所以在一定程度上改善混合制切片質量對于病理檢查來說有積極意義，也是對病理技術的客觀要求和挑戰。

本文從取材開始即限定標本的大小厚薄，固定和脫水以及浸蠟，切片直至染色，每一步都嚴格要求，這樣就使切片變得容易完整切出，紅藍顏色比例協調，鱗狀上皮分層著色明顯，腺上皮色調柔和悅目。核內結構清晰透澈，顏色鮮艷，核漿對比染色鮮明。因此該經驗是在制作含有皮膚組織及其它較硬的疑難病理組織切片時可以借鑒和運用，在日常病理制片過程中有推廣應用的價值。