腫瘤組織LVD 和D2-40 與早期結直腸癌淋巴結轉移的相關性研究

張偉林

（桂林市中西醫結合醫院，廣西 桂林）

0 引言

結直腸癌的發生發展不僅意味著腫瘤增生增大，累及周圍組織和器官，而且伴隨腫瘤細胞的轉移[1]。淋巴結轉移是結直腸癌常見的轉移途徑[2]。研究結直腸癌周圍淋巴管分布的密度與淋巴結轉移的關系，可為術中淋巴結清掃和根治性手術范圍的確定提供重要的依據[3]。本研究旨在探討腫瘤組織LVD 和D2-40 與早期結直腸癌淋巴結轉移的相關性。

1 資料與方法

1.1 基本資料

收集我院2014 年1 月至2019 年12 月存檔組織石蠟標本，其中直腸癌標本60 例，男患者35 例，女患者25 例，年齡范圍為29-82 歲，平均年齡為（53.55±10.53）歲，腫瘤直徑≤=4.5cm 32例，＞4.5cm 28 例；腫瘤位置在高位者11 例，中位者26 例，低位者23 例；高分化腺癌12 例，中分化腺癌28 例，低分化腺癌20 例；累及黏膜、黏膜下層、肌層者15 例，累及漿膜及漿膜外45 例；淋巴轉移者18 例，無轉移42 例；遠處轉移者6 例，無遠處轉移者54 例。另外收集60 例距離腫瘤10cm 的組織，以此作為健康對照組。

1.2 方法

均切片3um，通過免疫組化SP 法檢測D2-40 單克隆抗體表達，標記微淋巴管密度。具體步驟如下：切片，二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，過氧化氫抑制內源性過氧化物酶10 分鐘，PBS 浸洗3 次，每次3 分鐘，滴加D2-40 單克隆抗體，37℃孵育30 分鐘至1 個小時，PBS 浸洗3 次，每次3 分鐘；滴加多聚物酶標記的二抗，37℃孵育30 分鐘至1 個小時，PBS 浸洗3 次，每次3 分鐘；0.05%DBA＋0.03%過氧化氫顯色8-15 分鐘，流水沖洗，蘇木素復染，微波藍染；梯度乙醇脫水，二甲苯浸洗固定，樹脂封片，光學顯微鏡下觀察并計數。

1.3 觀察指標

比較兩組標本組織的D2-40 標記LMVD，分析結直腸癌邊緣區和病理特征的關系。D2-40 陽性染色的位置在淋巴管內皮細胞胞膜、細胞質，顯色棕黃色，呈顆粒狀。根據Weidner 方法對LMVD 進行計數。采用200*（0.74mm2）的顯微鏡計數LMVD，每個患者計數3 個區域，取其平均值。

1.4 統計學方法

采用SPSS 20.0 統計學軟件進行統計分析，對正態分布的數據進行t 檢驗，對非正態分布的數據進行卡方檢驗，采用平均數±標準差的形式表示數據的分布趨勢，P＜0.05 表示數據的比較差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 比較兩組標本組織的D2-40 標記LMVD

根據表1 分析，在腫瘤組織中，微淋巴管分布在腫瘤邊緣和腫瘤中心，分布的位置和形態差異明顯。與對照組對比，結直腸癌組分布的微淋巴管數目LMVD 明顯更多，P＜0.05；與腫瘤的中心對比，腫瘤邊緣的微淋巴管數目明顯更多，P＜0.05，如表1。

表1 比較兩組標本組織的D2-40 標記LMVD

2.2 分析結直腸癌邊緣區和病理特征的關系

根據表2 分析，結直腸癌邊緣區高LMVD 和腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移、遠處轉移、Dukes 分期密切相關。與性別、年齡、腫瘤直徑、分布位置、分化程度無明顯關系，見表2。

表2 分析結直腸癌邊緣區和病理特征的關系

3 討論與結論

腫瘤大小和淋巴結轉移是影響患者預后的重要因素，小于4cm的腫瘤對生存率無明顯影響，但淋巴結的轉移比腫瘤大小更為重要[4]。結直腸癌淋巴結有無轉移直接影響了外科手術治療效果、患者的預后和生存率[5]。據研究[6]，在常規病理檢查無淋巴結轉移的II 期患者中，20%死于復發，如果有淋巴結轉移，復發比例將會更高。本研究顯示，在腫瘤組織中，微淋巴管分布在腫瘤邊緣和腫瘤中心，分布的位置和形態差異明顯。與對照組對比，結直腸癌組分布的微淋巴管數目LMVD 明顯更多，P＜0.05；與腫瘤的中心對比，腫瘤邊緣的微淋巴管數目明顯更多，P＜0.05。結直腸癌邊緣區高LMVD 和腫瘤浸潤深度、淋巴結轉移、遠處轉移、Dukes 分期密切相關。與性別、年齡、腫瘤直徑、分布位置、分化程度無明顯關系。隨著病變的發展，腫瘤增大，浸潤加深，結直腸癌從B 期到C 期或從C 期轉到D 期，淋巴結的轉移率也隨之增高[7]。腫瘤組織一旦侵及漿膜層，大大增加淋巴結和遠處轉移發生的可能性。本研究表明，腫瘤的分期與淋巴結轉移有關。據研究[8]，侵及漿膜層的結直腸癌，發生淋巴結轉移為38%，如加上淋巴管受侵發生淋巴結轉移為66%。

綜上所述，結直腸癌邊緣區高LMVD 和腫瘤淋巴結轉移存在密切的關系，在結直腸癌淋巴結轉移的過程中，淋巴管生成起到重要的推動作用。