淋巴細胞亞群在人鼻病毒感染兒童毛細支氣管炎中的臨床意義

楊斌，邵雪君，朱宏

（蘇州大學附屬兒童醫院檢驗科，江蘇 蘇州 215000）

淋巴細胞是機體適應性免疫功能的主要承擔者，其各亞群間的相互協調、相互制約，進而形成穩定的免疫應答反應。外周血中成熟的T淋巴細胞主要包括表達CD4+輔助性T細胞及表達CD8+抑制性T細胞兩個亞群，并且兩者處于一個動態平衡及相互調節狀態；而B淋巴細胞則是體液免疫的主要參與者，產生的免疫球蛋白是抵抗病毒及細菌等病原微生物的直接作用機制；另外，NK細胞是機體固有免疫反應的主要參與者。本研究的目的主要是對HRV感染所致毛細支氣管炎患兒的外周血淋巴細胞亞群進行檢測，并將HRV與RSV感染毛細支氣管炎患兒及正常健康兒童的外周血中淋巴細胞亞群的比例變化進行性對比分析，以便更好的認識不同HRV感染的毛細支氣管炎患兒的免疫應答狀態，為臨床診斷和治療兒童HRV感染毛細支氣管炎提供客觀的理論依據。

1 方法

1.1 研究對象 選擇2016年1月-2019年7月在蘇州大學附屬兒童醫院呼吸科住院的2歲以下毛細支氣管炎患兒32例，其中HRV陽性9例，RSV陽性的患兒23例，所有患兒經呼吸道病毒檢測時，都僅發現一種病毒感染，而且均表現為第一次喘息，其診斷標準符合《諸福棠實用兒科學》第7版[19]，并排除其他喘息性疾病、先天性心臟病、免疫功能缺陷、先天性氣道發育畸形、神經肌肉疾病及遺傳性疾病等。隨機選取同期2歲以下門診體檢健康兒童24例，其中男14例，女10例。分組：按照病原學檢測結果分為HRV感染組、RSV感染組及正常對照組。

1.2 試劑和儀器 CD3-FITC/CD8-APC-Cy7/CD45PerCPCy5.5/CD4-PC7/CD16+ CD56- PE 熒光單克隆抗體試劑盒（北京同生時代生物技術有限公司）；流式細胞儀用紅細胞裂解液（BD，美國）；量程范圍適用于20、100 μL、1 mL的移液器及一次性吸頭；渦旋振蕩器； 低速離心機； 流式細胞分析（FACS canto II，BD，美國）。

1.3 檢測方法

1.3.1 標本采集 入院后當天采集外周靜脈血2 mL，肝素鈉抗凝送檢。

1.3.2 淋巴細胞亞群測定 使用流式細胞儀（FACS canto II，BD，美國）檢測標本，操作參照試劑盒說明書：（1）在流式管底部加入20 μL CD3-FITC/CD8-APC-Cy7/CD45PerCP-Cy5.5/CD4-PC7/CD16+CD56-PE/試劑于試管底部；（2）采用反向移液吸取50 μL混勻的肝素抗凝血，加入管底，避免血液碰到管壁。（3）輕輕渦動混勻約3 s，室溫避光孵育15-25 min。（4）向管內加入450 μL 1×流式細胞儀用溶血劑。（5）輕輕渦動混勻10 s，室溫避光孵育15 min。（6）上機檢測，淋巴細胞亞群結果由BD Canto軟件自動獲取，測定CD3+、CD3+/CD4+、CD3+/CD8+、CD19+、CD16+CD56+細胞相對計數及CD4+/CD8+。

1.4 統計方法 本實驗所有數據均采用SPSS 24.0進行統計分析，正態分布計量資料以（Mean±SD）表示；采用單因素方差分析進行統計分析，P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

三組間淋巴細胞亞群比例的差異比較，如表1所示：HRV感染組、RSV感染組及正常對照組之間CD3+T細胞、CD3+CD8+T細胞及CD4+/CD8+比值存在明顯差異，F值分別為：4.452，25.151，19.004，P值均＜0.05。其中，HRV感染的毛細支氣管炎患兒的CD3+T細胞在三組比較中表達最低，而RSV感染者CD3+CD8+T細胞比例及CD4+/CD8+比值均高于HRV感染患兒。CD3+CD4+T細胞、CD3-CD19+B細胞和CD3-CD16+CD56+NK細胞比例的差異則無明顯差異，F值分別為：2.598，2.467，1.109（P值均＞0.05）。

表1 HRV和RSV感染的毛細支氣管炎患兒及正常對照組三者間淋巴細胞亞群比例比較（Mean±SD）

3 討論

病毒是引起兒童毛細支氣管炎的主要病原之一，其病理改變主要包括炎癥細胞浸潤；粘膜充血、水腫，可伴有上皮細胞壞死脫落；粘液分泌增加和平滑肌痙攣等[1]。臨床上常表現為發熱、咳嗽、喘憋，這些癥狀較難與肺炎的癥狀相區別，為此有人稱之為喘憋性肺炎。病毒性毛細支氣管炎多見于2歲以下兒童，相關流行病學調查研究顯示[2.3]，0-1歲嬰幼兒的發病率約18%-32%，1-2歲幼兒的發病率為9%-17%，現已成為臨床一個巨大負擔。引起毛細支氣管炎的病毒譜較為廣泛，包括呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）、HRV、人博卡病毒（human bocavirus，HBoV）、人偏肺病毒（human metapneumovirus,HMPV）、副流感病毒（parainfluenza virus，Pinf）、腺病毒（adenovirus，ADV）和流感病毒（influenzavirus，Inf）等，其中RSV和HRV是兒童毛細支氣管炎最主要的兩種病原體[4]。相關研究顯示[5]，1歲以內毛細支氣管炎患兒以RSV感染為主，1歲以上患兒HRV感染上升為最主要地位。

兒童呼吸道系統尚未發育成熟，并且自身的免疫系統也在不斷完善之中，所以較為容易被呼吸道病毒入侵，引起呼吸道感染。檢測淋巴細胞亞群有助于了解機體免疫狀況及一些疾病的監測。最常檢測的亞群包括T細胞（CD3+）、B細胞（CD19+）、NK細胞（CD16+CD56+）、輔助性T細胞（CD4+）和抑制性T細胞（CD8+）等。

本次研究發現，HRV感染的毛細支氣管炎患兒相較正常健康兒童，外周淋巴細胞亞群變化主要表現為CD3+T細胞、CD3+CD8+T細胞比例明顯下降，CD3-CD19+B細胞比例和CD4+/CD8+比值則明顯上升， 為此，HRV感染毛細支氣管炎患兒的淋巴細胞亞群存在明顯的比例失衡，進而表現出不同程度的免疫功能紊亂。