哮喘及COPD患者血清觸珠蛋白、血紅素結(jié)合蛋白的表達(dá)及相關(guān)性

楊旭 宋磊 張海燕 李丹

(吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科，吉林 長(zhǎng)春 130021)

支氣管哮喘(哮喘)和慢性阻塞性肺疾病(COPD)均為常見(jiàn)的呼吸系統(tǒng)疾病，臨床表現(xiàn)以喘息、咳嗽、呼吸困難為主。哮喘是多種細(xì)胞及細(xì)胞組分參與的氣道慢性炎癥，常伴有氣道高反應(yīng)性，且氣流受限多為可逆性。CODP與吸入有害氣體及有害顆粒的異常炎癥反應(yīng)有關(guān)，其特征是持續(xù)性、進(jìn)行性發(fā)展的氣流受限。復(fù)雜的發(fā)病機(jī)制及相似的臨床表現(xiàn)導(dǎo)致二者的鑒別十分困難。作為急性期反應(yīng)蛋白血清觸珠蛋白(Hp)、血紅素結(jié)合蛋白(Hpx)含量在感染應(yīng)激時(shí)顯著升高〔1〕，研究表明Hp、Hpx可能參與機(jī)體的炎癥反應(yīng)，其血清含量在哮喘及COPD患者中均有不同程度的改變〔2〕。本研究通過(guò)檢測(cè)血清Hp、Hpx濃度，探索其對(duì)哮喘和COPD的診斷價(jià)值及與臨床指標(biāo)的相關(guān)性。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象 選取吉林大學(xué)白求恩第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科住院哮喘患者47例(哮喘組)及COPD患者52例(COPD組)。哮喘組及COPD組均符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的哮喘及COPD診斷標(biāo)準(zhǔn)〔3，4〕。健康對(duì)照組選取門(mén)診體檢健康志愿者45例；受試者均排除嚴(yán)重心、肝、腎疾病，自身免疫性疾病，精神疾病等引起氣流受限的疾病。3組一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。

表1 3組一般資料比較

1.2Hp、Hpx測(cè)定方法 抽取所有研究對(duì)象空腹肘靜脈血5 ml，室溫下靜置15～30 min至血液凝固，3 000 r/min離心15 min，收集上清液保存于-80℃冰箱。測(cè)定時(shí)將樣品放于冰上解凍，檢驗(yàn)步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明操作。主要試劑和儀器有Hp、Hpx酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒(Abcam 英國(guó))、多功能酶標(biāo)儀 SynergH1 Hybrid Reader(Bio-Tek公司美國(guó))、BNⅡ全自動(dòng)蛋白分析儀(Sismens Healthcare 德國(guó))。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0軟件進(jìn)行獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)、Logistic回歸分析，根據(jù)受試者工作特征(ROC)曲線評(píng)價(jià)Hp、Hpx對(duì)哮喘及COPD的診斷意義。

2 結(jié) 果

2.1各組血清Hp、Hpx表達(dá)水平比較 血清Hp、Hpx含量哮喘組顯著高于COPD組及健康對(duì)照組(P<0.001)，COPD組顯著高于健康對(duì)照組(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 3組Hp、Hpx表達(dá)水平比較

與健康對(duì)照組比較：1)P<0.05;與COPD組比較：2)P<0.05

2.2單項(xiàng)生物標(biāo)志物檢測(cè)對(duì)疾病診斷意義 血清Hp、Hpx單項(xiàng)及聯(lián)合檢測(cè)的特異性、靈敏度及ROC曲線下面積(AUC)及臨界值見(jiàn)表3。(1)Hp：在診斷哮喘時(shí)比Hpx表現(xiàn)出更高的靈敏度；在診斷COPD時(shí)表現(xiàn)出更好的診斷價(jià)值；但在鑒別CODP與哮喘時(shí)沒(méi)有表現(xiàn)出最佳的診斷意義、特異性和靈敏度。(2) Hpx：在診斷哮喘時(shí)比Hp更具有診斷價(jià)值及特異性；在診斷COPD時(shí)，其特異性與Hp相似；在鑒別COPD與哮喘方面，Hpx的診斷意義、特異性及靈敏度均較Hp高。

表3 各組間單項(xiàng)及組合標(biāo)志物診斷價(jià)值

2.3多項(xiàng)生物標(biāo)志物檢測(cè)對(duì)疾病診斷意義 血清Hp、Hpx聯(lián)合檢測(cè)的特異性、靈敏度及AUC見(jiàn)表3，表中兩種標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)其診斷意義均優(yōu)于單項(xiàng)標(biāo)志物。(1)哮喘組與健康對(duì)照組：Hp、Hpx聯(lián)合檢測(cè)在哮喘與健康對(duì)照組鑒別時(shí)較單項(xiàng)標(biāo)志物具有最大的AUC、更高的靈敏度及特異性。(2) COPD組與健康對(duì)照組：Hp、Hpx聯(lián)合檢測(cè)在COPD與健康對(duì)照組鑒別時(shí)更具診斷意義及靈敏度，但沒(méi)有表現(xiàn)出突出的特異性。(3) 哮喘組與COPD組：Hp、Hpx聯(lián)合檢測(cè)在哮喘組與COPD組表現(xiàn)出最佳的診斷價(jià)值及更高的特異性。

3 討 論

生物標(biāo)志物被定義為細(xì)胞內(nèi)的生物化學(xué)組分、結(jié)構(gòu)或功能，能夠客觀測(cè)量和評(píng)估的指標(biāo)。因其具有較高的敏感性、較強(qiáng)的特異性和較好的穩(wěn)定性被廣泛研究。通過(guò)對(duì)生物標(biāo)志物的檢測(cè)，能夠判斷疾病的病理生理過(guò)程、發(fā)生發(fā)展、治療及預(yù)后等〔5〕。本研究通過(guò)檢測(cè)血清Hp和Hpx在各研究組中的濃度含量不同，探討其對(duì)哮喘及COPD的診斷價(jià)值。

Hp又稱結(jié)合珠蛋白，其主要作用是與游離血紅蛋白(Hb)結(jié)合形成 Hp-Hb復(fù)合物，Hb通過(guò)釋放游離鐵和亞鐵血紅素參與氧化反應(yīng)導(dǎo)致機(jī)體損傷。研究表明在肺損傷中幾乎都存在紅細(xì)胞外滲到肺組織引起氧化損傷，Hp與Hb結(jié)合能夠減少這一損傷〔6，7〕。Hp作為一種急性期蛋白，在感染、炎癥、應(yīng)激時(shí)，血清濃度及合成水平明顯升高，表明其具有重要的生理作用〔8〕。葉青等〔9〕研究發(fā)現(xiàn)COPD患者合并肺部感染時(shí)Hp含量較正常個(gè)體升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明其作為生物標(biāo)志物對(duì)疾病的診斷有著良好的檢測(cè)意義。本研究結(jié)果說(shuō)明Hp在哮喘及COPD尤其是COPD診斷時(shí)具有可參考的診斷價(jià)值。

Hpx是由肝臟合成的急性期反應(yīng)蛋白，其主要生理功能是清除有害的游離血紅素，證據(jù)表明游離血紅素與溶血性疾病、敗血癥、肺部炎癥等疾病有關(guān)，Hpx與其結(jié)合后能夠減少游離血紅素對(duì)機(jī)體造成的氧化損傷〔10〕。Verrills等〔11〕研究發(fā)現(xiàn)慢性鈹塵病導(dǎo)致的肺部炎癥患者肺泡灌洗液中Hpx水平升高。本研究結(jié)果提示Hpx是本研究標(biāo)志物中診斷價(jià)值最高的。

研究表明多種生物標(biāo)志物的聯(lián)合檢驗(yàn)比單一標(biāo)志物具有更好的臨床價(jià)值〔11〕。對(duì)Hp及Hpx聯(lián)合檢測(cè)診斷哮喘及COPD的價(jià)值進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，兩種聯(lián)合檢驗(yàn)比單項(xiàng)標(biāo)志物的特異性和靈敏度更高，且其AUC也是最大，這說(shuō)明兩種標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)最具有診斷價(jià)值。

本研究從生物標(biāo)志物檢測(cè)及聯(lián)合檢測(cè)的角度，對(duì)哮喘和COPD的診斷及兩者的鑒別進(jìn)行了有益的探討，由于收集的樣本量較少，所獲得的結(jié)果有一定局限性，有待于進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)證實(shí)；Hp、Hpx為何在哮喘及COPD表達(dá)不同、穩(wěn)定期表達(dá)水平是否與急性期一致均有待于深入的研究探討，得到的結(jié)果有望應(yīng)用于哮喘或COPD的治療的幫助。