補腎活血方對促排卵PCOS大鼠子宮內膜整合素ανβ3的表達調節

鄧琳琳

南陽醫學高等?？茖W校，河南 南陽 473000

研究表明，無論是自然妊娠還是輔助生殖技術后妊娠，多囊卵巢綜合征（PCOS）患者的自然流產率均高于健康女性[1]。因此尋求改善PCOS患者子宮內膜容受性的途徑成為解決其生殖障礙的關鍵。本實驗通過動物實驗，驗證補腎活血方是否能對促排卵PCOS模型大鼠的子宮內膜容受性產生正面作用。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 6周齡雌性SD大鼠30只，體質量220～240g。采購于河南省動物實驗中心，生產許可證號SCXK（豫）2013-0001，適應性喂養3天（溫度20～26℃，濕度40～60%，光照10小時/天）。隨機分為正常組10只和建模組20只，正常組予以1%CMC溶液灌胃，模型組以來曲唑溶液連續灌胃21天。尾靜脈取血行血清學檢測，確定建模結果。將建模成功的PCOS大鼠隨機分為對照組10只和方劑組10只，分別予以克羅米芬溶液、補腎活血方配合克羅米芬溶液灌胃，同時繼續給與正常組1%CMC溶液灌胃，5天后寰椎脫臼法處死取子宮內膜。

1.2 實驗藥品及制備 來曲唑片（芙瑞，2.5mg/片，江蘇恒瑞醫藥股份有限公司），溶于1%CMC溶液中，以1mg/kg·d給大鼠灌胃?？肆_米芬片（枸櫞酸氯米芬膠囊，50mg/粒，廣州康和藥業有限公司），溶于1%CMC溶液中，以5mg/kg·d給大鼠灌胃。補腎活血方（中藥顆粒制劑，深圳三九醫藥公司）包含：菟絲子顆粒 0.5 克/包、桑寄生顆粒1克/包、續斷顆粒1.5克/包、當歸顆粒3克/包、熟地顆粒3克/包、丹參顆粒1.5克/包、白芍顆粒1克/包、黃芪顆粒1克/包、山茱萸顆粒1克/包、紫河車顆粒1克/包、鹽杜仲顆粒 1克/包、制香附顆粒1克/包混合并加入30ml的沸水，充分溶解后以10ml/kg·d給大鼠灌胃。

1.3 檢測方法 放免法測定大鼠血清性激素水平；免疫組化法檢測大鼠子宮內膜上雌激素受體（ER）和孕激素（PR）受體的表達情況；RT-PCR法檢測整合素ανβ3 mRNA在大鼠子宮內膜上的表達差異。

1.4 統計學處理 所有數據均運用SPSS17.0統計學軟件處理。計量資料以均數±標準差（Mean±SD）表示，均數比較用t檢驗；計數資料進行卡方檢驗。統計學檢驗水準α=0.05。P＜0.05為差異具有統計學意義,P＜0.01為具有極顯著性差異。

2 結果

2.1 各組大鼠子宮內膜ER、PR的表達結果 ER、PR表達于子宮內膜細胞的胞核（見圖1），利用計算機圖像分析技術，檢測各物質表達的平均光密度，表達其陽性率，結果如下：

圖1 各組大鼠子宮內膜ER、PR的表達情況

利用計算機圖像分析技術，通過檢測各物質表達的平均光密度，表達其陽性率，結果見表1。

表1 各組大鼠子宮內膜ER、PR的表達情況

正常大鼠子宮內膜ER、PR的表達低于其他組（P＜0.05），在PCOS大鼠中，方劑組的ER、PR的表達低于對照組（P＜0.05），與正常組相似（P＞0.05）。

2.2 各組大鼠子宮內膜整合素ανβ3 mRNA的表達 用RTPCR檢測各組大鼠子宮內膜整合素ανβ3 mRNA的表達，結果分別是：正常組1.52±0.35；對照組1.27±0.21；方劑組1.33±0.48。整合素ανβ3 mRNA在正常組的表達量最高（P＜0.05），且在方劑組表達高于對照組（P＜0.05）。

3 討論

PCOS在中醫古典文獻中并無明確記載，但根據臨床表現，PCOS當屬中醫學中“閉經”、“月經后期”及“不孕癥”的范疇[2]。中醫學者將其劃分為三種證型：“腎虛血瘀型”、“脾虛痰濕型”和“痰瘀互結型”，其中“腎虛血瘀型”是最為常見的。考慮腎主生殖，故中醫多采用“補腎”療法來提高患者成孕。西醫則通過做人工周期和促排卵作為解決PCOS患者排卵障礙的一線療法，雖然經過治療大多數患者能順利的排卵和受精，但受精卵的低著床率卻制約了妊娠的成功[3]。改善子宮內膜的容受性，提高著床幾率成為治療育齡期PCOS患者的關鍵所在。

目前研究較多的是整合素ανβ3，它在增殖期內膜中幾乎無表達，而在分泌期中表達呈陽性[4]，尤其是在胚泡植入前這段時間，表達量最高，說明它與內膜的容受性密切相關，參與調節胚胎著床[5]。而我們發現PCOS模型大鼠子宮內膜的整合素ανβ3的表達量是降低的，說明內膜允許胚胎著床的能力下降。在經過補腎活血方的治療后，ανβ3的表達量有所增加，證明此方劑可以有效改善PCOS模型大鼠子宮內膜的容受性。

激素的作用在胚胎著床過程中廣為人知，影響子宮內膜容受性的主要激素就是來源于卵巢的雌、孕激素，這兩種激素通過各自的受體進行調節。有研究表明，子宮內膜整合素的表達受增加的雌/孕激素比值調節，其中孕激素受體在植入窗期子宮內膜的腺上皮內表達下降[6]。這與我們觀察到的結果基本一致。所以說，孕激素的變化對子宮內膜整合素ανβ3的表達調節更為重要。

綜上所述，補腎活血方可以調節促排卵PCOS大鼠子宮內膜上雌孕激素受體含量，并增加整合素ανβ3的表達，從而改善PCOS大鼠子宮內膜容受性，可以用來提高受精卵的著床幾率，降低生殖障礙。