植煙土壤菌株XXJ15的分離及活性評估

許曉敬　唐培培　禹寶成　郭傳濱　楊立均　孫會忠

摘要? ? 采用平板分離技術(shù)從煙草根際土壤中分離到一個菌株，編號為XXJ15，并對該菌株的幾種活性功能進(jìn)行了評估。結(jié)果表明，XXJ15在魔芋粉液體鑒別培養(yǎng)基經(jīng)過48 h發(fā)酵后，發(fā)酵液中的β-甘露聚糖酶活性達(dá)到4.6 U/mL;在解磷液體鑒別培養(yǎng)基中培養(yǎng)72 h后，培養(yǎng)基上清液中游離態(tài)磷含量達(dá)到102 μg/mL;XXJ15不具備解鉀活性。因此，菌株XXJ15可作為后期誘變育種、煙草專用菌肥和土壤保育劑開發(fā)等研究的備用菌株。

關(guān)鍵詞? ? 植煙土壤;酶活性;解磷菌;分離;活性評估

中圖分類號? ? S182? ? ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識碼? ? A

文章編號? ?1007-5739（2020）02-0174-01? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）

Abstract? ? A strain named XXJ15 was isolated from tobacco rhizosphere soil by plate separation，and the activity function of the strain were evaluated.The results showed that after 48 h fermentation in the liquid identification medium of konjac powder，the activity of β-mannanase in the fermentation broth reached 4.6 U/mL.After culture for 72 h in the phosphorus solution identification medium，the free phosphorus content in the supernatant of the medium reached 102 μg/mL.XXJ15 didn′t have potassium activity.Therefore strain XXJ15 can be used as a backup strain for later mutagenesis breeding，tobacco special bacterial fertilizer and soil conservation agent development.

Key words? ? tobacco-growing soil;enzyme activity;phosphate-solubilizing bacteria;isolation;activity evaluation

煙草是我國一種傳統(tǒng)的經(jīng)濟(jì)作物，但在實際栽培過程中，耕作層土壤的劣變給煙葉生產(chǎn)造成了很大的困擾，成為制約產(chǎn)量和品質(zhì)提高的不利因素[1-2]。盡管微生物肥料或制劑起效普遍較慢，但通過一系列綠色或有機(jī)栽培技術(shù)的使用，保證煙葉品質(zhì)和特色成為第一要務(wù)[3]。我國約有74%的耕地缺磷，難溶性磷酸鹽是土壤中絕大部分磷主要的存在形式，植物不能直接吸收利用[4-6];土壤中的有效鉀易流失，需及時補(bǔ)充，尤其是對于嗜鉀作物煙草來說補(bǔ)充鉀肥更為重要[7-8];活性多糖對植物生長和土壤中的微生物活性起著重要作用。本研究對從煙草根際土壤中分離到的一株菌的生物學(xué)活性進(jìn)行了初步評估，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 試驗材料

土壤樣品采自駐馬店市植煙區(qū)煙田。

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基[9]：牛肉膏3 g/L，蛋白胨5 g/L，氯化鈉10 g/L，瓊脂20 g/L，pH值7。

魔芋粉鑒別培養(yǎng)基[10]：魔芋精粉5 g，硫酸鎂5 g，硝酸鈉3 g，磷酸鉀1 g，硫酸鐵0.01 g，瓊脂粉20 g，蒸餾水1 000 mL，自然pH值。

解磷菌鑒別培養(yǎng)基[6]：硫酸銨0.5 g，葡萄糖5.0 g，氯化鈉0.5 g，氯化鉀0.3 g，硫酸鐵0.03 g，硫酸鎂0.3 g，硫酸錳0.03 g，雞蛋黃10 mL，菊糖1.0 g，瓊脂粉18.0 g，蒸餾水1 000 mL，自然pH值。

解鉀菌發(fā)酵培養(yǎng)基[8]：按100 g培養(yǎng)基計，分別含有鉀長石0.3 g（超純水水洗5次），磷酸氫二鈉0.2 g，碳酸鈣0.01 g，七水硫酸鎂0.5 mg，三氯化鐵0.5 mg，蔗糖0.5 g，海藻糖0.1 g，瓊脂粉1.8 g，pH值控制在7.0～7.5。

LB培養(yǎng)基[9]：斜面和活化培養(yǎng)基。

1.2? ? 試驗方法

1.2.1? ? 菌株的獲得。稱取土樣5 g，無菌操作加入裝有45 mL生理鹽水的250 mL三角瓶中，振蕩20 min，靜置30 s，制成10-1土壤稀釋液。再按10倍梯度稀釋至10-6濃度。取10-6、10-5、10-4 3個梯度稀釋液各0.1 mL涂布牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基平板，于37 ℃恒溫培養(yǎng)3 d。用接種環(huán)挑取單菌落并劃線純化，獲得目標(biāo)菌株，斜面培養(yǎng)基4 ℃保藏。