HPV E6/E7 mRNA聯合TCT在老年婦女宮頸疾病診斷中的臨床應用價值

宮頸癌是常見惡性腫瘤，對女性健康造成嚴重威脅，該疾病的發生發展比較緩慢，早期檢查發現癌前病變，可以有效預防宮頸癌的發生[1]。新柏氏液基薄層細胞檢測(TCT)是對宮頸細胞進行細胞學診斷[2]，人乳頭瘤病毒(HPV)持續感染可以通過上調HPV E6/E7腫瘤蛋白的表達導致癌癥發生，通過檢測HPV E6/E7腫瘤蛋白的表達可進行疾病嚴重程度判斷[3]。我們此次研究采用HPV E6/E7 mRNA聯合TCT對疑似宮頸癌前病變病人進行檢查，分析聯合應用在診斷中的臨床應用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015～2017年連云港市婦幼保健院收治的疑似宮頸病變病人98例，年齡62～79歲，平均(69.4±4.3)歲;孕次1～5次，平均 (3.2±0.3)次;產次1～3次，平均 (1.8±0.6)次。納入標準：(1)臨床表現為陰道排液、接觸性出血以及陰道異常出血等；(2)在入組前3 d未陰道給藥；(3)對于本次研究內容知情，并且在同意書上簽字。本次研究是在獲得醫院倫理委員會批準的前提下開展。排除標準：(1)臨床資料不完整；(2)在入組前曾接受陰道給藥方式治療；(3)已經明確宮頸上皮病變或子宮內腫瘤；(4)病人存在精神障礙或溝通障礙；(5)不愿參與本次研究。

1.2 方法

1.2.1 TCT：主要收集病人宮頸管以及宮頸外脫落細胞，將收集到的樣本放置于事先準備好的小瓶中，離心處理后，對上皮細胞、炎癥細胞、黏液進行分離保存，對其進行歸類處理。采用高精密過濾器實施操作，對細胞薄層進行染色處理，然后進行細胞學檢查。采用全自動液基細胞制片機進行細胞均化、轉移、追片以及固定、染色等操作，檢測采用美國liquid protest系統進行，根據國際癌癥協會在2001年推薦的TBS分類標準對細胞學檢測結果進行分類[4]：(1)未見上皮內病變(NILM)；(2)不明確非典型鱗狀細胞(ASC-US)；(3)不能排除高級別非典型鱗狀細胞上皮內病變(ASC-H)；(4)低度鱗狀上皮內病變(LSIL)；(5)高度鱗狀上皮病變(HSIL)；(6)腺癌(AC)；(7)鱗癌(SCC)。ASC-US及以上程度病變定義為陽性，包含ASCUS、ASC-H、LSIL、HSIL、AC以及SCC。

1.2.2 HPV E6/E7 mRNA檢測：采用TCT剩余標本進行HPV E6/E7 mRNA檢查，所有樣本均進行2次檢測，取平均值。本次研究所用試劑盒由鄭州科蒂亞生物技術有限公司提供，且操作嚴格按照試劑盒說明進行。

1.2.3 病理檢查：先使用低倍鏡對病人宮頸病變部位進行觀察，判斷病人宮頸病變程度，用濃度為3%的醋酸浸濕宮頸，對上皮形態、鱗狀上皮、柱狀上皮、組織血管以及鱗柱轉化區顏色等相關病變情況進行觀察，使用碘液對病人宮頸進行染色，對于碘試區疑似病變的組織進行取樣送檢。由本院2名專業病理醫師進行顯微鏡下觀察，確定病理結果。病理診斷標準：參照《病理學》[5]中關于宮頸癌前病變以及宮頸癌的診斷標準，對病理學結果進行劃分。將HSIL、原位腺癌、腺癌、鱗癌和鱗腺癌歸為陽性結果，將正常子宮頸及LSIL歸為陰性結果。

1.3 觀察指標 對病人TCT檢查、HPV E6/E7 mRNA檢查以及病理檢查結果進行統計記錄，并根據統計結果計算靈敏度、特異度以及準確度。

1.4 統計學方法 數據應用SPSS 18.0進行分析，其中計數資料以百分表示，組間比較采用卡方檢驗。 以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HPV E6/E7 mRNA檢查與病理檢查結果比較 HPV E6/E7 mRNA檢查與病理檢查結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表1。

表1 HPV E6/E7 mRNA檢查與病理結果比較(n，%)

2.2 TCT與病理檢查結果比較 TCT與病理檢查結果比較，差異有統計學意義(P<0.05)，見表2。

表2 TCT檢查與病理檢查結果比較(n，%)

2.3 HPV E6/E7 mRNA聯合TCT檢查與病理檢查比較 HPV E6/E7 mRNA檢查聯合TCT檢查結果與病理結果比較，差異無統計學意義(P>0.05)，見表3。

表3HPV E6/E7 mRNA檢查聯合TCT檢查與病理檢查比較(n，%)

項目聯合檢查陽性聯合檢查陰性合計病理陽性75(76.5)3(3.1)78(79.6)病理陰性1(1.0)19(19.4)20(20.4)合計76(77.6)22(22.4)98(100.0)

2.4 靈敏度、特異度以及準確度分析 聯合檢查靈敏度明顯高于TCT檢查(P<0.05)，聯合檢測特異度明顯高于HPV E6/E7 mRNA檢查(P<0.05)，HPV E6/E7 mRNA檢查靈敏度高于TCT檢查(P<0.05)，TCT檢查特異度高于HPV E6/E7 mRNA檢查(P<0.05)，聯合檢查準確度高于TCT檢查以及HPV E6/E7 mRNA檢查(P<0.05)，見表4。

表4 不同檢查靈敏度、特異度以及準確度比較(%)

3 討論

宮頸癌是目前臨床常見的女性惡性腫瘤，由于老年病人絕經后體內雌激素水平顯著降低，生理及心理會有較大的變化，加上社會因素的影響，往往未能及時就醫，有效診斷是預防宮頸癌的關鍵[6]。有學者在研究中指出，對于早期發現的宮頸癌，治愈率可達90%以上。TCT屬于細胞形態學檢測，在明確觀察到細胞形態異常時，一般宮頸病變已發展至中晚期，而且該檢測方法假陰性概率比較高，進而增加漏診率[7]。HPV DNA檢測是高危宮頸癌檢測的有效手段，當發生HPV感染后，只有不到10%的人群會出現整合和進展，因此在進行病毒DNA檢測時，宮頸細胞內的HPV載量、病毒種類以及病毒整合程度均未在基因里體現，從而降低DNA檢測的準確度[8]。在宮頸疾病的發生以及發展過程中，高危HPV E6/E7基因發揮著重要的作用[9]。HPV E6/E7基因對抑癌基因p53和Rb的降解起到介導作用，進而導致細胞周期調節受到干擾[10]。 HPV E6/E7 mRNA檢測可以充分反映與宮頸病變程度相關的病毒活動指標，因此在HPV持續感染的女性宮頸疾病診斷中，HPV E6/E7 mRNA檢測更具有臨床應用價值[11]。

本研究結果顯示，因入選研究對象為有臨床癥狀的老年病人，絕經后陰道出血或排液，故陽性率高。單純采用HPV E6/E7 mRNA檢測具有較高的準確度(87.8%)，但是其特異度(70.0%)相對較低，進而導致誤診率提高。而TCT檢測的特異度(90.0%)比較高，聯合使用2種檢測方法可以將靈敏度提升至96.2%，特異度提升至95.0%，準確度提升至95.9%。曾有學者在研究中指出，細胞學檢測聯合HPV E6/E7 mRNA檢測可以極大程度地提高檢測的靈敏度以及特異度，該結論與本次研究結果一致[12]。HPV E6/E7 mRNA及TCT檢測均屬于無創操作，可降低檢查期間發生感染的概率，對老年病人具有更好的臨床推廣價值[13]。經2種方式診斷為陽性的病人，建議其行進一步病理檢查確定，以免存在誤診，影響病人治療時機。

綜上所述，由于老年病人卵巢功能衰退，雌激素水平降低，陰道萎縮，局部抵抗力差，在宮頸疾病的診斷中，采用HPV E6/E7 mRNA及TCT檢測不僅避免創傷導致病人出現感染等不良事件，而且具有更高的靈敏度以及特異度，可以有效地提高診斷準確率，臨床上應當進一步推廣應用。