實(shí)時熒光定量PCR 檢測妊娠晚期孕婦B 族鏈球菌感染的臨床分析

陳柳玲 袁美英 張志 潘繼釗

B族鏈球菌屬于兼性厭氧革蘭陽性鏈球菌,絕大多數(shù)寄生在下消化道和泌尿生殖道內(nèi),是一種條件致病菌,同時也是圍生期孕婦感染的重要致病菌［1,2］。孕婦感染后可以經(jīng)過產(chǎn)道向新生兒傳播,因而有必要注意新生兒B族鏈球菌感染的途徑,即注意觀察母嬰垂直傳播［3］。B族鏈球菌感染會造成孕產(chǎn)婦發(fā)生產(chǎn)褥感染、羊膜絨毛膜炎、泌尿系統(tǒng)感染等,并且與新生兒敗血癥、胎膜早破、早產(chǎn)有一定的相關(guān)性［4］。作者通過分析2017 年6 月～2019 年2 月東莞市黃江醫(yī)院就診的60 例妊娠晚期孕婦的臨床資料,擬探討實(shí)時熒光定量PCR 檢測妊娠晚期孕婦B 族鏈球菌感染的臨床價值,現(xiàn)將研究結(jié)果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017 年6 月～2019 年2 月東莞市黃江醫(yī)院就診的60 例妊娠晚期孕婦作為觀察對象,年齡19～46 歲；其中≤24 歲10 例、25～39 歲41 例、≥40歲9例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①孕婦既往沒有不良的孕育史；②孕婦無并發(fā)糖尿病。排除標(biāo)準(zhǔn)：①排除取樣前進(jìn)行抗生素治療孕婦；②排除陰道分泌物有衣原體、陰道假絲酵母菌等其他菌群感染者；③排除取樣前24 h 應(yīng)用栓劑或者洗液的孕婦；④排除陰道分泌物涂片不符合本研究要求者。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本的采集 將陰道內(nèi)過多的分泌物擦去,無菌拭子放置在生殖道低位1/3 的位置,逐步旋轉(zhuǎn)1 圈獲取分泌物,然后再將拭子插入到肛門括約肌上方2.5 cm的位置獲取直腸樣本,樣本保持密閉,1 h 內(nèi)送檢。

1.2.2 檢測方法 通過SLAN-965 實(shí)時熒光定量PCR儀和熒光標(biāo)記探針對樣本中B 族鏈球菌進(jìn)行檢測。檢測過程中,采用核酸標(biāo)記熒光染料和尿嘧啶-N-糖基化酶,避免擴(kuò)增產(chǎn)物的污染。檢測試劑盒為福建泰普生物科學(xué)(中國)有限公司生產(chǎn),測定下限值1.0×103copies/ml,線性范圍為(1.0×103～1.0×108)copies/ml,操作步驟按照說明書嚴(yán)格執(zhí)行。

1.2.3 檢測結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 根據(jù)PCR 儀自帶分析軟件,獲得不同樣本的Ct 值,Ct 值≤23,并且具有很好的對數(shù)增長曲線,結(jié)果判定為B 族鏈球菌感染陽性,Ct 值=30 或者是為Undet,Ct 值＜30 具有很好的對數(shù)增長曲線,結(jié)果判定為B 族鏈球菌感染陰性,23＜Ct 值＜30 時提示結(jié)果檢測為灰區(qū),重復(fù)性檢測,確認(rèn)結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)

1.3.1 觀察不同年齡段(≤24 歲、25～39 歲、≥40 歲)B族鏈球菌陽性率。

1.3.2 妊娠晚期孕婦妊娠結(jié)局 主要包括宮內(nèi)感染、胎兒窘迫、胎膜早破、產(chǎn)后出血、早產(chǎn)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS22.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 不同年齡段孕婦B族鏈球菌陽性率 ≤24 歲孕婦B族鏈球菌陽性率為0,25～39 歲孕婦B族鏈球菌陽性率為31.7%,≥40 歲孕婦B族鏈球菌陽性率為0；25～39 歲孕婦B族鏈球菌陽性率均高于≤24 歲孕婦和≥40 歲孕婦,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.26、3.86,P＜0.05)。見表1。

2.2 妊娠晚期孕婦妊娠結(jié)局 B族鏈球菌陰性組孕婦宮內(nèi)感染發(fā)生率0、胎兒窘迫發(fā)生率4.1%、胎膜早破發(fā)生率0、產(chǎn)后出血發(fā)生率0、早產(chǎn)發(fā)生率0 均低于B族鏈球菌陽性組的15.4%、23.1%、15.4%、15.4%、15.4%,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。見表2。

表1 不同年齡段孕婦B族鏈球菌陽性率(n,%)

表2 60 例妊娠晚期孕婦妊娠結(jié)局［n(%)］

3 討論

目前國內(nèi)研究資料顯示［5］,B族鏈球菌感染是新生兒感染性疾病的主要致病菌。正常部位的B族鏈球菌會逆行到達(dá)胎盤,誘發(fā)炎性細(xì)胞發(fā)揮吞噬作用,降解胎膜蛋白,誘發(fā)B族鏈球菌侵襲胎膜,造成胎膜早破［6］。妊娠晚期孕婦感染B族鏈球菌與很多妊娠并發(fā)癥、新生兒并發(fā)癥有密切關(guān)系,如胎膜早破、早產(chǎn)和子宮內(nèi)膜炎等,為了更好的降低圍生期孕產(chǎn)婦感染B族鏈球菌,美國修訂了圍生期感染B族鏈球菌防治指南［7］。我國也在《孕前和孕期保健指南》中建議孕產(chǎn)婦在35～37 孕周進(jìn)行B族鏈球菌感染篩查［8］。既往的實(shí)驗室檢查方法只是停留細(xì)菌培養(yǎng)上,其檢測時間相對較長,對于培養(yǎng)液的要求也較高,操作相對復(fù)雜。另外還有免疫學(xué)方法,其檢測速度雖然較快,但是其敏感度比較差,臨床上應(yīng)用受到限制。實(shí)時熒光定量PCR是利用熒光標(biāo)記探針,對采集樣本中的B族鏈球菌進(jìn)行檢測,其對于B族鏈球菌特定基因的敏感度和特異度均較高,檢測的周期相對較短,操作比較簡便［9,10］。

本研究對2017 年6 月～2019 年2 月東莞市黃江醫(yī)院就診的60 例妊娠晚期孕婦的臨床資料進(jìn)行分析,結(jié)果顯示,≤24 歲孕婦B族鏈球菌陽性率為0,25～39 歲孕婦B族鏈球菌陽性率為31.7%,≥40 歲孕婦B族鏈球菌陽性率為0；25～39 歲孕婦B族鏈球菌陽性率均高于≤24 歲孕婦和≥40 歲孕婦,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=4.26、3.86,P＜0.05)。由此提示25～39 歲年齡段婦女性生活相對較為活躍,人工流產(chǎn)、妊娠期雌激素水平均較高,誘發(fā)生殖道細(xì)菌微環(huán)境改變。B族鏈球菌陰性組孕婦宮內(nèi)感染發(fā)生率0、胎兒窘迫發(fā)生率4.1%、胎膜早破發(fā)生率0、產(chǎn)后出血發(fā)生率0、早產(chǎn)發(fā)生率0 均低于B族鏈球菌陽性組的15.4%、23.1%、15.4%、15.4%、15.4%,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。由此提示妊娠期陰道B族鏈球菌感染后細(xì)菌會逆行到達(dá)宮腔,誘發(fā)宮內(nèi)感染,細(xì)菌侵入胎盤絨毛,造成絨毛的炎性病變,胎盤功能衰退、老化,發(fā)生胎膜早破、產(chǎn)后出血,胎兒子宮內(nèi)處于慢性缺氧狀態(tài),胎兒子宮腔內(nèi)生長受限,發(fā)生新生兒缺血、缺氧,出現(xiàn)早產(chǎn),影響了妊娠結(jié)局［11,12］。

綜上所述,實(shí)時熒光定量PCR 檢測妊娠晚期孕婦B 族鏈球菌感染情況,可以為改善妊娠結(jié)局提供可靠的理論依據(jù)。