雙指標加權評分法優選頸康酊提取工藝*

潘 東，鄧聿胤，饒偉源，2，藍保強，2△

（1.廣西壯族自治區中醫藥研究院，廣西 南寧530022；2.廣西中藥質量標準研究重點實驗室，廣西 南寧530022）

頸康酊來源于廣西壯族民間驗方，是上林縣中醫醫院臨床應用了10多年的頸康貼基礎上研制的院內制劑，由千斤拔、崗梅、三七、蘇木、路路通5味藥材組方。方中千斤拔、崗梅為君藥，三七、蘇木為臣藥，佐以路路通，諸藥合用，共奏活血祛瘀、消腫定痛、舒筋活絡、強筋壯骨之功效，用于治療頸椎病。早期在民間，將頸康酊的藥材粉碎后用米酒浸泡后，連同藥渣一起外敷于患處，后因患者使用增多，用藥過程麻煩，且不利于攜帶、運輸和保存。將其開發成醫療機構制劑，經系統研究，將該制劑制成工藝穩定、易于保存、使用方便、質量穩定等的酊劑。本研究中對頸康酊的提取工藝進行研究，優選最佳提取工藝條件。現報道如下。

1 材料與儀器

千斤拔（批號為20160801）、崗梅（批號為20150501）、三七（批號為20160202）、蘇木（批號為20151201）、路路通（批號為20151201），均購于廣西天方醫藥有限公司；人參皂苷Rb1對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為110704-201223，供含量測定用，純度95.9%）。AUW220D型電子天平，LC-10AT型高交訂色譜儀（包括SPD-10A型紫外檢測器，日本島津公司）。

2 方法與結果

2.1 溶劑用量確定

為保證與傳統用藥統一，不引起質的改變，不影響療效，采用浸漬法進行提取。按酊劑的要求，100 mL藥液相當于20 g藥材，多次試驗結果表明，用6倍量的溶劑浸漬后所得藥液最接近理論產量，加入少量溶劑調整至規定量即可。

2.2 L9（34）正交試驗設計

根據經驗，選擇影響浸漬提取的藥材粒度（因素A）、浸漬時間（因素B）和溶劑濃度（因素C）3個關鍵因素，采用L9（34）正交試驗法設計，以人參皂苷Rb1含量和總固體為考察指標，人參皂苷Rb1含量作為三七的主要活性成分，更能直接反映提取效果和制劑療效的關系，故設加權比重為60%，總固體量設加權比重為40%[1-3]。因素水平見表1。取處方中5味藥材，按表1以6倍量溶劑進行浸漬提取，濾過，加入適量相應的溶劑定容至1 000 mL，攪拌均勻，即得。正交試驗結果見表2，方差分析結果見表3。

2.3 考察指標測定方法

2.3.1 人參皂苷Rb1含量測定

色譜條件[4]與系統適用性試驗：色譜柱為Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱溫為25℃；流動相為乙腈-水（30∶70，V/V）；檢測波長為203 nm。理論板數按人參皂苷Rb1計算應不低于3 500。

專屬性試驗：按處方量稱取處方中5味藥材中粉共200 g，以45%乙醇為溶劑，加6倍量溶劑浸漬15 d，濾過，加入適量溶劑定容至1 000 mL，攪拌均勻，作為陰性對照樣品。取陰性對照樣品，以0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液作為陰性對照品溶液，進樣5 μL測定。結果陰性對照品溶液色譜中，在人參皂苷Rb1出峰位置無吸收峰，表明陰性對照無干擾。詳見圖1。

圖1 含量測定高效液相色譜圖

表1 因素水平表

表2 L9（34）正交試驗結果

表3 方差分析結果

溶液制備：取適量人參皂苷Rb1對照品，精密稱定，以甲醇為溶劑制成質量濃度為0.3 mg/mL的溶液，搖勻，即得對照品溶液。取各工藝浸漬液，搖勻，以0.45 μm微孔濾膜濾過，取續濾液，作為供試品溶液。

含量測定：照2015年版《中國藥典（四部）》通則0512中高效液相色譜法測定人參皂苷Rb1含量。分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各5 μL，進樣測定，記錄色譜圖，計算各提取工藝每100 mL浸漬液含人參皂苷Rb1（C54H92O23）的總量。色譜圖見圖1。

2.3.2 總固體量測定

蒸發皿干燥至恒重，取各工藝浸漬液，搖勻，分別精密量取10 mL，置蒸發皿中，水浴蒸干，在105℃烘箱中干燥3 h，將蒸發皿移至干燥器，冷卻30 min，快速精密稱定質量，記錄遺留殘渣量，計算各提取工藝每100 mL浸漬液總固體的總質量（g）。

2.3.3 測定結果

分別依法測定計算各提取工藝每100 mL浸漬液含人參皂苷Rb1（C54H92O23）的總量（mg）和總固體質量（g）。結果見表4。

表4 人參皂苷Rb1含量和總固體測定結果

3 討論

由表2可見，因素B（浸漬時間）的影響最顯著，其次為因素A（藥材粒度），因素C（溶劑濃度）影響最小。直觀分析由3個因素的Ki水平可得到本試驗的最佳條件為A2B3C1。由表3可見，因素影響的主次關系為因素B（浸漬時間）＞因素C（溶劑濃度）＞因素A（藥材粒度），其中因素B影響顯著。由3個因素的Ki水平可得到本試驗的最佳條件為A2B3C1。故可優選出最佳工藝條件為A2B3C1，即以粉碎粒度為粗粉，浸漬時間為15 d，乙醇濃度為45%。

在中藥制劑的提取工藝研究過程中，由于中藥成分的復雜性，有效成分難以完全確定，故某單一成分或提取率不應作為考察的唯一標準[5-6]。雙指標甚至多指標加權評分法的應用，可更好地作為考量標準，有效地控制制劑提取工藝。

皂苷類為三七的主要活性成分。本研究結果顯示，人參皂苷Rg1與人參皂苷Re分離不好，三七皂苷R1與處方中其他成分分離不好，影響定量的準確性，最終選定人參皂苷Rb1作為考察指標[7-8]。