河南省豬球蟲感染情況及種類鑒定

程俊貞，劉光輝，班付國，房大學(xué)，趙勝杰

（1.許昌市動物疫病預(yù)防控制中心，河南 許昌 461000；2.河南省動物疫病預(yù)防控制中心，鄭州 450008）

仔豬球蟲病是由豬等孢球蟲（Isospora suis）和某些艾美耳屬（Eimeria）球蟲寄生在哺乳期及新近斷奶仔豬小腸上皮細胞所引起一種寄生性原蟲病，臨床上以腹瀉為主要癥狀[1-2]。哺乳仔豬患球蟲病是養(yǎng)豬場的常見問題[3]。發(fā)病主要出現(xiàn)在8～15日齡仔豬，感染日齡越小，病情越嚴(yán)重[3-4]。發(fā)病仔豬出現(xiàn)腹瀉，糞便黃色到灰色，開始時糞便松軟或呈糊狀，隨著病情加重變?yōu)橐籂睿⑶野l(fā)出腐敗乳汁樣酸臭味。吮乳減少，被毛粗亂，脫水，增重下降，因而導(dǎo)致新生仔豬死亡率增加，斷奶時營養(yǎng)不良，很多仔豬成了僵豬，給養(yǎng)豬生產(chǎn)造成了很大的經(jīng)濟損失[1，4-6]。

河南省是我國的養(yǎng)豬大省之一，為掌握河南省豬場球蟲感染情況及感染球蟲種類分布，為制定切實可行的預(yù)防措施提供依據(jù)，筆者于2018年8—11月和2019年3—5月選取河南省豫東、豫西、豫南、豫北和豫中部分市縣的25個規(guī)模化豬場及專業(yè)戶和6個農(nóng)村散養(yǎng)戶豬球蟲感染情況和種類分布情況進行了初步調(diào)查，其結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 飽和糖-鹽水溶液：380 g氯化鈉與500 g蔗糖溶解于1 L水中，加熱溶解，冷卻備用。比重為1.226。

1.1.2 器材 顯微鏡、80目金屬篩、130目金屬篩、漏斗、離心機、鐵架臺、天平、燒杯、玻璃棒、蓋玻片、載玻片、膠頭滴管、冰箱等。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集 采用直腸取糞法，采集1～10日齡、11～20 日齡、21～30 日齡、31～40 日齡的仔豬及41日齡以上仔豬、肥育豬等糞樣或收集剛排出的新鮮糞便約50～100 g，分別裝入干凈塑料袋中，標(biāo)注豬場名稱、編號、豬的年齡，置4℃冰箱內(nèi)備查。

1.2.2 定性檢查卵囊 用飽和糖-鹽水溶液漂浮法檢查球蟲卵囊。取2 g糞便樣品，用10 mL自來水?dāng)嚢杈鶆蚝螅偌尤?0 mL自來水?dāng)嚢杈鶆颍?0目和130目金屬篩雙層過濾，將濾液置于離心管中以3 000 r/min離心10 min，取出離心管棄去上清液，之后再加入50 mL左右飽和糖-鹽水溶液，用干凈的玻璃棒攪拌均勻，再以3 000 r/min離心10 min，然后用吊環(huán)吊一環(huán)上清液涂片，在高倍顯微鏡（400×）下觀察，根據(jù)卵囊大小、形態(tài)進行查找。

1.2.3 卵囊收集 用飽和糖-鹽水溶液漂浮法收集球蟲卵囊。將陽性糞樣加4～5倍量水?dāng)嚢杈鶆颍谘b有80目和130目雙層金屬篩的漏斗中過濾，將濾液置于離心管中以3 000 r/min離心10 min，取出離心管棄去上清液，再加入50 mL左右飽和糖-鹽水溶液用干凈的玻璃棒攪拌均勻，再以3 000 r/min離心10 min，然后用專門收集卵囊用的鐵絲圈網(wǎng)多次蘸取上層表面液在裝有100 mL左右自來水的燒杯中涮洗，即將卵囊收集到燒杯中制成卵囊混懸液；再將卵囊混懸液以3 000 r/min離心10 min，取出離心管棄去上清液，離心管中便為球蟲卵囊。

1.2.4 卵囊培養(yǎng) 將收集到的球蟲卵囊加入2.5%重鉻酸鉀溶液，取1～2滴收集的新鮮卵囊液置于18 mm×18 mm蓋玻片上，再覆以同樣大小蓋玻片，四周用凡士林封閉后置載玻片上，28℃恒溫箱中培養(yǎng)，每隔2 h用顯微鏡（400×）觀察其孢子化程度，記錄結(jié)果并顯微拍照。其余卵囊置平皿于27～28℃的恒溫箱中培養(yǎng)觀察直至80%卵囊完全孢子化，期間保持深度0.5 cm，每天用吸管吹打2～3次，計數(shù)后置于4℃冰箱中保存。

1.2.5 球蟲種類鑒定 用Miaspro圖象分析處理系統(tǒng)測量卵囊、卵囊質(zhì)、孢子囊的大小及卵囊周長、面積、形狀因子（卵囊長度∶卵囊寬度）等，結(jié)合卵囊形態(tài)、孢子囊、子孢子的形態(tài)結(jié)構(gòu)及個數(shù)，參照有關(guān)文獻進行蟲種鑒定[1-2，7-11]。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬場及散養(yǎng)戶豬球蟲感染情況

調(diào)查商丘、漯河、許昌、禹州、洛陽、新安、偃師、宜陽、鄭州、淇縣、鶴壁、嵩縣、伊川、汝陽等14個地、市縣的25個具有代表性的規(guī)模化豬場及專業(yè)戶和6個地市農(nóng)村散養(yǎng)戶豬，共檢查2 051份樣品，除了偃師某豬場2和偃師散養(yǎng)戶的球蟲感染為陰性，其余豬場的豬球蟲感染均為陽性。感染日齡主要集中在11～20日齡，豬場陽性率為61.29%，球蟲的最高感染率為83.33%，平均感染率為23.29%；其次在1～10日齡，豬場陽性率為41.94%，球蟲的最高感染率為66.67%，平均感染率為17.71%；在21～30日齡，豬場陽性率為35.48%，球蟲的最高感染率為85.71%，平均感染率為13.35%；在31～40日齡，豬場陽性率為38.71%，球蟲的最高感染率為80.00%，平均感染率為7.04%；在41日齡以上豬場陽性率也為48.39%，球蟲的最高感染率為37.50%，平均感染率為7.95%。詳見表1。

表1 豬場及散養(yǎng)戶豬球蟲感染情況

表1 豬場及散養(yǎng)戶豬球蟲感染情況（續(xù)）

2.2 球蟲種類鑒定結(jié)果

從卵囊形態(tài)結(jié)構(gòu)、大小以及子孢子的形態(tài)結(jié)構(gòu)、大小及個數(shù)經(jīng)過初步分離和鑒定，鑒定出河南省25個豬場及專業(yè)戶和6個地市的散養(yǎng)戶豬感染的球蟲有2個屬8種，分別是豬等孢球蟲（Isospora suis）、楊陵艾美耳球蟲新種（Eimeria yanglingensissp.Nov.）、種豬艾美耳球蟲（E.porci）、蒂氏艾美耳球蟲（E.debliecki）、豬艾美耳球蟲（E.suis）、極細艾美耳球蟲（E.perminuta）、粗糙艾美耳球蟲（E.scabra）和新蒂氏艾美耳球蟲（E.neodebliecki）。

2.2.1 8種球蟲特征及其感染率

豬的8種孢子化球蟲卵囊見圖1。

（1）豬等孢球蟲（I.suis Biester，1934，圖 1-1）。卵囊呈球形、亞球形或卵圓形，黃褐色或無色，卵囊壁光滑且較薄，無色，孢子形成后的卵囊壁常皺裂，無卵膜孔。卵囊的大小為 19.549～29.428 μm×15.746～22.273 μm， 平均為 20.976 μm×18.648 μm；面積為 276.684～354.768 μm2， 平均面積為 304.562 μm2；周長為 52.469～68.264 μm，平均周長為 60.584 μm；形狀因子為 1.000～1.236，平均為 1.118。 壁厚1.2～1.6 μm，平均 1.4 μm；無極粒，無卵囊余體，孢子化的卵囊內(nèi)有2個孢子囊，孢子囊呈圓形或橢圓形，大小為 12.4～17.2 μm×9.6～11.6 μm，平均 15.4 μm×12.8 μm，形狀指數(shù)為1.11～1.25，平均為1.18。孢子囊余體呈顆粒狀，位于孢子囊一端，無斯氏體。每個孢子囊內(nèi)有4個子孢子，子孢子呈臘腸形或香蕉形，鈍端有一折光球。豬場感染率為80.65%。

（2）楊陵艾美球蟲新種（E.yanglingensis sp．Nov．，圖1-2）。卵囊窄長，似長圓柱狀，有的兩端大小略有差異，但卵囊對稱。卵囊壁兩層，較厚，淡黃色，無卵膜孔。 卵囊的大小為 32.216～35.624 μm×14.633～21.422 μm，平均為 33.976 μm×17.648 μm；面積為324.658～426.265 μm2， 平均面積為 384.226 μm2；周長為 58.354～71.225 μm，平均周長為 64.259 μm；形狀因子為1.926～2.124，平均為2.054。無卵囊殘體，有極粒。孢子化卵囊內(nèi)有4個孢子囊，孢子囊對稱，長卵圓形， 大小為 9.26～19.6 μm×5.21～6.98 μm，平均 17.4 μm×6.4 μm，形狀指數(shù)為 1.5～3.4，平均為 2.64。每個孢子囊有2個子孢子，子孢子呈香蕉形，2個子孢子頭尾并列于孢子囊內(nèi)。豬場感染率為51.61%。

（3）種豬艾美爾球蟲（E.porci Vetterling，1965，圖1-3）。卵囊橢圓形。壁光滑，黃褐色或無色，由兩層構(gòu)成，無卵膜孔。卵囊的大小為18.236～24.568 μm×13.562～17.364 μm， 平均為 22.164 μm×16.015 μm；面積為 278.324～326.263 μm2， 平均面積為 295.364 μm2；周長為 46.358～61.268 μm，平均周長為 54.362 μm；形狀因子為1.264～1.646，平均為1.424。 缺外殘體，有一個極粒。孢子化的卵囊內(nèi)有4個孢子囊，孢子囊寬卵圓形，內(nèi)殘體由細顆粒構(gòu)成，位于兩子孢子之間，成條狀或三角形排列。孢子囊大小為8.9～11.2 μm×6.48～7.36 μm，平均 9.7 μm×6.84 μm，形狀指數(shù)為1.46～1.58，平均為1.52。豬場感染率為38.71%。

（4）蒂氏艾美耳球蟲（E.debliecki Douwes，1921，圖1-4）。卵囊常呈橢圓形、圓柱狀。壁光滑，淡黃色，由兩層構(gòu)成，厚約（1.4±0.2）μm。無卵膜孔和外殘體，但有明顯的極粒。卵囊的大小為23.568～31.216 μm×19.364～24.649 μm，平均為 28.684 μm×22.569 μm；面積為 326.128～402.364 μm2， 平均面積為 346.892 μm2；周長為 54.633～66.326 μm，平均周長為 58.467 μm；形狀因子為 1.248～1.626，平均為 1.496。 孢子化的卵囊內(nèi)有4個孢子囊，孢子囊為不對稱的長卵圓形，一邊較為平直，另一邊呈弧形；孢子囊大小為13.8～21.4 μm×5.8～7.9 μm，平均 18.2 μm×6.8 μm，形狀指數(shù)為2.24～2.98，平均為2.64。豬場感染率為51.61%。

（5）豬艾美耳球蟲（E.suis Noller，1921，圖 1-5）。卵囊為圓形或亞球形。壁光滑，由兩層構(gòu)成，厚約0.15 μm，黃褐色。無極帽和外殘體，有極粒。卵囊的大小為 16.863～22.658 μm×11.364～17.364 μm，平均為 20.364 μm×16.224 μm； 面積為 289.364～346.269 μm2， 平均面積為 324.368 μm2； 周長為 47.694～62.354 μm， 平均周長為 56.354 μm； 形狀因子為1.256～1.342，平均為1.294。孢子化的卵囊內(nèi)有4個孢子囊，孢子囊卵圓形，大小為 9.4～11.2 μm×6.8～8.1 μm，平均 10.8 μm×7.4 μm，形狀指數(shù)為 1.24～1.68，平均為1.49。豬場感染率為38.71%。

（6）極細艾美耳球蟲（E.perminuta Henry，1931，圖1-6）。卵囊呈圓球形或亞球形。壁粗糙，由兩層構(gòu)成，淡黃色。無卵膜孔，有極粒，但無外殘體。卵囊的大小為 14.684～17.224 μm×11.367～15.694 μm，平均為 16.326 μm×13.242 μm； 面積為 249.564～298.368 μm2，平均面積為 286.324 μm2； 周長為 40.335～54.261 μm， 平均周長為 50.468 μm； 形狀因子為1.038～1.226，平均為1.148。孢子化的卵囊內(nèi)有4個孢子囊，孢子囊近似橢圓形，大小為6.8～8.2 μm×4.4～6.2 μm，平均 7.8 μm×5.3 μm，形狀指數(shù)為 1.46～1.87，平均為1.57。豬場感染率為32.26%。

（7）粗糙艾美耳球蟲（E.scabra Henry，1931，圖 1-7）。卵囊呈橢圓形。壁粗糙，有輻射狀條紋，呈黃色或黃褐色，厚約2 μm。有顯著的卵膜孔，但無極帽。卵囊的大小為 32.664～34.469 μm×21.652～24.649 μm，平均為 32.623 μm×23.465 μm；面積為 346.846～426.364 μm2，平均面積為 384.669 μm2；周長為 56.354～65.394 μm，平均周長為61.258 7 μm；形狀因子為1.324～1.548，平均為1.432。孢子化的卵囊內(nèi)有4個孢子囊，具極粒，無外殘體。孢子囊長卵圓形，大小為13.8～19.2 μm×6.4～9.8 μm，平均 16.4 μm×8.4 μm，形狀指數(shù)為1.68～2.24，平均為1.86。豬場感染率為32.26%。

（8）新蒂氏艾美耳球蟲（E.neodebliecki Vetterling，1965，圖1-8）。卵囊常呈橢圓形、圓柱狀。壁光滑，黃褐色，由兩層構(gòu)成。無卵膜孔和外殘體，但有明顯的極粒。 卵囊的大小為19.367～23.654 μm×14.325～19.568 μm，平均為 22.364 μm×16.324 μm；面積為 311.684～348.362 μm2，平 均 面 積 為 324.662 μm2； 周 長 為50.364～58.694 μm，平均周長為 56.394 μm；形狀因子為1.248～1.564，平均為1.408。孢子化的卵囊內(nèi)有4個孢子囊，孢子囊長卵圓形，大小為10.658～16.328 μm×5.468～8.624 μm，平均 13.684 μm×6.246 μm，形狀指數(shù)為2.14～2.61，平均為2.34。豬場感染率為35.48%。

2.2.2 不同日齡段感染的球蟲種類 在所有被調(diào)查的豬群中，以11～20日齡段仔豬感染的球蟲種類較多，感染7種；其次在21～30日齡段，感染6種球蟲；再次是在1～10日齡段和41日齡以上，感染5種球蟲；在31～40日齡段感染4種球蟲。其中，I.suis主要感染40日齡以下仔豬；E.yanglingensis sp.則感染10日齡以上豬；E.porci感染10日齡以下和41日齡以上豬；E.debliecki和E.perminuta也主要感染40日齡以下仔豬；E.suis和E.scabra主要感染11～30日齡和41日齡以上豬；E.neodebliecki則感染20日齡以下和41日齡以上豬。詳見表2。

表2 不同日齡段所感染的球蟲種類

2.2.3 不同豬場感染的球蟲種類 在25個豬場及專業(yè)戶和6個地市的散養(yǎng)戶中，豬球蟲多為混合感染，除了12號（偃師某豬場2）和31號（偃師散養(yǎng)戶）無球蟲感染，2號（漯河某豬場）、23號（洛陽專業(yè)戶2）和25號（嵩縣專業(yè)戶）是單一種類感染，其余豬場多是感染3～6種；從各個豬場感染的種類看，河南省豬場感染的球蟲優(yōu)勢種為I.suis，其次是E.yanglingensis sp.、E.debliecki。 詳見表 3。

表3 不同豬場所感染的球蟲種類

3 結(jié)論與討論

3.1 豬球蟲病在河南省普遍存在

在25個豬場及專業(yè)戶和6個地市的散養(yǎng)戶中，除了12號豬場（偃師某豬場2）和31號（偃師散養(yǎng)戶）的球蟲感染為陰性，其余豬場的豬球蟲感染均為陽性。在陽性場中，豬球蟲感染率可高達40.43%（淇縣某豬場3）和35.29%（淇縣某豬場1），感染率最低為0.84%（洛陽某豬場），平均感染率為12.14%；說明豬球蟲病在河南廣泛存在，而且感染率挺高。在所有被調(diào)查的豬場中，散養(yǎng)戶的平均感染率為11.91%，而豬場的平均感染率則為12.54%，說明與散養(yǎng)戶相比，豬場的球蟲感染率較高，其原因可能是豬場的養(yǎng)殖密度大，豬球蟲更易傳播。說明豬球蟲的傳播與養(yǎng)殖密度也相關(guān)，養(yǎng)殖密度大，豬群之間更易接觸，給豬球蟲的傳播創(chuàng)造有利條件；反之亦然。

3.2 不同日齡豬感染率不同，11～20日齡仔豬球蟲感染率最高

調(diào)查和試驗結(jié)果表明：豬球蟲主要感染1～20日齡仔豬，尤其是11～20日齡的仔豬，感染率為23.29%，最高感染率可達83.33%，21日齡以后感染率逐漸降低；等孢球蟲感染日齡也主要集中在11～20日齡，感染率為19.52%，最高感染率為66.67%；41日齡以上則不易感，調(diào)查的結(jié)果是41日齡以上感染率為0。據(jù)有關(guān)資料報道：仔豬球蟲感染以8～15日齡為主[3-4]。本研究結(jié)果與之相比，易感日齡有擴大化的趨勢，說明仔豬年齡越小，對球蟲越易感。

3.3 豬場感染球蟲種類較多，其中豬等孢球蟲為優(yōu)勢蟲種和主要致病種

據(jù)周繼賢等[9]1996報道：河南共感染8種球蟲，分別是豬等孢球蟲（Isospora suis）、有刺艾美耳球蟲（Eimeria spinosa）、種豬艾美耳球蟲（E.porci）、蒂氏艾美耳球蟲（E.debliecki）、豬艾美耳球蟲（E.suis）、極細艾美耳球蟲（E.perminuta）、粗糙艾美耳球蟲（E.scabra）和新蒂氏艾美耳球蟲（E.neodebliecki），優(yōu)勢蟲種是E.debliecki和E.scabra。本調(diào)查結(jié)果顯示：在河南發(fā)現(xiàn)了楊陵艾美耳球蟲新種（Eimeria yanglingensis sp.Nov.），而沒有 Eimeria spinosa。 不同種類球蟲，豬場感染率不同，感染率較高分別為豬等孢球蟲（豬場感染率為80.65%）、楊陵艾美耳球蟲新種（豬場感染率為51.61%）和蒂氏艾美耳球蟲（豬場感染率為51.61%），況且豬等孢球蟲是引起仔豬球蟲病的致病種。說明河南豬球蟲種類有所改變，更重要的是優(yōu)勢種發(fā)生了改變，豬等孢球蟲為優(yōu)勢蟲種和主要致病種。

3.4 各豬場感染的球蟲種類不同

調(diào)查和試驗結(jié)果表明：在25個豬場及專業(yè)戶和6個地市的散養(yǎng)戶中，除了12號豬場（偃師某豬場2）和31號（偃師散養(yǎng)戶）的球蟲感染為陰性外，其余豬場均感染有豬球蟲；豬球蟲感染場中，除了2號（漯河某豬場）、23號（洛陽專業(yè)戶2）和25號（嵩縣專業(yè)戶）是單一種類感染，其余豬場為混合感染，多是感染3～6種球蟲。說明河南省豬場感染豬球蟲以混合感染為主，不同豬場感染的球蟲種類也不同。