2016年青海省油菜籽轉基因抽樣調查

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摘要? ? 為了評估和監(jiān)管青海省油菜轉基因情況，2016年對省內互助、門源、樂都等11個市縣的42批樣品進行了檢測。通過定性PCR，檢測發(fā)現(xiàn)CruA內標準基因、CaMV 35S啟動子、FMV 35S啟動子、NOS終止子、HPT基因、NPT II基因、Bar基因和PAT基因均為陰性，未發(fā)現(xiàn)轉基因油菜籽。鑒于轉基因作物違法濫重的問題嚴重性，對青海省轉基因作物監(jiān)管工作提出了相應建議。

關鍵詞? ? 油菜籽;轉基因;青海省;2016年

中圖分類號? ? S565.4? ? ? ? 文獻標識碼? ? A

文章編號? ?1007-5739（2020）02-0011-02? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?開放科學（資源服務）標識碼（OSID）

油菜屬于十字花科蕓薹屬，是重要的油料作物和優(yōu)質的蛋白飼料作物，也是轉基因技術應用較多的農作物[1]。從1996—2015年的20年間，全球轉基因作物累計種植面積達20億hm2，其中轉基因油菜累計種植面積達到1億hm2，僅次于大豆、玉米和棉花[2]。青海省地處青藏高原高海拔地區(qū)，太陽輻射強、氣候冷涼、日照時間長、空氣濕度小、晝夜溫差大，適宜喜溫涼作物油菜的生長。近年來，隨著全省農業(yè)結構調整，隨著優(yōu)質油菜的推廣，油菜種植面積有了較快的增長，常年種植面積20萬hm2，總產達28.2萬t[3]。

截至2017年3月，全球商業(yè)化的轉基因油菜轉化事件有24個[4-6]，中國尚未批準轉基因油菜的商業(yè)化種植。為了加強青海省農業(yè)轉基因生物安全監(jiān)管，防止農業(yè)轉基因作物的非法擴散，青海省農牧廳于2016年4—10月對全省油菜籽進行轉基因抽樣調查。

1? ? 材料與方法

1.1? ? 供試材料

來自青海省11個市縣的42份油菜籽樣品，涉及12個品種（表1）。

1.2? ? 試驗方法

所有樣品由農業(yè)部轉基因植物環(huán)境安全監(jiān)督檢驗測試中心（武漢）進行檢測，檢測項目如下。①蕓薹素（CruA）內標準基因。內標準基因（endogenous reference gene）是指具有植物物種專一性且拷貝數(shù)恒定、不顯示等位基因變化的保守 DNA序列，目前開發(fā)內標準基因主要用于轉基因作物的定性和定量檢測[7]。蕓薹素（CruA）基因是國家比較認同的油菜內標準基因之一。檢驗靈敏度0.10%，檢測依據(jù)為農業(yè)部2031號公告-9-2013。②花椰菜花葉病毒（CaMV）的35S啟動子、玄參花葉病毒（FMV）的35S啟動子和胭脂堿合成酶基因（NOS）的終止子。三者均為國內外商業(yè)化轉基因作物中普遍使用的調控元件，可以作為轉基因檢驗的依據(jù)。檢驗靈敏度0.10%，檢測依據(jù)為農業(yè)部1782號公告-3-2012。③潮霉素磷酸轉移酶（HPT）基因。HPT基因編碼潮霉素磷酸轉移酶（hygromycin B phosphotransferase，HPT），是遺傳轉化中最常用的一類選擇標記性基因。HPT可使潮霉素B（hygromycin B）磷酸化而失活，潮霉素是一種氨基糖苷類抗生素，可破壞細胞中核糖體的功能，導致基因翻譯受阻細胞死亡[8]。在選擇壓力下，不含標記基因及其產物的非轉化細胞和組織死亡，轉化細胞由于有抗性可繼續(xù)成活、分裂并分化成植株[9]。檢驗靈敏度0.10%，檢測依據(jù)為農業(yè)部1782號公告-3-2012。④新霉素磷酸轉移酶（NPT II）基因。在植物的遺傳轉化研究中，最常用的遺傳標記基因為NPT II 基因，該基因編碼的新霉素磷酸轉移酶能使植物產生抗卡那霉素特性，因而用卡那霉素可以對轉化植株進行篩選[10-11]。對于NPT II的檢測也是油菜籽轉基因檢測的常用方法。檢驗靈敏度0.10%，檢測依據(jù)為農業(yè)部1782號公告-3-2012。⑤除草劑抗性基因（Bar或PAT）。Bar和PAT基因都是常用的選擇標記基因之一。將其與其他目的基因（抗蟲、抗病基因等）構建到同一載體上，篩選轉化細胞時，只要在選擇培養(yǎng)基中加入一定量的除草劑，就能殺死非轉化細胞，生存下來的就是含有目的基因的轉化細胞。檢驗靈敏度0.10%，檢測依據(jù)為SN/T 1204-2003。

定性PCR的引物及擴增程序等反應條件參照農業(yè)部相關行業(yè)標準[12-14]。

2? ? 結果與分析

此次抽樣調查，經過檢測發(fā)現(xiàn)全部42個油菜籽樣品中，8個基因的檢測全部為陰性，未發(fā)現(xiàn)轉基因油菜籽。

3? ? 結論與討論

農業(yè)轉基因生物的安全監(jiān)管是保障轉基因產業(yè)健康、有序發(fā)展的重要舉措。中國政府高度重視轉基因生物的安全監(jiān)管，于2001年頒布《農業(yè)轉基因生物安全管理條例》，并于隨后發(fā)布一系列配套管理辦法，對農業(yè)轉基因生物的研究、生產、加工、經營和進出口活動進行全過程的嚴格監(jiān)管[15]。由于轉基因作物通常具有抗蟲、抗病、抗寒、抗旱等優(yōu)良性狀，部分農民在不知情的情況下可能會誤種，2015年通過省部聯(lián)動，在新疆、甘肅、海南銷毀了逾73.33 hm2違法轉基因玉米。

青海省此次抽查未發(fā)現(xiàn)轉基因油菜非法種植情況，但是依然需要提高警惕，防止轉基因作物違法濫種。在青海省轉基因監(jiān)管工作中，一是要進一步加強轉基因監(jiān)管工作，讓投機者無機可乘;二是規(guī)范轉基因科研活動的監(jiān)管程序，防止轉基因作物非法流出;三是加強轉基因工作的科普宣傳，在嚴管的同時讓百姓理性看待轉基因技術，避免監(jiān)管工作被錯誤解讀。

4? ? 參考文獻

[1] 劉曉，景寅.轉基因油菜研究進展[J].現(xiàn)代農業(yè)科技，2010（9）：80-81.

[2] JAMES C.2014年全球生物技術/轉基因作物商業(yè)化發(fā)展態(tài)勢[J].中國生物工程雜志，2015，35（1）：1-14.

[3] 楊生偉.青海省油菜栽培技術現(xiàn)狀[J].青海農技推廣，2018（3）：66-68.

[4] Center for Environmental Risk Assessment. GM crop database[DB/OL].（2019-09-03）[2019-09-24]. http：//ceragmc.org.

[5] EU GMO Compass.GMO database[DB/OL].[2017-03-01].http：//www.gmocompass.org.

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[7] 張麗，吳剛，曹應龍，等.油料作物內標準基因研究與應用[J].中國油料作物學報，2009，31（4）：544-551.

[8] CABANAS M J，VAZQUEZ D，MODOLELL J.Dual interference of hygro-mycin B with ribosomal translocation and with aminoacylt RNA recognit-ion[J].Eur J Biochem，1978，87（1）：21-27.

[9] 楊爍，郝育杰，蘭金蘋，等.轉基因水稻中HPT蛋白質的檢測及表達特征研究[J].中國生物工程雜志，2015，35（6）：61-67.

[10] 張慧軍，石躍進，朱永紅，等.NPTII標記轉基因棉花再生株的延期篩選[J].中國棉花，2002，29（5）：26-27.

[11] 吳霞，王嬌娟，朱禎，等.轉Bt-CpTI-GNA基因棉花的研究[J].棉花學報，2005，17（6）：353-359.

[12] 中華人民共和國農業(yè)部.農業(yè)部2031號公告-9-2013，轉基因植物及其產品成分檢測油菜內標準基因定性PCR方法[S/OL].（2013-12-04）[2019-09-24].https：//www.docin.com/p-1030743868.html.

[13] 中華人民共和國農業(yè)部.農業(yè)部1782號公告-2-2012，轉基因植物及其產品成分檢測標記基因NPTII、HPT和PMI定性PCR方法[S/OL].（2016-06-06）[2019-09-24].https：//wenku.baidu.com/view/7df9d f75c381e53a580216fc700abb68a882ad40.html.

[14] 中華人民共和國國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局.SN/T 1204-2003，植物及其加工產品中轉基因成分實時熒光PCR定性檢驗方法[S/OL].（2003-03-17）[2019-09-24].www.doc88.com/p-8951936282097.html.

[15] 張海波，張英，劉冰，等.玉米中轉基因成分篩查策略[J].西北農業(yè)學報，2015，24（12）：57-63.