小兒清肺化痰顆粒藥品微生物限度檢查法方法適用性試驗

李許丹 楊蘭蘭 劉環(huán)宇

【摘 要】小兒清肺化痰顆粒是臨床常用藥物，使用受眾廣、頻率高，其藥品質(zhì)量直接關系到小兒患者生命健康。微生物限度檢查法是判定藥品微生物含量的重要方式，檢查方法不同可能會得出不同結論。故此文章將以小兒小兒清肺化痰顆粒作為藥品檢驗樣本，將其分成對照組與試驗組，分別對需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)、大腸埃希菌進行科學試驗，判定能否使用常規(guī)方法進行檢查。

【關鍵詞】小兒清肺化痰顆粒;微生物限度檢查法;微生物限度檢查法

【中圖分類號】R927.1 【文獻標識碼】B 【文章編號】1002-8714（2020）03-0-01

樣品名稱：小兒清肺化痰顆粒 檢驗依據(jù)：《中國藥典》2015年版微生物限度檢查法

批號：15120217;15120317;15120417 規(guī)格： 每袋裝6克

檢驗日期：2015年12月4日 報告日期：2015年12月19日

生產(chǎn)單位：神威藥業(yè)集團有限公司

培養(yǎng)基 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基、沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、麥康凱液體培養(yǎng)基等。

實驗儀器：立式滅菌柜、生化培養(yǎng)箱、隔水式恒溫培養(yǎng)箱、生物安全柜。

1 陽性對照菌菌種

金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26 003] 銅綠假單胞菌 [CMCC（B）10 104]

枯草芽孢桿菌 [CMCC（B）63 501] 白色念珠菌 [CMCC （F） 98 001] 黑曲霉菌? [CMCC（F）98 003] 大腸埃希菌 [CMCC（B）44 102]（菌種來源：中國食品藥品檢定研究院）

對照菌制備：枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉菌采用10倍稀釋法。制備成不大于100cfu/ml的菌懸液備用。

2 試驗方法

通過對曾經(jīng)進行過的方法適用性試驗數(shù)據(jù)進行分析小兒清肺化痰顆粒沒有抑菌性，可采用常規(guī)法進行試驗。

供試液制備：稱取10g，加入pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液至100ml，振搖溶解，混勻制成1︰10的供試液。

2.1需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)檢查

試驗組：取上述供試液9.9ml，共5份，分別加入0.1ml枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、黑曲霉的菌液后搖勻，使供試液的含菌量不大于100cfu/ml，分別從5支試驗組試管中吸取2ml供試液加入2個平皿中，每皿1ml，傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基;另從加入白色念珠菌、黑曲霉的菌液的試管中分別吸取2ml供試液加入2個平皿中，每皿1ml。傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，搖勻。

供試品對照組：吸取上述1 ：10供試液4ml分別加入4個平皿中，每皿1ml，2個平皿傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，2個平皿傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，搖勻。

菌液組：吸取pH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液9.9ml，每份中加入與試驗組相同的菌懸液后搖勻，操作同試驗組。

培養(yǎng)計數(shù)：將胰酪大豆胨瓊脂平皿放入30-35℃培養(yǎng)箱，沙氏葡萄糖瓊脂平皿放入20-25℃培養(yǎng)箱進行培養(yǎng)，需氧菌不超過3天，霉菌和酵母菌培養(yǎng)不超過5天，在3天和5天分別進行計數(shù)。

批號15120217需氧菌總數(shù)計數(shù)：

陽性菌 代數(shù) 陽性菌數(shù)cfu/ml 供試品+陽性菌 供試品 回收率

1 2 均值 1 2 均值 1 2 均值

霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)：

同法操作，批號15120317需氧菌總數(shù)計數(shù)：枯草芽孢桿菌的回收率：1.03、金黃色葡萄球菌的回收率：0.86、銅綠假單胞菌的回收率：0.71、白色念珠菌的回收率：0.95、黑曲霉菌的回收率：1.01。

霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)：白色念珠菌的回收率：0.88、黑曲霉菌的回收率：0.80。

批號15120417需氧菌總數(shù)計數(shù)：枯草芽孢桿菌的回收率：0.93、金黃色葡萄球菌的回收率：0.86、銅綠假單胞菌的回收率：0.76、白色念珠菌的回收率：0.96、黑曲霉菌的回收率：0.80。

霉菌和酵母菌總數(shù)計數(shù)：白色念珠菌的回收率：0.68、黑曲霉菌的回收率：0.97。

從上述結果可以看出：采用常規(guī)法檢驗供試品，人工污染5株代表菌株，該供試品對銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌的回收率試驗均在0.5-2范圍內(nèi)，方法適用。

2.2大腸埃希菌檢查

試驗組：取1：10供試液10ml和不大于100cfu的大腸埃希菌置100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。

供試品對照組：照試驗組，不加菌液作為供試品對照組。

菌液組：照試驗組，不加供試液作為菌液對照組。

陰性對照組：取10mlpH7.0氯化鈉-蛋白胨緩沖液加入到100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。

培養(yǎng)判斷：上述制備好的胰酪大豆胨液體培養(yǎng)物置33℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18小時后，分別取上述培養(yǎng)物1mL接種至100ml麥康凱液體培養(yǎng)基中，42-44℃培養(yǎng)24小時。取麥康凱液體培養(yǎng)物劃線接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基平板上，33℃培養(yǎng)18小時。若麥康凱瓊脂平板上有菌落生長，且試驗組菌落形態(tài)與菌液對照組相同，則判斷試驗組大腸埃希菌檢出;若試驗組無菌生長或與菌液組菌落形態(tài)不同，則判定試驗組大腸埃希菌未檢出，應消除供試品的抑菌活性，并重新進行方法適用性試驗。結果如下：

從上述結果判斷：試驗組檢出試驗菌，通過控制菌檢查方法適用性試驗表明，常規(guī)法可用于進行供試品的大腸埃希菌檢查。

3 結論

根據(jù)驗證實驗結果確定，小兒清肺化痰顆粒在微生物限度檢查時需氧菌總數(shù)、霉菌和酵母菌總數(shù)、大腸埃希檢查均可采用常規(guī)法進行檢查。

參考文獻

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