紅芪多糖對脾虛大鼠T淋巴細胞亞群的影響*

萬生芳

(甘肅中醫學院中西醫結合系，甘肅蘭州 730000)

中醫學中脾是以消化系統為主的多系統多器官的綜合功能單位。脾胃功能與機體正氣的生成有著密切的關系。脾虛證是一種以腹瀉、體質量下降、畏寒、倦怠等為主要表現的中醫病證，比較集中地反映了機體消化吸收、代謝和免疫功能的低下狀態。紅芪是豆科植物多序巖黃芪(Hedysarum Polybotrys Hand．-Mazz)的干燥根，其色赤，故稱紅芪，主產于甘肅，效同黃芪，臨床常將其代替黃芪使用［1］。課題組前期研究［2］表明：紅芪多糖能夠提高脾虛證大鼠胃黏膜的修復能力。為了進一步探討紅芪多糖對脾虛證大鼠機體的免疫調節作用是否有影響，課題組開展了以下研究工作。

1 材料與方法

1．1 動 物

Wistar大鼠，SPF級，雄性，鼠齡 80～100 d，體質量(200±10)g，由甘肅中醫學院實驗動物中心提供，合格證號為：SCXK(甘)2011-0001。

1．2 藥品、試劑與儀器

紅芪，選用甘肅宕昌GAP種植基地產紅芪，經甘肅中醫學院生藥學教研室鑒定為多序巖黃芪(Hedysarum polybotrys．hand．-Mazz)的干燥根，等級優;大黃，選用甘肅隴南地區GAP種植基地產大黃，經甘肅中醫學院生藥學教研室鑒定為掌葉大黃(Rheum palmatum)的根，等級優。黃芪多糖，北京美迪克斯生物科技有限公司產品，批號HD006001;FITC異硫熒光素，甘肅恒興生物科技有限公司產品，批號F7250-50;［PE］anti-rat CD3a/CD4a/CD8a，甘肅恒興生物科技有限公司產品，批號85-12-0084-80。D-37520型電動高速離心機，產地德國;BECKMAN COULTER Ppics XL型流式細胞儀，產地美國。

1．3 藥品的制備

紅芪多糖的制備：將1000 g紅芪飲片加入5000 mL水，浸泡1 h;煎煮30 min，趁熱抽濾;再加入5000 mL水2次煎煮30 min，趁熱抽濾;兩次藥液混合，冷卻后加無水乙醇至含醇量600 g/L，靜置24 h;抽濾，濾液用無水乙醇和乙醚依次沖洗沉淀，沉淀物即為紅芪多糖;60℃烘干備用。1000 g/L大黃水煎液的制備：大黃飲片500 g，加入2500 mL水，浸泡1 h;煎煮30 min，濾渣;2次煎煮;兩次藥液混合，明火直滾至800 mL;將藥液置于60℃水浴鍋內，濃縮至500 mL，即為1000 g/L大黃水煎液(每mL含生藥1g)。

1．4 動物分組與脾虛證模型的建立

將60只大鼠隨機分出10只作為空白對照組正常飼養，其余50只參照文獻［3-4］采用苦寒瀉下法制備脾虛證模型。用1000 g/L大黃水煎液按75 μL/g體質量每天灌胃，1 d 2次，連續42 d。密切觀察大鼠表現。若有食欲不振(食量減少)，消瘦(體質量下降)，大便稀溏，肛門污穢，倦怠乏力(懸空拉尾抵抗力減弱)，毛發不榮，萎靡嗜睡，瞇眼等癥狀，則提示造大鼠脾虛模成功。將造模成功的50只大鼠隨機分模型對照組，黃芪多糖高、中劑量組，紅芪多糖高、中劑量組共5組，每組10只。

1．5 用藥方法

參考黃芪多糖注射液臨床滴注用量，將黃芪多糖液配制為10 g/L、5 g/L，按高、中劑量對黃芪多糖高、中劑量組大鼠分別進行灌胃;將紅芪多糖液配制為10 g/L、5 g/L，按高、中劑量對紅芪多糖高、中劑量組大鼠分別進行灌胃。均連續用藥30 d。

1．6 檢測指標

于造模后第2天和用藥30 d后，分別麻醉各組大鼠;采血5 mL，加入抗凝劑，晃動試管混勻，靜置10 min;加入 PI染色液0．5 mL混勻;室溫放置5 min;加2．5 mL洗液，3000 r/min 離心 10 min;棄上清;加入熒光標記的細胞因子抗體，混勻，室溫暗處放置30 min。完成孵育后，立即進行流式細胞分析，測定T淋巴細胞亞群計數。

1．7 統計學方法

采用SPSS 16．0統計分析軟件處理。組間百分率的比較采用Pearson卡方檢驗。以P＜0．05為差別有統計學意義。

2 結果

模型對照組中CD3+T、CD4+T細胞較空白對照組下降，差別有統計學意義(P＜0．05)。黃芪多糖、紅芪多糖高劑量組與模型對照組對比，CD3+T細胞計數值均上升，差別有統計學意義(P＜0．05)。黃芪多糖高、中劑量組之間對比，紅芪多糖高、中劑量組之間對比，CD3+T細胞含量差別均有統計學意義(P＜0．05)。模型對照組CD4+T/CD8+T比值較空白對照組下降，黃芪多糖高、中劑量及紅芪多糖高、中劑量組CD4+T/CD8+T比值較模型對照組上升，但差別均無統計學意義(P＞0．05)。見表1。

表1 各組T細胞亞群計數對比 %

3 討論

人體正氣虛損是導致各類疾病產生的重要因素。脾胃為后天之根本，脾胃功能與機體正氣的生成有著密切的關系。脾虛證患者機體細胞免疫功能下降，免疫調節失衡，以致機體抗病能力降低［5］。有研究證實：脾虛證大鼠胃黏膜的損傷指數明顯高于正常對照組［6］。有學者研究表明：惡性腫瘤伴脾虛證患者免疫調節異常主要表現為T淋巴細胞為中心的細胞免疫功能低下［7］，脾虛證模型存在免疫功能的受損及T細胞亞群調節功能的紊亂［8］。本研究結果顯示脾虛證大鼠血中CD3+T、CD4+T細胞計數下降，CD4+T/CD8+T比值下降，提示脾虛證大鼠機體處于免疫抑制狀態，抗病能力低下;各藥物組與模型對照組對比，CD3+T、CD4+T細胞值上升，CD4+T/CD8+T比值上升，提示紅芪多糖在一定程度上能夠改善脾虛證大鼠的免疫功能。

［1］中國醫學科學院藥物研究所．中藥志［M］．北京：人民衛生出版社，1982：195．

［2］萬生芳，張麗萍，張艷，等．紅芪多糖對實驗性脾虛大鼠胃黏膜中 TNF-α、COX-2表達的影響［J］．中醫研究，2011，24(11)：13-17．

［3］周永生，樊雅莉，陳小野，等．脾氣虛證動物模型規范化的初步研究［J］．實驗動物科學與管理，2003，20(2)：1-5．

［4］陳奇．中藥藥理研究方法學［M］．3版．北京：人民衛生出版社，1996：1023．

［5］田佳鑫．三種脾虛泄瀉證模型大鼠消化系統功能改變的比較［J］．中國臨床康復，2006，10(39)：129-131．

［6］尹光耀．脾虛證胃病胃黏膜亞細胞結構及其微量元素、DNA研究的臨床意義［J］．中國中西醫結合脾胃雜志，1996，4(1)：10-15．

［7］黃明宜，申虹．惡性腫瘤脾虛證患者T淋巴細胞亞群分布與脾虛證的關系［J］．中國誤診學雜志，2002，2(8)：1148-1149．

［8］王洪海，謝鳴．復合病因造模法致脾虛證大鼠模型在免疫系統方面的變化［J］．中國實驗方劑學雜志，2006，12(12)：41-45．