不同免疫檢驗在抗HIV 檢測中的結果對比

徐彩姝

艾滋病作為一種具有較強傳染性的疾病,主要由HIV 感染后所引發,當人體感染這種病毒后會導致自身免疫系統中的CD4T 淋巴細胞受到不同程度的破壞,使人體免疫系統功能損害或者喪失,進一步增加身體感染各種疾病的風險性,對于生命安全威脅極大［1］。由于該疾病會對人體免疫功能造成損害,因此又被稱為獲得性免疫缺陷綜合征,目前醫學界尚無明確的該疾病治療方法,同時該疾病本身具備較長潛伏期,且發病前無特殊癥狀,因此臨床上診斷難度很高,如何有效確診艾滋病患者,使該疾病得到有效控制已經成為目前醫學界廣泛關注的重點內容［2］。目前臨床上常用的檢測方法為免疫檢驗,其中以膠體金快速法與ELISA法較為常見,但對于這兩種方法臨床診斷準確性仍然需要進一步確定。本次研究旨在探討膠體金快速法與ELISA 法對于HIV 抗體的檢測準確性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2019 年1～12 月采集的189 例艾滋病疑似患者,其中男103 例,女86 例,年齡26～45 歲,平均年齡(33.18±4.26)歲,病程1～6 年,平均病程(2.91.±0.80)年。納入標準：①均由免疫印跡法確診；②自愿簽署知情同意書；③病情穩定且意識處于正常狀態；④經本院倫理委員會批準；⑤無嚴重內科疾病或者肢體功能障礙。排除標準：①合并存在嚴重惡性腫瘤；②存在精神障礙或者溝通障礙情況；③合并存在嚴重代謝異常情況；④臨床資料不夠完善。

1.2 方法

1.2.1 儀器與試劑 本次研究所涉及的儀器與試劑包括：HIV 抗體檢測試劑盒(英科新創科技)、Anti-HIV ELISA Kit(北京萬泰生物藥業)、全自動時間分辨熒光-酶聯免疫分析儀(深圳愛康)。

1.2.2 檢測方法 所有患者分別接受膠體金快速法與ELISA 法。

1.2.2.1 膠體金快速法 ①待標記蛋白溶液制備：將提前準備好的pH=7.0 氯化鈉溶液(0.005 mol/L)與待標記蛋白進行透析,確保其中多余鹽離子去除后,再將10000 g 4℃進行離心處理,以1 h 為標準時長,將其中聚合物徹底清除。②待標膠體金溶液準備：使用適量的碳酸鉀(0.1 mol/L)或者適量的氯化氫(0.1 mol/L)對膠體金液pH 值進行適當調節。根據不同標記類型適當調節pH 值,在標記IgG 時需調節至9.0,在標記單克隆抗體(McAb)時需調節至8.2,在標記親和層析抗體時需調節至7.6,在標記金黃色葡萄球菌A 蛋白(SpA)時需調節至5.9～6.2,在標記刀豆凝集索A(ConA)時需調節至8.0,在標記親和素時需調節至9～10。按照待標記蛋白需求的相應要求,對膠體金的pH 進行調節后分別裝入10 個不同試管內,每個試管1 ml。以免疫球蛋白G(IgG)為例,通過pH=9.0 硼酸鹽緩沖液(0.005 mol/L)對標記蛋白進行稀釋處理后,將1 ml 的稀釋液加入金膠溶液內,確認混勻；其中對照組試管僅加入1 ml 的稀釋液,待5 min 后再次添加濃度為10%的0.1 ml 的氯化鈉溶液于上述各試管內,待混勻后靜置一段時間,以2 h 為標準,對結果進行觀察記錄。最后通過超速離心法對膠體金標記蛋白純化情況進行準確檢測,記錄相應結果。

1.2.2.2 ELISA 法 嚴格按照HIV 抗體檢測試劑盒說明書進行操作,對檢測結果進行觀察與記錄。

1.3 觀察指標 以免疫印跡法診斷結果作為金標準,分別統計ELISA 法、膠體金快速法與免疫印跡法診斷結果。按照相應計算公式對兩種檢測方法的敏感性、特異性及檢測準確率。敏感性=真陽性/(真陽性+假陰性)×100%；特異度=真陰性/(真陰性+假陽性)×100%；檢測準確率=(真陽性+真陰性)/總例數×100%。

1.4 統計學方法 采用SPSS20.0 統計學軟件處理數據。計數資料以率(%)表示,采用χ2檢驗。P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

189 例疑似艾滋病患者經由免疫印跡法確診,經血清檢驗后其中HIV 抗體陽性114 例,HIV 抗體陰性75 例。ELISA 法檢測HIV 抗體陽性114 例、HIV 抗體陰性75 例。膠體金快速法檢測HIV 抗體陽性115 例、HIV 抗體陰性74 例。ELISA 法檢測HIV 的敏感性、特異性、準確率分別為92.1%、88.0%、90.5%高于膠體金快速法檢測的83.3%、73.3%、79.4%,差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1,表2,表3。

表1 ELISA 法與免疫印跡法診斷結果比較(n)

表2 膠體金快速法與免疫印跡法診斷結果比較(n)

表3 兩種免疫檢測方法敏感性、特異性、準確率比較(%)

3 討論

根據相關資料顯示,艾滋病多見于青壯年群體,HIV 病毒在人體內潛伏期較長,平均潛伏時間可達到8～9 年；許多患者在發病前均可正常工作與生活,但發病后會表現出多種臨床癥狀,包括盜汗、持續性發燒、全身淋巴結腫大、虛弱等,當病情逐漸加重會導致導致消化道癥狀、神經系統癥狀、呼吸道癥狀、皮膚損害、腫瘤、黏膜損害等。艾滋病存在較強傳染性,傳染途徑包括母嬰傳播、性接觸傳播、血液傳播［3,4］。

目前臨床上針對該疾病的檢查方法較多,主要包括機體免疫功能檢查、病原體檢查、HIV 抗體檢測等,其中以HIV 抗體檢測應用較為廣泛,其中常見的檢測方法為膠體金快速法與ELISA 法［5］。ELISA 法即酶聯免疫吸附試驗,其檢測原理為：當抗體與酶相結合后,不會造成抗體免疫性反應的特異性發生變化,也不會對酶活性造成影響,在補充相應底物后造成基質水解呈色,可改變還原型氫體顏色,使其從無色逐漸轉變為有色,通過呈色反應可發現酶,該方法能夠在細胞水平上顯示抗體存在部位,不僅具備較高特異性與敏感性,還可通過納米水平或者微克水平進行定量,可有效避免正常受檢者假陽性檢出結果,整體應用效果較好,目已經廣泛應用于臨床［6,7］。而膠體金快速法主要通過膠體金進行檢測,由于膠體金呈現為紅色,檢測過程中安全性較高,且標記物穩定性較強,整體檢驗過程較為簡便,具備較高準確性,反應時間不超過30 min,對于儀器藥物不高,因此該方法也得到廣泛應用［8,9］。

在本次研究中,膠體金快速法檢測HIV 抗體陽性115 例、HIV 抗體陰性74 例。ELISA 法檢測HIV 的敏感性、特異性、準確率高于膠體金快速法檢測,差異有統計學意義(P＜0.05)。說明該方法能夠兩種方法對于HIV 抗體均具有較高檢測準確性,臨床應用價值均較高；但其中ELISA 法的陽性準確性更高,因此在實際檢驗中更推薦以ELISA 法進行檢測,與劉丹丹等［10］的研究結果具有一致性,值得臨床推廣應用。

綜上所述,在抗HIV 臨床檢測過程中,膠體金快速法與ELISA 法均能夠達到較高檢測準確性,兩種方法檢驗特異度與靈敏度均較高,均能夠為臨床治療提供相應指導；但ELISA 法陽性準確性更高,更推薦臨床應用。