兩種檢測豬偽狂犬病gB抗體方法比較

張曉亭

（河南省許昌市建安區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 461000）

豬偽狂犬病 （Pseudorabies） 是由豬偽狂犬病病毒 （Pseudorabies virus，PrV） 引起的可致妊娠母豬流產(chǎn)、種公豬不育、育肥豬生長停滯、仔豬死亡的一種急性傳染病[1]。一旦豬場發(fā)生該病，將給養(yǎng)殖戶帶來巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前還沒有有效的方法治療該病，疫苗免疫接種是預(yù)防與控制該病的根本措施。而血清抗體水平檢測可以反映出豬群的免疫抗體水平，對(duì)豬場免疫程序的制訂具有一定指導(dǎo)意義[2]。目前，國標(biāo)上推薦的方法依然是ELISA，ELISA 方法具有快速、簡便、特異性好等優(yōu)點(diǎn)，是當(dāng)前常用的適合大規(guī)模應(yīng)用的抗體檢測方法。化學(xué)發(fā)光免疫分析法結(jié)合了抗體免疫方法與化學(xué)發(fā)光技術(shù)，其靈敏度更高，已廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、環(huán)境監(jiān)測、食品檢測等方面。為了解化學(xué)發(fā)光免疫分析法在檢測豬偽狂犬病gB 抗體方面的應(yīng)用價(jià)值，本實(shí)驗(yàn)將某國產(chǎn)豬偽狂犬病病毒gB 化學(xué)發(fā)光抗體檢測試劑盒 （化學(xué)發(fā)光免疫分析法） 與美國IDEXX 公司生產(chǎn)的豬偽狂犬病病毒gB 抗體ELISA 檢測試劑盒進(jìn)行比較分析，以期為臨床豬血清樣品豬偽狂犬病gB 抗體的檢測尋找更為簡便、快速且準(zhǔn)確的檢測方法。

1 材料與方法

1.1 樣品來源

河南省某幾個(gè)規(guī)模化養(yǎng)殖場的豬血清樣品，共計(jì)110 份。

1.2 檢測試劑

豬偽狂犬病病毒 gB 抗體檢測試劑盒 （ELISA 法，美國IDEXX）；豬偽狂犬病病毒gB 化學(xué)發(fā)光抗體檢測試劑盒 （化學(xué)發(fā)光免疫分析法，國產(chǎn)）。

1.3 儀器設(shè)備

酶標(biāo)儀：美國伯騰儀器有限公司；化學(xué)發(fā)光免疫分析儀：安圖生物；洗板機(jī)：；美國伯騰儀器有限公司；培養(yǎng)箱：德國愛安姆 （北京） 科技有限公司；100 ul 微量移液槍、100 ul 多道移液槍：Eppendorf。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 樣品預(yù)篩

用美國產(chǎn)豬偽狂犬病病毒gB 抗體檢測試劑盒 （ELISA 法）預(yù)篩選本實(shí)驗(yàn)室所收集的豬血清樣品，根據(jù)實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果篩選出陽性樣品 58 份，陰性樣品 52 份，共計(jì) 110 份。

1.4.2 化學(xué)發(fā)光方法檢測

對(duì)預(yù)篩選出的110 份豬血清用豬偽狂犬病病毒gB 化學(xué)發(fā)光抗體檢測試劑盒 （化學(xué)發(fā)光免疫分析法） 進(jìn)行檢測。檢測操作及結(jié)果判定均按照試劑盒說明書進(jìn)行操作與判定。

1.5 數(shù)據(jù)分析

將化學(xué)發(fā)光免疫分析法的檢測結(jié)果與ELISA 法的檢測結(jié)果進(jìn)行比對(duì)分析。（1） 以 ELISA 法的檢測結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算化學(xué)發(fā)光免疫分析法的特異性、靈敏性、符合率；（2） 應(yīng)用Kappa 檢驗(yàn)判定兩個(gè)實(shí)驗(yàn)方法結(jié)果的一致性。Kappa>0.8，表明一致性極高；0.60

2 結(jié)果

2.1 檢測結(jié)果

附表 ELISA 法與化學(xué)發(fā)光免疫分析法檢測豬偽狂犬病gB 抗體的檢測結(jié)果

2.2 方法效能評(píng)價(jià)

以ELISA 法為標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)附表的結(jié)果計(jì)算得出化學(xué)發(fā)光免疫分析法的靈敏度為 98.31%、特異性為 100%、符合率為99.10%。

2.3 一致性結(jié)果

以ELISA 法作為標(biāo)準(zhǔn)，將化學(xué)發(fā)光免疫分析法的檢測結(jié)果與之進(jìn)行Kappa 檢驗(yàn)，得出化學(xué)發(fā)光免疫分析法的 Kappa 為0.96，表明兩種實(shí)驗(yàn)方法的檢測結(jié)果高度一致。

3 討論

國外對(duì)化學(xué)發(fā)光的大量研究始于20 世紀(jì)初，至20 世紀(jì)60年代，隨著現(xiàn)代電子技術(shù)與高靈敏度光傳感器的發(fā)展，其作為一種分析方法得到迅速發(fā)展。我國化學(xué)發(fā)光方法的研究始于20世紀(jì)80 年代初期，目前該項(xiàng)技術(shù)已廣泛應(yīng)用于有機(jī)、冶金、藥物、臨床醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)、食品檢驗(yàn)、生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境監(jiān)測等各個(gè)領(lǐng)域。但卻少有化學(xué)發(fā)光技術(shù)在動(dòng)物疫病防控中關(guān)于臨床血清樣品抗體檢測的報(bào)道。

本文檢測豬偽狂犬病gB 抗體的化學(xué)發(fā)光免疫分析法是一種采用競爭反應(yīng)原理，包被重組蛋白，通過檢測發(fā)光信號(hào)值，校準(zhǔn)曲線擬合計(jì)算，得出待檢血清樣品抗體量的方法。相比于傳統(tǒng)ELISA 方法檢測豬偽狂犬病gB 抗體，化學(xué)發(fā)光免疫分析法用時(shí)更短，操作更加簡便。本試驗(yàn)結(jié)果表明，在檢測豬偽狂犬病gB 抗體方面，與ELISA 方法相比，化學(xué)發(fā)光免疫分析法的敏感性、特異性、符合率均較高。以ELISA 法為標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算的化學(xué)發(fā)光免疫分析法的Kappa 為0.96，說明兩種實(shí)驗(yàn)方法的檢測結(jié)果高度一致。這說明，可將化學(xué)發(fā)光免疫分析法應(yīng)用于臨床血清樣品豬偽狂犬病gB 抗體的檢測。