羅氏Cobas8000全自動生化分析儀檢測心肌酶譜的性能評價*

趙有利,姜雯雯,李 飛,馮 妍,高 山,劉玉梅△

(1.蘭州大學第二醫院檢驗醫學中心，甘肅蘭州 730030；2.蘭州市第二人民醫院檢驗科，甘肅蘭州 730046)

急性心肌梗死(AMI)是一種發病急驟，病情進展迅速、并發癥多、死亡風險較高的一類心臟疾病，若在發病初期得不到正確、有效的治療，極易危及患者生命[1]，故及時、準確的診斷是AMI救治的關鍵環節，是提高治療成功率的重要指標。目前臨床用于AMI早期診斷的標志物主要包括肌酸激酶同工酶(CK-MB)及肌鈣蛋白(cTn)等，但單獨指標在疾病的早期診斷中具有一定的不足之處。為更為準確地早期診斷AMI，建議聯合檢測標志物。近些年來，臨床上將急診心肌酶譜與cTn檢測作為診斷AMI及AMI治療預后評估的重要指標[2-3]，CK-MB是評價心肌有無壞死的較敏感、較理想的指標，加之肌酸激酶(CK)、天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、乳酸脫氫酶(LDH)等聯合檢測，結合患者胸痛等臨床癥狀及cTn檢測、心電圖檢查等綜合考慮可對AMI病情做出全面、準確的診斷[2]。除在AMI診斷及治療中的應用之外，近年來心肌酶譜在甲狀腺功能[4-5]，有機磷農藥中毒[6]、急性腦血管病[7]、重癥肺炎[8]、哮喘[9]、心肌受累的手足口病[10-11]、冠心病[12]、病毒性心肌炎[13]、精神障礙及精神分裂癥[14-15]等疾病的診斷中也起到極為重要的作用。心肌酶譜作為常規檢測項目在臨床廣泛應用，但相關的性能評價研究鮮有報道。為了保證臨床檢驗結果的真實、可靠、準確，本實驗將以ISO15189《醫學實驗室質量和能力認可準則》為準則[16]，檢驗流程參考CLSI/NCCLS指南文件，并根據工作實際情況和臨床需要設計驗證方案，對羅氏Cobas8000分析儀檢測四項心肌酶譜的分析性能進行驗證和評價，并且與Vitro5600進行實驗室內比對。

1 材料與方法

1.1標本來源 血液標本來源于2018年3-4月蘭州大學第二醫院門診、住院患者，且所有標本無溶血、黃疸、脂血等異常情況。

1.2儀器與試劑 羅氏公司Cobas8000型全自動生化分析儀及其配套試劑、校準品、質控品；強生公司Vitro5600型干化學分析儀及其配套試劑、校準品、質控品。

1.3方法

1.3.1準確度評價 試驗期間保證生化分析儀運轉正常，當日室內質控在控。參考EP15-A2標準[17]，檢測國家臨床檢驗中心2018年第一次室間質控物，從而評估目標數值與靶值之間的偏離程度，完成準確性的驗證。每個水平標本檢測2次，記錄結果并取平均值，進而計算各項指標的偏倚程度，判斷其能否滿足臨床需求。若目標數值在合理偏倚范圍內，則可判斷檢測準確度良好。

1.3.2精密度評價 實驗過程中所選用的試劑批次和質控品均一致，且當日檢測質控在控。標本檢測時需參考EP15-A2標準[17]，并設立高低2個濃度，實驗周期為5 d，每天檢測一批次標本，每個批次同一水平重復檢測3次后取平均值，并計算同批次標本數值的變異系數，以及不同批次之間的變異系數。同一批次不同標本之間的精密度將質量目標設定為允許總誤差的1/4以內，不同批次之間的精密度將質量目標設定為允許總誤差的1/3以內。

1.3.3線性范圍評價 參考CLSI EP6-A2線性評價方法[18]，選取1份低濃度(L)標本和1份高濃度(H)標本，分別按照儀器所規定的線性范圍配制成不同系列濃度的血清，即H與L按不同比例配合，如：5L、4L+1H、3L+2H、2L+3H、1L+4H、5H。每個標本均需重復測定2次，并準確記錄數據，隨后將預期值設為X，將實際值設為Y，并采用多項式回歸方式進行擬合，具體方程為：Y=bX+a，若相關系數(r2)不低于0.975，b值落在了0.97～1.03這一區間內，a與0差異無統計學意義，結果為可接受，若b<0.95則提示b和1之間差異有統計學意義。

1.3.4參考區間評價 根據NCCLSC 28-A2推薦方法[19]，選取40例健康體檢者的血樣，男女比例為1∶1。按照標準操作程序(SOP)要求在Cobas8000分析儀上進行心肌酶譜4項的標本檢測，分組統計結果中若超過18例檢測結果在廠商參考區間內，則提示該區間可用于本實驗室。

1.3.5稀釋倍數驗證 取1份高濃度標本，一管未稀釋不做任何處理，一管進行最大倍數的稀釋，隨后分別測定兩管標本的實際數值，同一水平重復測定3次后取均值，并計算檢測結果和理論結果的偏差值，以1/2 CLIA′88總允許誤差范圍為判斷限。

1.3.6與干化學法比對試驗 以Vitro5600型分析儀作為參考系統，Cobas8000型全自動生化分析儀作為對比系統，參考EP9-A2的方法[20]，20份比對血清標本分別用速率法與干化學法進行測定，記錄結果，并計算預期偏倚及其置信區間，若實際誤差不足允許誤差的1/2，則結果為可接受，按照上述方法計算每個項目的偏倚是否能夠被接受。

2 結 果

2.1準確度測定 因CK-MB未參加國家衛生健康委臨床檢驗中心質評，只檢測AST、LDH、CK的臨床檢驗中心2018年第1次質評樣品，并將各項檢測均值與質評靶值進行對比計算偏倚大小。結果顯示，各項目各濃度水平的偏倚值均小于允許偏倚，通過驗證。見表1。

表1 檢測質評標本正確度驗證

2.2精密度實驗 不同濃度的心肌酶譜所對應的精密度數值見表2。驗證結果顯示高濃度標本和低濃度標本的批內CV%均小于1/4CLIA′88，批間CV%均小于1/3CLIA′88，顯示該方法的精密度符合相關行業標準要求。

表2 Cobas8000生化分析儀批內、批間精密度驗證結果(%)

2.3線性范圍驗證 心肌酶譜中的各項指標(AST、LDH、CK、CK-MB)的相關系數(r2)值均落在0.975 1～0.999 7這一區間，即r2均大于等于0.975，而b值均落在0.972 8～1.017 6這一區間內，提示線性驗證結果為可接受。見表3。

表3 心肌酶譜四項線性范圍及驗證值

2.4參考區間驗證 檢測40例健康體檢者的血液標本后發現所有受檢者的心肌酶譜(AST、LDH、CK、CK-MB)參考區間符合率≥95%，這表明參考區間符合要求。見表4。

表4 參考范圍評價結果表

2.5稀釋倍數驗證 AST、LDH、CK、CK-MB的相對偏差均小于允許總誤差的1/2,見表5。

表5 稀釋倍數驗證

表6 Cobas8000 與 Vitro5600型分析儀比對試驗結果

2.6方法學比對 以Vitro5600型分析儀作為參考系統，Cobas8000型全自動生化分析儀作為對比系統，結果顯示兩個檢測系統測定的4個項目結果較為理想，可比性較好，均r2≥0.975，兩種方法在醫學決定水平處的偏倚小于CLIA′88允許誤差的1/2，準確性可接受。見表6。

3 討 論

心肌酶譜是分布在心肌細胞中的具有催化心肌細胞代謝及心肌細胞電生理活動調節功能的一類蛋白質，臨床上常用心肌酶譜聯合cTn檢測、心電圖檢查及患者胸痛等癥狀綜合考慮對AMI病情做出全面、準確診斷。除在AMI診斷及治療中的應用之外，近年來心肌酶譜在其他疾病的發生發展中也起到極為重要的作用，有較高的臨床應用價值。心肌酶譜作為常規檢測項目在臨床廣泛應用，但相關的性能評價研究屈指可數。根據醫院《醫療機構臨床實驗室管理辦法》的要求[21-22]，實驗室應對檢測系統的主要性能進行驗證，本試驗主要針對羅氏Cobas8000型分析儀檢測的CK、CK-MB、AST、LDH4項心肌酶譜進行性能驗證，主要對項目的準確度、精密度、線性范圍、生物參考區間和最大稀釋倍數5項分析性能進行了一定的探討。

正確度是指靶值與實際檢測值之間的一致性，二者之間的差異被稱之為“偏倚”，這一指標亦可以用于系統誤差的衡量。本試驗按照CLSI EP15-A2文件執行正確度驗證，采用國家衛生健康委臨床檢驗中心2018年第一次質評標本作為參考物質。表1結果顯示4個項目偏倚均小于CLIA′88允許總誤差的1/2，正確度性能符合良好。同時通過與Vitro5600型分析儀的比對，表6結果顯示，4個項目均r2≥0.975，這提示Cobas8000與Vitro5600分析儀檢測結果較為相近，相關性良好，通過線性回歸方程計算出的偏倚數值、置信區間準確性較高，急診與非急診心肌酶譜結果均可被臨床接受。

精密度是評價檢測值穩定性的重要指標之一，亦可用于反映系統隨機誤差。精密度的檢測是性能分析和評價的基礎和前提，本試驗的精密度檢測主要參照EP15-A2文件。表2結果顯示，檢測系統CK、CK-MB、AST、LDH 4個項目的批內精密度和批間精密度均小于廠家聲明的精密度，批內CV均小于1/4 CLIA′88，批間CV均小于1/3 CLIA′88。試驗重復性好、隨機誤差小，具有良好的精密度，滿足性能評價要求。

線性范圍即標本在未經濃縮、稀釋等預處理的情況下可被直接測定出檢測物的范圍[23]，用于反映方法學性能的評價。本試驗在驗證試劑線性范圍時主要參考EP6-A2文件，共分析6個不同系列濃度的標本。在線性驗證時，受臨床實際情況限制，很難取得線性范圍上限的標本，尤其是CK-MB高值標本，本試驗選擇了相對較高水平的標本進行了性能驗證。表3結果顯示 AST、LDH、CK、CK-MB的r2分別為0.998 7、0.994 9、0.999 7、0.999 4，均大于0.95，線性驗證符合要求。實際工作中常會遇到結果超過檢測項目線性范圍的情況，需稀釋標本得出檢測結果，因此有必要進行最大稀釋度的驗證。本試驗通過選擇接近線性范圍上限的高值標本作最大稀釋度驗證，以CLIA′88允許誤差的1/2為判斷標準，結果顯示四項在該范圍內的標本稀釋檢驗結果可靠，符合臨床要求。

生物參考區間即參考值范圍，是95%“正?！敝笜酥捣秶瑢嶒炇倚璞ＷC所提供的生物參考區間正確適用。本試驗在驗證生物參考區間時主要參考C28-A2文件，并在項目檢測時將健康體檢者分為男女兩組，每組各20例進行心肌酶譜生物參考區間的驗證，結果表明僅有1例LDH不在廠商提供的生物參考區間內，其余各項指標的驗證符合率及項目分組參考區間符合率均≥95%，結果可接受，可用于本實驗室。

4 結 論

羅氏Cobas8000型全自動生化分析儀檢測心肌酶譜AST、LDH、CK、CK-MB 4個項目的正確度、精密度、線性范圍、生物參考區間、最大稀釋倍數及與強生Vitro5600型分析儀方法學比較等指標均能達到衛生行業標準規定的要求，能夠滿足醫院臨床檢測需求，可為臨床日常檢測、診療、科研數據分析提供準確、可靠的檢測數據。