E 抗原陰性輸血產(chǎn)生E 抗體引起次側(cè)有凝集無溶血的1 例報道

劉俊，劉芳，鄭洪

（武漢市漢陽醫(yī)院輸血科，湖北 武漢）

0 引言

準(zhǔn)確的交叉配血是臨床安全輸血的重要保障，但是由于疾病的影響，血清學(xué)抗原抗體的復(fù)雜性，冷凝集素、自身抗體、同種抗體的存在，給交叉配血、血型鑒定帶來困擾，導(dǎo)致輸血困難。因此輸血實驗室要根據(jù)臨床資料，對有疑問的病例進(jìn)行補(bǔ)充試驗，并對檢測結(jié)果并進(jìn)行正確分析，確保輸血的安全。Rh 血型系統(tǒng)包括D、C、c、E 和e5 種主要血型抗原。RhD 血型是臨床輸血前常規(guī)檢測項目，而其他4 種血型抗原在臨床并未常規(guī)檢測。許多試驗結(jié)果提示，由于輸血或妊娠原因而產(chǎn)生的紅細(xì)胞同種抗體大多為抗Rh 系統(tǒng)抗體，且多為IgG 型，雖然有天然的IgM 型抗C、抗E 抗體，但多數(shù)是有抗原刺激產(chǎn)生的IgG 型，D抗原目前是臨床常測抗原，患者產(chǎn)生抗D 抗體機(jī)會不大，但C、c、E、e 抗原在臨床并未常規(guī)檢測，極易因血型抗原不合而使患者產(chǎn)生抗體，當(dāng)患者再次暴露于某種致敏性Rh 血型抗原時，受者免疫系統(tǒng)回憶反應(yīng)可迅速產(chǎn)生大量抗體，引起嚴(yán)重的輸血不良反應(yīng)。本文患者Rh 分型為DCe，部分地區(qū)統(tǒng)計只占人群的2%或更低，而C、E 抗原分布頻率高，患者很容易接觸到C、E 抗原，從而產(chǎn)生抗體。

1 臨床資料

1.1 病例介紹

患者，女，50 歲，平素健康情況差，于2018 年8 月10 號因間斷發(fā)熱咳嗽咳痰4 天入院。患者有高血壓病史10 余年，最高180/100，長期口服降壓藥物治療，今年出現(xiàn)血壓偏低，自行停用降壓藥，有心衰病史，在我院心內(nèi)科治療后好轉(zhuǎn)出院。有慢性胃炎病史，及反復(fù)消化道出血史，有腎功能不全、尿毒癥、慢性腎性貧血病史7 年，目前在我院進(jìn)行維持性血液透析3 次/周并間斷輸血，最后一次輸血時間為2018 年3 月。患者否認(rèn)糖尿病、冠心病史，否認(rèn)藥物食物過敏史。入院診斷：①發(fā)熱 肺部感染；②慢性腎衰竭腎性貧血；③高血壓Ⅲ級 。

1.2 材料

抗A 抗B 標(biāo)準(zhǔn)血清（單克隆抗體）由長春博德生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，用于鑒定病人的血型；凝聚胺介質(zhì)試劑由珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供，用于特殊介質(zhì)交叉配血試驗；Rh（IgM）血型定型試劑（單克隆抗體）由上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司提供，用于鑒定病人Rh 血型；ABO 血型反定型試劑盒（人血紅細(xì)胞）由長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，用于添加反定型細(xì)胞；不規(guī)則抗體檢測試劑（人血紅細(xì)胞）由長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，用于鑒定病人不規(guī)則抗體篩選試驗；抗人球蛋白檢測卡由長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，用于鑒定直接抗人球蛋白試驗；Rh 血型抗原檢測卡（單克隆抗體）由長春博迅生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供，用于鑒定病人Rh血型。

1.3 臨床分析及輸血處理

試驗結(jié)果

患者于本科檢查血型為O 型Rh 陽性，不規(guī)則抗體篩查為Ⅱ、Ⅲ陽性（+）；

病人血色素低，醫(yī)生建議輸血治療，由于不規(guī)則抗體陽性故送血站進(jìn)行篩血試驗；

血型單特異性抗體鑒定：患者檢出E 抗體，但不排除自身抗體；

其它結(jié)果 自身陽性，建議輸注洗滌紅細(xì)胞（鹽水法、微柱凝膠法）；

Rh 血型抗原檢測結(jié)果：

序號 -D -C -c -E -e 表型病人 + + - - + R1R2 DCe/DCe

血交叉（凝聚胺）主側(cè)、次側(cè)無凝集無溶血；

血交叉（微柱凝膠法）主側(cè)無凝集無溶血，次側(cè)有凝集無溶血。

1.4 方法

血型、血清學(xué)等免疫技術(shù)及配血操作按說明書操作：

血型操作ABO、RhD 血型定型檢測卡，選擇瑞士HamiltonB AG 全自動血型分析儀“血型定型檢測”項目進(jìn)行操作。紅細(xì)胞抗原與相應(yīng)抗體在微柱凝膠中形成的特異性抗原抗體復(fù)合物浮在凝膠表面或膠中，為陽性反應(yīng)。

被檢紅細(xì)胞抗原無相應(yīng)的抗體結(jié)合，不出現(xiàn)特異性抗原抗體復(fù)合物，紅細(xì)胞沉于微柱凝膠的底部。

配血操作：

（1）取試管二支，標(biāo)主次側(cè)，主側(cè)管加病人血清（血漿）2 滴，加供者3%-5%紅細(xì)胞懸液1 滴，次管反之；

（2）各加LIM0.65mL，混合均勻后，再各加Polybrene 溶液2 滴，并混合均勻；

（3）用離心機(jī)3400 轉(zhuǎn)/min 離心10 秒，然后把上清液倒掉，不要瀝干，讓管底殘留約0.1mL 液體。

（4）輕輕搖動試管，目測紅細(xì)胞有無凝集，如無凝集，則必須重做；

（5）最后加入Resuspending2 滴，輕輕搖動試管并同時觀察結(jié)果。如果在60 秒內(nèi)凝集散開，代表是由Polybrene 引起的非特異性聚集，配血結(jié)果相合；如凝集不散開，則為紅細(xì)胞抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，配血結(jié)果不相合。如反應(yīng)可凝，可進(jìn)一步倒在玻片上用顯微鏡觀察。人類ABO 血型抗體是以天然IgM 類血型抗體為主（包括MN、P 等血型抗體），這種血型抗體在室溫鹽水介質(zhì)中與對應(yīng)的紅細(xì)胞抗原相遇，出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集反應(yīng)，或激活補(bǔ)體，導(dǎo)致紅細(xì)胞膜損傷，出現(xiàn)溶血。進(jìn)行交叉配血試驗時，觀察受血者血清與供血者紅細(xì)胞以及受血者紅細(xì)胞與供血者血清之間有無凝集和溶血現(xiàn)象，判斷供、受者之間有無ABO 血型不相合的情況。

2 討論

2.1 Rh 血型抗原的檢測結(jié)果是R1R2，D 抗原陽性；C 抗原陽性；c 抗原陰性；E 抗原陰性；e 抗原陽性。由于患者反復(fù)多次輸血，E 抗體的產(chǎn)生猜測是因為輸注了E 抗原陽性的血液，但不排除溫自身抗體。如果開展Rh 血型抗原檢測，其可以對D、E、C、e、c 五種抗原進(jìn)行準(zhǔn)確檢測，對病人進(jìn)行同型輸注，可避免患者在異體輸血的過程中因D、E、C、e、c 五種抗原的刺激產(chǎn)生相應(yīng)的免疫性抗體，從而避免溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生。

2.2 在篩血的前提下，病人交叉配型的結(jié)果是凝聚胺法主側(cè)、次側(cè)均無凝集無溶血；微柱凝膠法主側(cè)無凝集無溶血，次側(cè)有凝集無溶血；由此結(jié)果可以推出凝聚胺法無法檢出IgG 型的抗體，也說明凝聚胺法檢測存在一定的缺陷。國內(nèi)報道的抗-E 抗體幾乎都有明顯的抗原刺激過程，本文結(jié)果再次提示 ，為確保輸血安全，交叉配血所用試驗一定要真正能檢出IgG 抗體。Rh 血型抗原檢測能避免因相應(yīng)抗原刺激產(chǎn)生抗體，再次保證輸血的安全性。

2.3 如果是因為不規(guī)則抗體篩選試驗陽性而導(dǎo)致的交叉配型(抗人球蛋白法)次側(cè)凝集，則取經(jīng)過篩查后的血樣與患者做血交叉試驗，理論上結(jié)果應(yīng)該是無凝集無溶血的，但試驗實際結(jié)果是主側(cè)無凝集無溶血，次側(cè)有凝集無溶血（微柱凝膠法），由此可以得出本次實驗現(xiàn)象的發(fā)生不是由于不規(guī)則抗體篩選試驗陽性引起，而是由于C 抗原e 抗原引起的。

3 結(jié)論

為了增加患者血液輸注的安全性，故建議各醫(yī)院輸血科對患者血型以及科室?guī)齑娴拇l(fā)血樣開展Rh 血型表型的檢測；對于暫時沒有開展Rh 血型表型檢測的醫(yī)院在遇到上述類似病例時，建議在完成凝聚胺法血交叉試驗后加做微柱凝膠法血交叉試驗，以彌補(bǔ)凝聚胺法無法檢出IgG 型的抗體的缺陷，減少溶血性輸血反應(yīng)的發(fā)生。