高效液相色譜法測定人血漿中奧氮平的濃度

周本裕 劉文清 徐云慶 蔣春香

奧氮平(olanzapine),是一種臨床常用的精神類藥品［1］,其藥理機制交復雜,能與多巴胺受體、5-羥色胺(5-HT)受體和膽堿能受體結合,并具有拮抗作用［2,3］。口服吸收良好,食物對其吸收速率無影響［4］,口服后5～8 h 可達到血漿峰濃度。主要在肝臟代謝,約75%的本品以代謝物的形式從尿中排出［5］。口服起始劑量、治療劑量和維持劑量一般為10 mg/d,有效范圍為5～20 mg/d［6,7］。本藥物可引起泌乳素增加,但與劑量無關。少見不良反應有帕金森綜合征、肝轉氨酶一過性增高等［8］。由于其不良反應隨著藥物濃度的增加而增多,因此對于奧氮平的血藥濃度檢測尤為重要［9］。作者基于以上認識,用高效液相色譜法測定人血漿中奧氮平的濃度,探討高效液相色譜法測定人血漿中奧氮平濃度方法及效果。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 奧氮平標準品(美國禮來公司)；甲醇、乙腈、乙酸乙酯、磷酸二氫鈉、氫氧化鈉、磷酸、抗壞血酸均為分析純(國藥集團化學試劑有限公司),水為雙重蒸餾水。

1.2 儀器與色譜條件 Agilent 1260 型高效液相色譜儀；G1314B 紫外檢測器；色譜柱為InfinityLab Poroshell 120 SB-C8(150 mm×4.6 mm×2.7 μm)；流動相為：V(十二烷基硫酸鈉,磷酸二氫鈉 pH 2.5)∶V(乙腈)=1 ∶1 的溶液；檢測波長為260 nm；流速為1.0 ml/min；柱溫35℃；干式氮吹儀Version 1.0；LEETO旋片真空泵；JP-dos 超聲波清洗機。

1.3 樣品處理 ①抽取臨床服用奧氮平患者的靜脈血3 ml,用肝素抗凝,以3000 r/min,離心5 min,吸取上層血漿,在每毫升血漿中加入質量分數為0.25%的抗壞血酸10 μl,置于-20℃的冰箱中保存待檢測。②取1 ml 待測血漿,加入乙酸乙酯2 ml 及0.5 mol/L 氫氧化鈉0.5 ml,振蕩5 min,以2500 r/min 的轉速離心10 min,吸出上清液,在室溫中用氮氣吹干,殘渣用1 ml 流動相溶解,進樣20 μl,以峰面積外標法定量。

2 結果

2.1 色譜行為 圖1、圖2 分別為在本實驗條件下測得的空白血漿及加奧氮平標準品的血漿的高效液相色譜圖,結果表明血漿中雜質成分對奧氮平測定沒有干撓。

圖1 空白血漿

圖2 含奧氮平血漿

2.2 線性關系及檢測限 配制300 mg/L 的奧氮平流動相標準溶液作為儲備液。臨用前,吸取一定體積的儲備液,用流動相稀釋為3 mg/L 和30 mg/L 的標準溶液。分別吸取上述標準溶液適量,配制成0.15 mg/L,0.30 mg/L,0.60 mg/L,1.20 mg/L,3.00 mg/L,6.00 mg/L 的標準系列溶液。分別吸取上述系列濃度的標準溶液100 μl 于1 ml 空白血漿中,制得一系列不同濃度的奧氮平血漿,再加0.25%抗壞血酸10 μl,以下按1.3 ②項操作,進樣20 μl 測定。所得曲線參數為：Y=mX+b,m=-3.74938×10-2,b=0.322968。相關性：r=0.99935,本法線性范圍為15～600 ng/ml,最低檢測限為6 ng/ml。

2.3 回收率與精密度 分別配制含奧氮平標準品質量濃度為30 ng/ml,120 ng/ml,300 ng/ml 的血漿各5 份,每份1 ml,加0.25%抗壞血酸10 μl,以下按1.3 ②項操作,進樣20 μl 測定。在上述實驗條件下分析,測得血漿中奧氮平的平均回收率為96.61%(n=15)。取空白血漿15 ml,平均分為3 份,每份中加入奧氮平標準品,分別配制成30 ng/ml,120 ng/ml,300 ng/ml 的血漿。將每種濃度的血漿分為5 份,每份1 ml,加0.25%抗壞血酸10 μl,按1.3 ②項操作,當日測定,求得日內平均相對偏差為6.70%(n=15)。另配上述3 種濃度的標準血漿各5 ml,加0.25%抗壞血酸50 μl,每日分別取1 ml 測定,連續5 d 測定,求得日間平均相對偏差為7.60%(n=15)。結果表明本法的穩定性、可靠性均達到要求。具體數據見表1,表2,表3。

表1 奧氮平靈敏度實驗

表2 奧氮平回收率及批間差實驗

表3 奧氮平日間差實驗

2.4 靈敏度 目前臨床上奧氮平血藥質量濃度在20～80 ng/ml 之間。本法的最低檢測限為6 ng/ml,可以滿足臨床監測時靈敏度的需要。

3 討論

奧氮平適用于精神分裂癥和其他有嚴重陽性癥狀和(或)陰性癥狀的精神病的急性期和維持治療［10］；亦可緩解精神分裂癥及相關疾病常見的繼發性情感癥狀。由于屬于精神類藥物,長期服用奧氮平還是有不少副作用,如：①體重增加［11］：服用奧氮平會導致體重增加,特別是在長期服用的患者身上,長期服用患者體重增加超過正常體重的25%以上的幾率為10%。②血糖的影響：長期服用奧氮平,可能會導致糖耐量的異常,導致血糖升高的情況出現［12］。研究表明長期服用奧氮平可導致糖化血紅蛋白的升高,但6 個月后,平均血糖增長率會有所減緩［13］。③血脂的影響：臨床試驗證明,長期服用奧氮平可能會使低密度脂蛋白升高,總膽固醇的量也會有所升高,但如果停服藥物后,4～6 個月可逆轉［14］。④催乳素影響：長期服用奧氮平可能會導致催乳素的升高,特別是有月經不調癥狀的患者,但一般程度較輕。⑤除了上述不良反應,還可能出現的不良反應有：嗜睡、體位性低血壓、運動障礙,口感、便秘,肝藥酶升高、光敏反應等不良反應［15］。

因此,對于糖尿病患者要慎用奧氮平,注意引起酮癥酸中毒或昏迷的風險。服藥期間,應當注意摔倒的危險,不要進行操作機器、駕駛等可能因瞌睡而發生危險的活動［16］。奧氮平作為精神類藥物,也應當注意停藥綜合征的出現,如果突然停藥,可能會引起出汗、失眠、震顫、焦慮、惡心或嘔吐等急性癥狀,如需停藥,需在醫生指導下逐漸減量為好。吸煙會導致奧氮平的代謝加快,影響藥效,因此不建議服用藥物期間吸煙［17］。

高效液相色譜法是常用的檢測方法,作者用高效液相色譜法測定人血漿中奧氮平的濃度,探討高效液相色譜法測定人血漿中奧氮平濃度方法及效果。本研究中,作者采用Agilent 1260 型高效液相色譜儀G1314B 紫外檢測器,色譜柱為InfinityLab Poroshell 120 SB-C8(150 mm×4.6 mm×2.7 μm),流動相為：V(十二烷基硫酸鈉,磷酸二氫鈉 pH 2.5)∶V(乙腈)=1∶1 的溶液。檢測波長為260 nm,流速1.0 ml/min,柱溫35℃。在上述條件下,該方法最低檢測限為6 ng/ml,血漿中奧氮平的平均回收率為96.61%,測定結果的日內平均相對偏差為6.70%(n=15),日間平均相對偏差為7.60%(n=15)。由此可見,所建立的高效液相色譜法方法適用于奧氮平臨床應用研究中的血藥濃度的監測。