高通量測序技術在浮游生物研究中的應用

（廣州市刑事科學技術研究所，廣東廣州 510030）

引言

水中尸體的死因判斷常常是法醫工作中的難題，法醫工作者常采用硅藻形態學檢驗的方法來判斷其死因。傳統的硅藻形態學檢驗方法有強酸消化法、微波消解法、酶消化法等。其中微波消解-濾膜富集-掃描電鏡聯用法［1］憑借其高硅藻回收率、定性定量分析準確的優點，在疑難案件分析中得到了廣泛應用，但成本較高、操作復雜的特點，限制了其在公安基層單位的普及。同時，由于形態學方法對專業知識有較高的要求，常出現假陽性或假陰性的結果，造成不良影響。隨著分子生物學技術的不斷發展，浮游生物多樣性的研究有了新的進展。如今，以水中浮游生物的DNA標記為檢測對象，把高通量測序技術應用到浮游生物多樣性研究中，建立了浮游生物多樣性的高效檢測技術，這種方法簡單、快捷、通量高且成本低。本文就浮游生物中藻類及細菌的高通量測序及分子生物學檢測的研究作一綜述。

1 藻類的研究

1.1 高通量測序法檢測藻類研究

硅藻屬于真核生物，科屬種類繁多，具有環境選擇性。EGI和EG2，SK1和SK2屬于硅藻葉綠素相關基因，人體組織中不存在，可用來建立浮游生物檢測方法以診斷溺死。Sumiko 發現編碼EG1 和EG2 相關基因可以得到五種海水硅藻屬的PCR 產物，而SK1 和SK2 基因只能得到部分中心硅藻綱的PCR 擴增產物。同時，該方法可以檢測到5mL 血液中的所含藻類。該實驗表明利用EG相關基因作為標記分子所建立的PCR 檢測方法，可以鑒別較多種類淡水的硅藻，適用于淡水溺死案件的診斷。……