QIAamp DNA Investigator 試劑盒提取腐敗肋軟骨1例

（廣東正孚法醫(yī)毒物司法鑒定所，廣東廣州 510663）

1 案例檢驗(yàn)

1.1 檢材來(lái)源

受交警委托，本單位受理了1 例在交通事故身亡的死者肋軟骨，要求將死者與疑似父母進(jìn)行親權(quán)鑒定。送檢的肋軟骨呈淡黃色，表面附著灰褐色腐肉。

1.2 DNA提取

先去除肋軟骨周?chē)母瘮〗M織等表面垢物，用滅菌超純水沖洗干凈。用干凈手術(shù)刀片切除四周后從深中部切取5mm×5mm×1mm 共2份肋軟骨，放入1.5mL 離心管中，分別用Chelex-100 法和QIAamp DNA Investigator 試劑盒（硅珠法）進(jìn)行提取。

1.2.1 Chelex-100法

加入300μL 5%Chelex-100、10mg/mL 蛋白酶K 10μL，56℃消化2h，期間多次渦旋混勻，置于98℃加熱煮沸10min，13000r/min 離心5min，取上清備用。

1.2.2 硅珠法

按照德國(guó)QIAGEN 公司的QIAamp DNA Investigator試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行DNA提取操作。

1.3 DNA擴(kuò)增及電泳

選用Thermo Fisher 公司的華夏白金試劑盒，擴(kuò)增體系為15μL，取DNA上清2μL，加入Master Mix 6μL、Primer Mix 6μL、PnG Buffer 1μL。同時(shí)設(shè)置陰陽(yáng)性對(duì)照。

擴(kuò)增參數(shù)：95℃變性1min；94℃3s、59℃16s、65℃29s，30 個(gè)循環(huán)；60℃終延伸15 min；4℃保存?zhèn)溆谩U(kuò)增產(chǎn)物在3130XL遺傳分析儀上電泳，數(shù)據(jù)經(jīng)GeneMapper ID-X 軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 采用Chelex-100法和QIAamp DNA Investigator 試劑盒法提取腐敗肋軟骨DNA，結(jié)果顯示，用Chelex-100法提取的DNA未得到有效擴(kuò)增（見(jiàn)圖1）；而用硅珠法提取的DNA，包括1 個(gè)Amelogin 位點(diǎn)、1 個(gè)Y-Indel 位點(diǎn)在內(nèi)，共25個(gè)基因座獲得成功分型（見(jiàn)圖2）。

2.2 將死者肋軟骨STR 分型數(shù)據(jù)與疑似父母的分型結(jié)果進(jìn)行比對(duì)分析，死者所有基因座上的等位基因均能從疑似父母雙方找到來(lái)源，按照GB/T37223-2018進(jìn)行親權(quán)指數(shù)的計(jì)算，累積親權(quán)指數(shù)CPI均大于10000，達(dá)到認(rèn)定親權(quán)關(guān)系的標(biāo)準(zhǔn)。

圖1 Chelex-100法

3 討論

對(duì)于新鮮肋軟骨，直接擴(kuò)增法或Chelex-100法便可成功獲得STR分型［1～3］。但在實(shí)際檢案中發(fā)現(xiàn)［4］，肋軟骨的腐敗程度與年齡、死亡時(shí)間、離體時(shí)間、保存條件等相關(guān)，可表現(xiàn)為色澤、氣味等方面的變化。……