馬鹿茸組合物緩解大小鼠體力疲勞的作用研究

梁志健，陳桂煌，龍淑嫻，黎麗斯，黎耀俊，白建瑜，饒子亮

(廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，廣東 佛山 528248)

《素問·靈蘭秘典論》：“腎者，作強(qiáng)之官，伎巧出焉[1-2]。”即腎是主導(dǎo)力量運(yùn)動(dòng)的器官，腎虛可能引起機(jī)體體力下降、運(yùn)動(dòng)能力降低、容易出現(xiàn)疲勞的癥狀。鹿茸、淫羊藿具有溫補(bǔ)腎陽的功效，是補(bǔ)腎的常用藥物；黃精在益腎之余還能健脾補(bǔ)氣；而枸杞則能兼補(bǔ)肝腎。本研究從小鼠負(fù)重游泳時(shí)長、肝糖原含量、血清尿素氮及血乳酸堆積4個(gè)方面[3]綜合評價(jià)由鹿茸、淫羊藿、黃精、枸杞組方而成的馬鹿茸組合物是否具有抗疲勞的作用。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級NIH小鼠，150只，雄性，18～22 g；SPF級SD大鼠，50只，雄性，180～200 g；均購自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心[SCXK(粵)2018-0002]，動(dòng)物合格證號(hào)分別為：44007200063580、44007200063166、44007200063824、44007200061954。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均在廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心SPF級動(dòng)物房進(jìn)行[SYXK(粵)2018-0002]，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明號(hào)分別為：00215281、00214589、00215705、00212328，飼養(yǎng)條件∶5只/籠，自由進(jìn)食飲水，采用12 h∶12 h晝夜間斷照明，飼養(yǎng)室條件始終保持穩(wěn)定。本研究經(jīng)廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理委員會(huì)審核，按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用的3R原則給予人道關(guān)懷，審核批號(hào)為：B201903-20、B201904-16、B201905-10、B201905-16。

1.2 主要試劑與儀器

馬鹿茸組合物(湯臣倍健股份有限公司，由馬鹿茸、淫羊藿、黃精、枸杞組成，每克組合物含氨基酸10.0%、淫羊藿苷0.5%)；無限極牌奕華膠囊(紐斯葆廣賽(廣東)生物科技股份有限公司，批號(hào)：18I08ADS04，每100 g含紅景天苷0.3 g、總皂苷2.0 g)；肝糖原試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號(hào)：20190620)；尿素氮試劑盒(上海科華生物工程股份有限公司，批號(hào)：20180822)；血乳酸試紙(德國EKF，批號(hào)：2001839157)。

Multiskan Go型全波長酶標(biāo)儀(美國Thermo Fisher Scientific)；LACTATE SCOUT型便攜式乳酸檢測儀(德國EKF)；日立7020型全自動(dòng)生化分析儀(日本株式會(huì)社日立高新技術(shù))。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 分組和給藥

負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)、血清尿素氮實(shí)驗(yàn)、肝糖原實(shí)驗(yàn)分別使用50只NIH小鼠，血乳酸實(shí)驗(yàn)使用50只SD大鼠。各實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物分別按體重隨機(jī)分為空白對照組、奕華膠囊組、馬鹿茸組合物低、中、高劑量組。奕華膠囊組動(dòng)物以0.6 g/kg的劑量灌胃給予奕華膠囊，馬鹿茸組合物組低、中、高劑量組動(dòng)物分別以0.135 g/kg、0.27 g/kg、0.81 g/kg的劑量灌胃給予馬鹿茸組合物，空白對照組動(dòng)物灌胃給予純凈水。灌胃給藥每天1次，連續(xù)30 d。動(dòng)物每周稱重1次。

1.3.2 負(fù)重游泳時(shí)間的測定

負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物末次灌胃30 min后于尾根部負(fù)荷5%體重的鉛皮，并置于水深不少于30 cm的游泳箱中游泳，水溫控制(25±1)℃，記錄小鼠自游泳開始至死亡的時(shí)間，即小鼠負(fù)重游泳時(shí)間。

1.3.3 血清尿素氮的測定

血清尿素氮實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物末次灌胃30 min后置于水溫(30±1)℃且水深不少于30 cm的游泳箱中游泳90 min，休息60 min后動(dòng)物眼眶采血并頸椎脫臼處死。血樣2000 r/min 離心15 min后，取上層血清利用日立7020型全自動(dòng)生化分析儀檢測其中尿素氮含量。

1.3.4 肝糖原的測定

肝糖原實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物末次灌胃30 min后頸椎脫臼處死取肝，用生理鹽水漂洗后，濾紙吸干，精確稱取100 mg，利用肝糖原試劑盒檢測其中的肝糖原含量。

1.3.5 血乳酸的測定

血乳酸實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物末次灌胃30 min后尾尖采血檢測血乳酸含量，然后置于水溫(30±1)℃且水深不少于30 cm的游泳箱中不負(fù)重游泳10 min，游泳結(jié)束后立刻采血檢測血乳酸含量，休息20 min后再采血測血乳酸含量。并按以下公式計(jì)算血乳酸曲線下面積。隨后動(dòng)物動(dòng)物麻醉放血處死。

血乳酸曲線下面積=5×(游泳前血乳酸值+3×游泳后0 min的血乳酸值+2×游泳后休息20 min的血乳酸值)

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 動(dòng)物狀態(tài)觀察與體重

實(shí)驗(yàn)期間，各組動(dòng)物的體型、被毛、皮膚、糞便、肌肉張力、步態(tài)、精神、呼吸等均無異常；各組動(dòng)物均見增長，且組間未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，如圖1所示。

2.2 負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)

與空白對照組比較，奕華膠囊組馬鹿茸組合物高劑量組動(dòng)物游泳時(shí)長增加，具統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，如表1所示。

2.3 血清尿素氮實(shí)驗(yàn)

與空白對照組比較，奕華膠囊組動(dòng)物BUN濃度降低(P<0.01)，馬鹿茸組合物各劑量組動(dòng)物血清尿素氮未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，如表2所示。

2.4 肝糖原實(shí)驗(yàn)

與空白對照組比較，奕華膠囊組、馬鹿茸組合物低劑量組動(dòng)物的肝糖原含量升高(P<0.05或0.01)，如表3所示。

2.5 血乳酸實(shí)驗(yàn)

與空白對照組比較，馬鹿茸組合物低劑量組動(dòng)物的血乳酸曲線下面積降低(P<0.05)，如表4所示。

注：A：負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)；B：血清尿素氮實(shí)驗(yàn)；C：肝糖原實(shí)驗(yàn)；D：血乳酸實(shí)驗(yàn)。圖1 各實(shí)驗(yàn)各組動(dòng)物的體重比較Note. A,Loaded swimming test. B， Serum BUN test. C, Hepatic glycogen test. D, Blood lactic acid test.Figure 1 Comparison of weights among the groups

Table1Loaded swimming time of each group

組別Groups劑量(g/kg)Dosage游泳時(shí)長(min)Loading swimming time空白對照組Blank control group/8.8±1.9奕華膠囊組Yihua capsule group0.60013.2±5.3*馬鹿茸組合物低劑量組Hairy Antler composition low dosage group0.1359.2±4.1馬鹿茸組合物中劑量組Hairy Antler composition middle dosage group0.27012.0±5.3馬鹿茸組合物高劑量組Hairy Antler composition high dosage group0.81013.5±6.4*

注：與空白對照組比較，*P<0.05。

Note. Compared with the blank control group,*P<0.05.

表2 各組動(dòng)物血清尿素氮的比較

注：與空白對照組比較，**P<0.01。

Note. Compared with the blank control group,**P<0.01.

表3 各組動(dòng)物肝糖原的比較

注：與空白對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。

Note. Compared with the blank control group,*P<0.05,**P<0.01.

表4 各組動(dòng)物血乳酸的比較

注：與空白對照組比較，*P<0.05。

Note. Compared with the blank control group,*P<0.05.

3 討論

疲勞屬于中醫(yī)“虛勞”、“虛損”的范疇，中醫(yī)認(rèn)為氣血不足是產(chǎn)生疲勞的基礎(chǔ)之一。奕華膠囊主要由補(bǔ)氣類中藥紅景天、西洋參和祛風(fēng)濕、強(qiáng)筋骨的刺五加組方而成。其中紅景天所含的紅景天苷可延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，降低血清中乳酸和血清尿素氮含量，提高肝糖原含量[4]；西洋參中的人參皂苷Re、Rb1、Rb2、Rg1、Rg3具有延緩疲勞產(chǎn)生和促進(jìn)疲勞恢復(fù)的作用，主要表現(xiàn)在調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)、改善機(jī)體功能和消除疲勞等方面[5]；刺五加的脂溶性成分能減少尿素氮的損傷來增強(qiáng)小鼠被迫游泳能力，有效降低了肌酐濃度的增加，促進(jìn)脂肪的利用[6]。奕華膠囊經(jīng)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)評價(jià)，具緩解體力疲勞作用。中醫(yī)又認(rèn)為“人之元?dú)猓谀I，培養(yǎng)與脾”，明代薛己也強(qiáng)調(diào)“治虛勞，當(dāng)以脾腎二臟為要”，本研究主要探討了由補(bǔ)腎中藥組方而成的馬鹿茸組合物是否具有相類似的抗疲勞作用。

疲勞的表現(xiàn)主要有運(yùn)動(dòng)時(shí)體內(nèi)能量降低和肌肉力量的下降，使機(jī)體不能持續(xù)在特定水平和/或不能維持預(yù)定的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度[7-8]。通過測定機(jī)體持續(xù)運(yùn)動(dòng)到力竭的時(shí)長可以反映機(jī)體的耐力。在本實(shí)驗(yàn)中，馬鹿茸組合物可增加小鼠負(fù)重游泳時(shí)長顯著高于空白對照組(P<0.05)，提示馬鹿茸組合物可以提高小鼠的運(yùn)動(dòng)耐力。這與報(bào)道中黃精多糖可不同程度地抑制脂質(zhì)過氧化損傷，調(diào)節(jié)腦內(nèi)5-HT和DA含量，從而延緩運(yùn)動(dòng)致外周疲勞和中樞疲勞的發(fā)生相一致[9]。

人體短時(shí)間高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)的主要能量來源于糖原的無氧糖酵解，糖原主要分布在肝和肌肉，肝糖原與肌糖原分別是能量儲(chǔ)備和利用的直接組織。因此肝糖原儲(chǔ)備含量可以反應(yīng)機(jī)體運(yùn)動(dòng)所能消耗的能量多少[10-11]。本實(shí)驗(yàn)中，馬鹿茸組合物可以提高小鼠肝糖原含量升高(P<0.05)。其機(jī)制可能為：一是淫羊藿能夠提高大鼠睪酮水平，使糖原合成和糖異生作用加強(qiáng)；二是淫羊藿內(nèi)含有多糖成分，可作為外源性糖分補(bǔ)充和延緩機(jī)體運(yùn)動(dòng)對內(nèi)源性糖分的消耗[12]；三是枸杞中的枸杞多糖亦可增加小鼠肝糖原儲(chǔ)備糧[13]。糖原的無氧糖酵解過程的代謝產(chǎn)物是乳酸，如果機(jī)體能量代謝能正常進(jìn)行，乳酸會(huì)被運(yùn)輸至肝進(jìn)行進(jìn)一步分解；如果運(yùn)動(dòng)過于劇烈或持久，或乳酸分解所需的維生素、礦物質(zhì)缺乏，乳酸則會(huì)堆積；產(chǎn)生肌肉酸痛感和疲勞感[14-15]。馬鹿茸組合物可以降低大鼠游泳后血乳酸曲線下面積(P<0.05)，提示馬鹿茸組合物可以降低機(jī)體的血乳酸堆積，減輕機(jī)體的疲勞感。這可能與馬鹿茸增加有氧代謝能力，促進(jìn)乳酸代謝有關(guān)[16]。尿素氮是氨基酸和蛋白質(zhì)分解代謝的產(chǎn)物，機(jī)體運(yùn)動(dòng)后血清尿素氮含量降低，反應(yīng)蛋白質(zhì)參與供能的比例下降，而碳水化合物和脂肪參與供能的比例升高。本試驗(yàn)中，馬鹿茸組合物組動(dòng)物運(yùn)動(dòng)后的血清尿素氮含量與空白對照組未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

現(xiàn)代社會(huì)生活方式的改變及面對來自工作的壓力，人們十分容易出現(xiàn)疲勞的癥狀。隨著健康意識(shí)的提高、對自身體態(tài)的要求及紓解壓力，越來越多的人投入到運(yùn)動(dòng)健身中，但長時(shí)間、高強(qiáng)度的運(yùn)動(dòng)可能會(huì)使機(jī)體的疲勞越加嚴(yán)重。目前國內(nèi)外均有從天然植物提取抗疲勞成分的報(bào)道[17]，旨在改善人們的生活。馬鹿茸組合物是在傳統(tǒng)中醫(yī)理論指導(dǎo)下，選取馬鹿茸、淫羊藿、黃精、枸杞組方，并經(jīng)過加工、提取有效成分而成，本研究驗(yàn)證了該馬鹿茸組合物具有緩解疲勞、延長運(yùn)動(dòng)時(shí)長的作用，其機(jī)制與增加機(jī)體肝糖原儲(chǔ)備和降低運(yùn)動(dòng)所引起的血乳酸堆積有關(guān)。